1、ICS 67.050 X 10 中华人民共和国国家标准GB/T 23750-2009 植物性产品中草甘麟残留量的测定气相色谱-质谱法Determination of glyphosate residues in plant products一GC-MS method 2009-05-13发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2009-08-0 T实施发布GB/T 23750-2009 JJIJ吕本标准等同采用了AOAC官方方法2000.05(作物中草甘腾及氨甲基麟酸的测定。本标准在技术内容上与该方法一致，经验证后，按GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第
2、4部分:化学分析方法对AOAC官方方法2000.05的个别内容作了编辑性修改。本标准的附录A和附录B均为资料性附录。本标准由中国标准化研究院提出并归口。本标准起草单位z中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海市质量技术监督局、中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。本标准主要起草人z李波、郭德华、卫锋、陈家华、谢燕、杨锡全、倪旦红、韩丽。I 范围植物性产品中草甘麟残留量的测定气相色谱质谱法G/T 23750-2009 本标准规定了植物性产品中草甘麟(PMG)及其降解产物氨甲基腾酸(AMPA)残留量的气相色谱质谱测定方法。本标准适用于粮谷(大豆、小麦)、水果甘煎、柑橙)等植物产品中草甘腾及其降解产物
3、氨甲基麟酸残留量的检测和确证。本标准的定量限(LOQ):0. 05 mg/kg o 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注目期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本。凡是不注目期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5009. 3-2003 食品中水分的测定3 原理样品用水提取，经阳离子交换柱(CAX)净化，与七氟丁醇(HFB)和三氟乙酸所(TFAA)衍生化反应后，用气相色谱一质谱联用仪测定，外标法定量。4 试剂和材料除另有规定外，所用试剂均为分析纯，
4、水为去离子水。4. 1 乙酸乙醋z色谱纯。4.2 甲醇z色谱纯。4.3 二氯甲烧。4.4 盐酸。4.5 磷酸二氢梆(KHzP04)0 4.6 三氟乙酸所(TFAA):纯度二三99%。4.7 七氟丁醇(HFB):纯度98%。4.8 拧攘瞪:纯度二三95%，色泽呈深棕色时弃用。4.9 酸度调节剂z称取16g磷酸二氢饵溶于160mL水中，加入13.4mL盐酸和40mL甲醇，混匀。4.10 CAX洗脱液z分别量取160mL水、2.7mL盐酸和40mL甲醇，混匀。4.11 0.2%拧棱醒乙酸乙醋溶液:100mL乙酸乙醋中加入200L拧橡醒，混匀，避光冷藏，有效期为1个月。4.12 衍生试剂:三氟乙酸黯(
5、TFAA)-七氟丁醇(HFB)(2十1，体积比)，临用前配制，并于-400C以下的低温冰箱中冷冻保存。4.13 草甘腾标准品:纯度二三98.0%。4. 14 氨甲基腾酸标准品:纯度二三98.0%。4.15 革甘麟、氨甲基腾酸标准储备溶液z分别准确称取适量的革甘麟、氨甲基麟酸标准品于聚乙烯或1 GB/T 23750-2009 聚丙烯塑料瓶中，用水溶解，加2滴盐酸，充分振摇，确保其全部溶解，配制成浓度为1.0mg/mL的标准储备溶液，0oC -4 oC保存，有效期为1年。4. 16 草甘麟、氨甲基腾酸混合标准中间溶液:用水将标准储备溶液(4.15)分别稀释成1.0g/mL、10.0g/mL、100
6、g/mL的混合中间溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料瓶中，0oC -4 oC保存，有效期为6个月。4. 17 草甘麟、氨甲基腾酸混合标准工作溶液:用CAX洗脱液(4.10)稀释混合标准中间溶液(4.16), 分别配制成2.5ng/mL、5ng/mL、25ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、200ng/mL、400ng/mL各级混合标准工作溶液，存放于聚乙烯或聚丙烯塑料管中，0oC -4 oC保存，有效期为3个月，但出现谱峰异常时应考虑重新配制。4.18 CAX交换柱:AG50W-X8(200目-400目), H+ , 0. 8 cm X 4 cm。使用时不采用真空泵抽气，且不得使其干泪。
