1、ICS 65. 100 G 25 道昌中华人民共和国国家标准GB/T 29567-2013 蝇类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法微量点滴法The bioassay method for flies resistance to insecticides一Topical application method 2013-07-19发布2013-12-06实施血。理叩2，龟a俨注9、川口0:飞j: ，r-:.c1.:二，扒毡, 轨每伊事民咖/ 1;11参幢/ 中华人民共和国国家质量监督检验检菇总局也士中国国家标准化管理委员会&叩目。自本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准由中国国家标
2、准化管理委员会提出。本标准由中国检验检疫科学研究院归口。GB/T 29567-2013 本标准起草单位z中国检验检疫科学研究院、军事医学科学院疾病预防控制所、中华人民共和国辽宁出入境检验检疫局。本标准主要起草人z张顺合、杨振洲、王林、张乐、史慧勤、石华、张晓龙、慈颖。I 1 范围蝇类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法微量点滴法本标准规定了蝇类成虫对杀虫剂抗药性的微量点滴测定方法。GB/T 29567-2013 本标准适用于蝇类成虫对触杀型杀虫剂的抗药性监测和群体抗药性程度的测定。2 术语和定义2. 1 2.2 2.3 2.4 下列术语和定义适用于本文件。抗药性resistance to iosec
3、ticides 某蝇种的某些群体对某种杀虫剂的耐受量较诙蝇种的敏感群体明显增高的能力。半数致死剂量median lethal do吨eLD50 杀死测试蝇群体中50%的个体所需要的杀虫剂剂量。半数致死浓度median lethal conce.tration LC50 杀死测试蝇群体中50%的个体所需要的杀虫剂放度。抗性系鼓rtlsistant iodex 抗性群体的半数致死剂量或半数致死浓度的值(R)与敏感群体的半数致死剂量或半数致死浓度的值(5)二者之比值(R/$)。2.5 微量点滴法topical application method 用微量进样器将一定剂量的杀虫剂直接点滴到测试蝇的中胸
4、背板，依据剂量与效应关系得出抗性系数，用以判断成蝇对杀虫剂的抗药性。3 测定方法3. 1 试虫3. 1. 1 测试蝇在被测定区域或场所采集测试蝇种的成虫，经实验室养殖1代，选择羽化后第3天第4天的正常雌蝇。3.1.2 敏感蝇实验室养殖的、世代未接触过杀虫剂的同种蝇的群体作为敏感性群体，选择羽化后第3天第4天GB/T 29567-2013 的正常帷蝇。3.2 养殖与测试环境条件温度(26士1).C，相对湿度(60士10)%，光周期L:D=14h: 10h. 3.3 器具测定过程所需器具主要有za) 天平(感量为0.0001 g); b) 50 mL具备瓶塞的锥形瓶，1mL、2mL , 5 mL分
5、度移液管，1L、2L微量进样器;c) 计数器，3号昆虫针，恢复容器，饲喂用具，试虫盛放容器，冰排，COz钢瓶。3.4 试剂和杀虫剂丙酣(分析纯)、乙醋、白糖、奶精、测试杀虫剂标准品或经标定的原药。3.5 测定步骤3.5. 1 测试杀虫剂配制精确称量杀虫剂标准品或经标定的原药，用丙酣溶解配制成一定浓度(质量浓度)的母液，然后按等差或等比浓度梯度从高至低依次用丙酣稀释成5个或7个浓度系列，分别装人已标记的锥形瓶内备用。3.5.2 恢复容器准备按照3.5. 1中杀虫剂稀释浓度数和各浓度的重复数准备相应数量的清洁容器，分别标记对照和各浓度组。在容器内为蝇的恢复提供适量饲料和水。3.5.3 试虫麻醉将供
6、试蝇用COz轻度麻醉后，挑选健康雌蝇，每25只为一组放在容器中，然后置于冰排上。3.5.4 微量点滴3.5.4.1 用微量进样器吸取丙圃，按1L/只的剂量点滴于对照组蝇中胸背板中央。将点滴后的蝇放入恢复容器中，用纱布扎紧容器口。3.5.4.2 用微量进样器按从低至高的浓度顺序分别吸取药液，对相应的试虫组进行点滴，方法同3.5.4.1。3.5.5 恢复观察3.5.5. 1 点滴完成24h后将对照组和各浓度组死虫数计数。3.5.5.2 死亡判断z凡腹部上翻，6足抽擂，用昆虫针触之不能翻身或爬行者判定为死亡。3.5.6 重复实验同一个实验重复3次，并设对照。3.6 结果统计3.6.1 测试组有效死亡
7、率范围死亡率最低浓度组应在5%至20%之间，最高浓度组应该在80%至95%之间。2 GB/T 29567-2013 3.6.2 死亡率校正若对照组死亡率大于20%，应重新测试;若对照组死亡率在5%至20%之间，测试组死亡率用Abbott公式校正，计算按照式(1)进行。式中zM一-校正死亡率，%;A二一对照组试虫存活百分率，%;B-二处理组试虫存活百分率，%。3.6.3 统计方法A-B M=HA一X100% . ( 1 ) 将3次的实验数据进行2检验，差异不显著时将3次的实验数据取平均值，按机值分析法计算LDso年g/虫)或LCso(%)值、毒力回归线及其95%可信限。差异显著时(PO.O日，重
8、做或补充试验。3.6.4 抗性系数计算抗性系数计算按照式(2)进行。I=3 式中zI一一抗性系数zR-一测试群体的LDso(p.g/虫)或LCso(%)值;S一一敏感群体的LDso(g/虫)或LCsoC%)值。. ( 2 ) 的-ON-smmNH阁。华人民共和国家标准蝇类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法微量点滴法GB/T 29567-2013 国白* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里满北街16号。00045)网址总编室:(010)64275323发行中心以010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 开本880X 1230 1/16 印张0.5字数6千字2013年9月第一版2013年9月第一次印刷4降书号:155066.1-47401 14.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107定价GB/T 29567-2013 打印日期:2013年9月22日F002
