1、ICS 67120B 45中华人民共和国国家标准农业部958号公告一62007猪可食性组织中地塞米松残留检测方法高效液相色谱法Higll performance liquid chromatographic method for the determination ofdexamethasone residue in pig edible tissues20071229发布 20080301实施中华人民共和国农业部发布刖 嚣本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准由华中农业大学负责起草。本标准主要起草人：袁宗辉、陈冬梅、陶燕飞、王玉莲、黄玲利、彭大鹏、刘振利、
2、戴梦红。本标准系首次发布的农业标准。1范围农业部958号公告一62007猪可食性组织中地塞米松残留检测方法高效液相色谱法本标准规定了猪肌肉和肝脏中地塞米松残留检测的制样和高效液相色谱测定方法。本标准适用于猪肌肉和肝脏中地塞米松残留量检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 112000标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写规则(ISOIEC Direct
3、ives，Part 3，1997，Rules for the structure and drafting of International Standards，NEQ)GBT 6682 1992分析实验室用水规则和试验方法农业部农牧发200331号兽药残留试验技术规范(试行)3制样31样品的制备取适量新鲜或冷冻空白、供试组织，去除筋膜，绞碎，以5 000 rrain均质5 rain。32样品的保存20以下贮存备用。4测定方法41方法提要或原理试料中残留的地塞米松，用酶水解，乙腈提取，固相萃取柱净化，供高效液相色谱(紫外检测器)测定，外标法定量。4 2试剂和材料以下所用的试剂，除特别注明者外均
4、为分析纯试剂；水为符合GBT 6682规定的二级水。4 21地塞米松标准品：含量99。42 2正己烷。423乙腈：色谱纯。424甲醇：色谱纯。425二氯甲烷。4 2 6 B一葡萄苷酸酶一芳基磺酸酯酶活性：每毫升含有131 000 U 0一葡萄苷酸酶和318 U芳基磺酸酯酶。4 2 7醋酸缓冲液3moLL(pH 5 2)取无水乙酸钠12305 g，加入乙酸25 mL，加水溶解稀释到500 mL。428地塞米松标准贮备液1农业部958号公告62007精确称取地塞米松标准品100 mg，甲醇溶解并稀释成浓度为100 nagL的标准贮备液，于一20以下保存，有效期1个月。4 2 9地塞米松标准工作液精
5、确移取地塞米松标准贮备液适量，用流动相稀释，使地塞米松浓度分别为5 pgL、10 tgL、20肛gI，、40 pgL、80 tgL、160 pgL、320 tgL，随配随用。43仪器及设备4 3 1高效液相色谱仪(配紫外检测器)。4 32分析天平：感量0000 01 g。433匀浆机。434离心机。435旋涡混合器。436超声波清洗机。4 3 7固相萃取装置。438固相萃取柱HLB：60 mg3 mL。44测定步骤4 4 1试料的制备试料的制备包括：取均质后的供试样品，作为供试试料。取均质后的空白样品，作为空白试料。442提取称取均质肌肉10 g士005 g或肝脏5 g士005 g，置50mL
6、带盖离心管中，加3moLL醋酸缓冲液10 m1，旋涡混合5 min10 rain。加p一葡萄苷酸酶一芳基磺酸酯酶50止，混匀，60水浴1 h，冷却至室温。加乙腈10mI。，混匀，4 200 rmin离心20min。取上清液，于残渣中加乙腈10mL混匀，离心。合并两次提取液。443净化提取液中加正己烷10 mI。，二氯甲烷2 mL，混匀30 s，4 200 rrain离心10 min。移取中间层(乙腈和二氯甲烷层)，40。C旋转蒸至约05 mL，用乙腈4 mL分两次洗瓶，合并洗液，4CC50下氮气吹干。乙腈05 mL溶解，加水10 ml，混匀。依次用甲醇5mL，水5mL活化固相萃取柱，提取液过柱
7、，水4mL洗涤离心管，过柱。依次用水5mL、甲醇水(2080，VV)5mL和正已烷5mL淋洗萃取柱，抽2min至干，用甲醇2mL洗脱。洗脱液于4050下氮气吹于，流动相05 mL溶解残渣，待HPI。C测定。444标准曲线绘制准确量取适量标准溶液，由低浓度到高浓度依次检测，每个浓度重复3次。将每批测得的峰面积与对应浓度拟合，绘制标准曲线。445测定4 4 5 1色谱条件色谱柱：Cm250 mmX46 mm(id)，粒径5m，或相当者。流动相：乙腈水(5050；VV)。流速：10 mLrain。检测波长：240 nlTl。柱温：30。2农业部958号公告_62007进样量：100 btL。4452
8、色谱测定取试样溶液和相应的标准溶液做单点或多点校准，按外标法，以峰面积定量，即得。地塞米松标准溶液和试样溶液的液相色谱图参见附录A。4 46空白试验除不加试料外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。45结果计算和表述试料中地塞米松的残留量(弘gkg)，按式(1)计算： x一群(1)式中：X试料中地塞米松残留量，“gkg；A试样溶液中地塞米松的峰面积；As标准工作液中地塞米松的峰面积；Cs标准工作液中地塞米松的浓度，,gL；、，溶解残余物所得溶液体积，mL；w组织样品质量，g。5检测方法灵敏度、准确度、精密度51灵敏度本方法在猪肌肉组织中检测限为075 pgkg，定量限为1 pgkg，在猪肝脏组
9、织中检测限为1 ogkg，定量限为20,gkg。52准确度本方法在猪肌肉组织和肝脏组织中o75弘gk80 vgkg添加浓度的回收率为60120。53精密度本方法的批内和批间变异系数CV、25。3农业部958号公告62007mAU32 521 50 50加5mAU1412108642O附录A(资料性附录)地塞米松高效液相色谱图图A 1地塞米松标准工作液色谱图5 0孵L)0 2 4圈A 2猪肌肉空白色谱图mAU14121086420IllAU2015105O农业部958号公告620070 10 12 14图A 3猪肌肉添加药物色谱圈(0 75gkg)4 10 12 14图A 4猪肌肉添加药物色谱图(1 5 Bgkg)农业部958号公告620076mAU35302520151050lnAU20151050图A 5猪肌肉添加药物色谱BB(3 Igkg)0 2 4图A 6猪肝脏空白色谱图mAU2015105O农业部958号公告620070 10 12 14图A 7猪肝脏添加药物色谱图(2 I曙kg)0 10 12 14 16图A 8猪肝脏添加药物色谱图(4峭kg)枷加”m，o80 10 12 14图A 9猪肝脏添加药物色谱图(8肛gkg)枷加=2m，o