7、注:可采用商品化的CAX小柱Bio-RadPoly-Prep No. 731-6214 CA 94547 , USA ，或同等性能的其他小柱。5 仪器和设备5. 1 气相色谱甲质谱仪:四极杆质谱仪，配有EI源并具有选择离子功能。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。5.3 旋涡振荡器。5.4 均质器。5.5 旋转蒸发器。5.6 恒温箱或其他恒温加热器。5. 7 回相萃取装置。5.8 离心机:转速二三4000 r/min，配有50mL聚乙烯或聚丙烯离心管、150mL或250mL聚乙烯或聚丙烯离心瓶。5.9 氮气吹干仪。5.10 聚乙烯或聚丙烯具塞刻度试管:15mLo 5. 11 玻
8、璃衍生瓶:4mL，瓶盖内衬聚四氟乙烯垫。6 测定步骤6. 1 试样制备6. 1. 1 大豆、小麦将样品按四分法缩分出约1峙，全部磨碎并通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净的容器内，密封，标明标记，常温保存。6. 1. 2 甘震去皮、切成小段，称取500g，速冻后取出切成细末，混匀，均分成两份试样，装人洁净的容器内，密封，标明标记，0oC ,._. 4 oC保存。6.1.3 柑橙类去皮或核，取可食部分500g，匀浆，均分成两份试样，装人洁净的容器内，密封，标明标记，0oC ,._. 4 oC保存。6. 1.4 水分测定以上制备后的试样先按GB/T5009. 3-2003直接干燥法进行水分
9、测定，并记录水分含量。6.2 试样提取称取25g试样(精确到0.01g)于150mL或250mL聚乙烯或聚丙烯塑料离心瓶中，加水至含水量达到125mL。混匀后浸泡0.5h，高速均质5min，于3500 r/min离心10mino取上清液20mL至J GB/T 23750-2009 50 mL聚乙烯或聚丙烯离心管中(高蛋白质样品，如大豆，加入100L盐酸，旋涡振荡1min，于3 500 r/min离心5min，取上清液15mL至另一50mL聚乙烯或聚丙烯离心管中)，加入15mL二氯甲烧，旋涡振荡2min，于3500 r/min离心5min(高脂肪样品再用二氯甲烧重复1次.2次)，取上清液4.5
10、mL置于15mL聚乙烯塑料具塞刻度试管中，加入0.5mL酸度调节剂(4.9)，混匀，待净化。6.3 净化CAX小柱(4.18)经10mL水活化后，加入1.0mL提取液(6.2)，用0.7mL CAX洗脱液(4.10)淋洗两次，再用13mL CAX洗脱液(4.10)洗脱并收集，洗脱液于400C旋转浓缩至约1mL后用CAX洗脱液(4.10)定容至2.0mL，待衍生。6.4 衍生化取1.6 mL衍生试剂(4.12)于4mL衍生瓶中，加盖后放人-400C以下的低温冰箱中冷冻0.5h后取出f用移液枪在衍生剂液面下缓慢加入50L净化提取液(混合标准工作溶液进行同步同体积衍生), 加盖小心混匀后于900C衍
11、生1h(每15min小心振摇一次)。取出冷却至室温，用氮气吹干，并继续氮吹0.5h。加250LO.2%拧橡醒乙酸乙醋溶液(4.11)溶解残渣，混匀后供GC-MS分析。6.5 气相色谱-质谱测定6.5.1 气相色谱-质谱条件a) 色谱柱:DB-5MS，30mXO. 25 mm(内径)XO. 25m(膜厚)，或相当者;b) 升温程序:800C保持1.5 min，以300C/min升至260oC，保持1min，再以300C/min升至300oC; 0 载气:氮气，纯度二三99.999%，流速1.0mL/min; d) 进样口温度:200oC; e) 进祥方式:无分流进样，0.75min后开阀50 进
12、样量:2L;g) 电离方式:缸，70eV; h) 接口温度:270oC; i) 离子源温度:250oC; j) 溶剂延迟:3.5min; k) 调谐方式:用PFTBA在350m/z650 m/z范围，对414m/z、502m/z、614m/z进行手动调谐，使1.0 ng/mL标准溶液的色谱信噪比二三10: 1; 1) 测定方式:选择离子监测方式(SIM); m) 监测离子:见表1。表1草甘麟和氨甲基麟酸的监测离子及其丰度比名称草甘腾(PMG)氨甲基腾酸(AMPA)6.5.2 气相色谱圄质谱测定监测离子(m/z)612(定量离子)、611、584、460446(定量离子)、372、502监测离子
13、丰度比/%100 : 92 : 66 : 34 100 : 45 : 38 根据样液中被测组分含量，选定浓度相近的标准工作溶液，其响应值均应在仪器检测的线性范围内。对标准工作溶液与样液等体积参插进样测定，外标法定量。在上述色谱条件下，草甘鳞和氨甲基腾酸标准品对应的衍生物选择离子色谱图参见附录A中图A.1。定性测定，样液如果检出色谱峰的保留时间与标准溶液相一致，并且被测样品与标准品的质谱图相似，所选择的全部监测离子均出现;而且之间的丰度比也相一致，相似度在土20%之内时，则可确证此待测物。在上述气相色谱-质谱条件下，氨甲基腾酸的保留时间约为4.5min，草甘腾的保留时间约为5.2 min，质谱图
14、参见附录B中图B.1至图B.2o6.6 空白试验除不加试样外，其余均按上述测定步骤进行。3 G/T 23750-2009 6. 7 结果计算和表述按式(1)分别计算样品中草甘麟和氨甲基鳞酸的残留含量(计算结果需扣除空白值): X; = -:-_:_:_ 一As X c X 1 000 . ( 1 ) 式中zXi试样中草甘腾或氨甲基麟酸的残留含量，单位为毫克每千克(mg/kg); Ai.样液的选择离子色谱图中草甘腾或氨甲基腾酸的峰面积;cs-一一标准工作溶液中草甘腾或氨甲基麟酸的浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); As ._标准工作溶液的选择离子色谱图中草甘腾或氨甲基腾酸的峰面积;c-一最终
15、样液中所代表样品的量，单位为克每毫升(g/mL)。最终样液中所代表样品的量按式(2)计算:、噜4 7-v 吨一一na 人A-v一一-nU F气U一-J-Fhu 一一m-m 一一rlw . ( 2 ) 式中:m一一一样品的取样质量，单位为克(g);V1 -提取液中取出进行CAX柱净化的溶液体积，单位为毫升(mL);V2一一CAX柱净化后取出进行衍生的溶液体积，单位为毫升(mL);V3一一CAX柱净化后的定容体积，单位为毫升(mL);V4一一衍生化后最终的定容体积，单位为毫升(mL)。测定结果以草甘麟和氨甲基麟酸之和表示，保留两位有效数字。7 回收率和精密度7. 1 回收率本方法添加回收率实验数据
16、如下:一-0.05mg/kg:草甘麟，70.0%101%;氨甲基腾酸，72. 6 % 101 % ; 0.50 mg/kg:草甘腾，74.2%106%;氨甲基腾酸，74.6%108%; 2.0 mg/kg:草甘麟，75.0%103%;氨甲基麟酸，80.5%108%。7.2 精密度本方法的相对标准偏差15%。4 附录A(资料性附录)标准品衍生物选择离子色谱图Abundance I 4. 51 400 000 300 000 200 000 100 000 4.51 rnin为氨甲基腾酸55.20 rnin为革甘腾。5.20 GB/T 23750-2009 6.00 t/min 图A.l氨甲基麟酸
17、、草甘麟标准晶衍生物的选择离子色谱图5 GB/T 23750-2009 附录B(资料性附录)标准晶衍生物质谱圈Abundance 612 1 400 000 800 000 584 1 200 000 1 000 000 213 。600 000 400000 200 000 161 188 200 400 TN 图B.l草甘麟标准品衍生物的全扫描质i普图Abundance 446 200 000 100 000 372 150 000 50 000 502 。, 100 200 300 400 500 m/z 图B.2氨甲基麟酸标准晶衍生物的全扫描质谱图6 goNloh的NH筒。华人民共和国家标准植物性产品中草甘麟残留量的测定气相色谱-质谱法GB/T 23750一2009国中告奋中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰印张o.75 字数13千字2009年7月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2009年7月第一版骨定价16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533书号:155066 1-38054 GB/T 23750-2009 打印日期:2009年10月14日
