1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 20741-2006 畜禽肉中地塞米松残留量的测定液相色谱-串联质谱法Method for the determination of dexamethasone residues in livestock and poultry muscles一LC-MS-MS method 2006-四-31发布2007-03-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检捷总局也士中国国家标准化管理委员会战W前言本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。
2、本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。GB/T 20741-2006 本标准主要起草人:庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、吴艳萍、李金、连玉晶、林忠。本标准系首次发布的国家标准。I 1 范围畜禽肉中地塞米松残留量的测定夜相色谱，串联质谱法GB/T 20741-2006 本标准规定了牛肉、猪肉、羊肉和鸡肉中地主运?L残留量的被相色谱-串联质谱测定方法。本标准适用于牛肉、猪肉、羊肉利捣臼申地塞米1世残留莹的测定。本标准的方法检出限:O. 2 2 规范性引用文件下列文件中的条的修改单(不包括勘是否可使用这些文GB/T 6379. (GB/T 6379.1
3、GB/T 6379 性与再现性的3 原理动物组织4 试剂和材料水为GB/T6 4. 1 甲醇z色谱纯。4.2 乙腊z色谱纯。CGB/T 实验室用4.3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 甲酸=优级纯。4.5 正己皖:色谱纯。4.6 丙酣z色谱纯。可钱越4. 7 丙自同-正己皖榕液1:丙酬+正己皖4.8 丙酣-正己烧梅液1I:丙酣十正己:皖(4十的。4.9 元水硫酸铀:分析纯。在6500C马弗炉中灼烧6h，贮存于干燥器中。4. 10 氢氧化铀:优级纯。引用文件，其随后所有达成协议的各方研究准。分z总则与定义369目:1987)乙醋提取，提取量。4. 11 氢氧化铀梅液:0.3mol/L。称取12g氢氧化
4、铀，用水洛解，定容至1000 mLo 4. 12 地塞米松和甲基强的松龙标准物质z纯度二三99%。4. 13 地塞米松标准储备溶液:1. 0 mg/mL。准确称取100mg地塞米松标准物质，用甲醇擂解，定容至100mL。配成的标准储备液可在祖度低于一200C冰箱中保存三个月。4. 14 甲基强的松龙标准储备榕液:1.0 mg/mL。准确称取100mg甲基强的松龙标准物质，用甲醇梅G/T 20741一2006解，定容至100mL.配成的标准储备准可在温度低于-20.C冰箱中保存三个月。4咱15地事米松标准工作陪液z吸取适量的地塞米松标准储备榕液，用甲醇分别配成5g/mL和0.050g/mL两种浓
5、度的标准工作榕瓶。配成的标准工作擂液可在温度低于一20.C冰箱中保存一个月。4. 16 地塞米松基质标准工作梅液:分别吸取适量的地塞米松标准工作榕攘，用空白样品提取液分别配戚踉度分别为1.0 ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL、50.0ng/mL的基质标准工作洛液。基质标准工作擂琅应现用现配。4. 17 甲基强的松龙标准工作梅液:吸取适量的甲基强的松龙标准储备蓓攘，用甲醇分别配成5g/mL和O.5月/mL两种被度的标准工作榕辙。配成的标准工作溶掖可在植度低于一20.C冰箱中保存一个月。4. 18 BOND-ELUT Si固相萃取桂或相当者:500mg , 3 mL。使用前用2mL丙
6、嗣+正己煽(2十的预处理，保持桂体温润。4. 19 掠膜:0.20m.5 仪器5. 1 液相色谱-串联质谱仪:配有大气压化学电离源(APCI).5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g. 5.3 被体悟匀器。5.4 固相萃取真空装置。5.5 均质器。5. 6 振菌器。5.7 具塞玻璃离心管:50mL 5.8 真空泵:真空度应达到80kPao 5.9 离心机。5. 10 旋转蒸发器。5. 11 氯气撒缩仪。5. 12 样品管:10mL。5. 13 梨形瓶:150 mLo 5. 14 筒形漏斗。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约1kg，充分搅碎，棍匀，均分成
7、两份，分别装入洁净容器内。密封作为试样，注明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。6. 2 试样保存将试样于一18C冷谅保存。7 测定步骤7. r 提取称取5g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞进璃离心管中，加入O.5g/mL内标甲基强的松龙( 6-alpha-rr时hylprednsolone)标准工作榕液20L，加入10mL O. 3 mol/L氢氧化铀榕攘，在蔽体棍匀器上1昆勾1min, to 20 mL乙酸乙醋，用均质器均质1min，在振葫器振荡20min，以3000r/min离心5 min.取上清被过盛有25g元7(硫酸铀的筒形漏斗至梨形瓶中
8、。再用20mL乙酸乙醋提取一次，过无GB/T 20741-2006 水硫酸铀筒形漏斗，合并上清椒，用旋转蒸发器子450C水插上减压蒸发至近干，用1mL乙酸乙醋和5 mL正己烧潜解。7.2 净化将提取?在移至经预处理的BOND-ELUTSi固相萃取柱中，用2mL丙酣十正己烧(4+6)洗搔梨形瓶和萃取柱，弃去全部流出蔽。在65kPa的负压下，减压抽干1min，用6mL丙酣+.E己烧(4+6)以3 mL/min流速搅脱，收集洗脱掖于10mL样品管中，用氯气被捕仪吹干，用1mL流动捆溶解，过0.20m臆膜，供蔽相色谱串联质谱仪测定。7.3 测定7.3. 1 液榈色谱条件且)色i普柱:Atlantis
9、dC18 ，3m，150 mmX 2.1 mm(内径)或相当者;b) 流动相z乙腊十0.1%甲酸7.)(50十50);c) 流速.200L/min;d) 桂温:300C ; e) 进样量:20L。7.3.2 质谐条件a) 离子拥:大气压化学电离掘(APCI); b) 扫描方式:正离子扫描;c) 检测方式:多反应监测;d) 雾化电流:3.00A;的气帘气压力:0.138MPa; f) 雾化气压力:0.276MPa; g) 辅助加热气压力:0.138MPa; h) 离子掘温度:2500C;i) 定性离子对，定量离子对，去簇电压和碰撞能量见表10表1地塞米松和甲基强的松龙的质惜参数名称定性离子对(m
10、/z)定量离子对Cm/z)去簇电压/V碰撞能最/V393.2/373.2 21 14 地塞米松393. 2/355. 2 393.2/373.2 21 17 375. 2/161. 2 16 2日甲基强的松龙375. 2/339. 2 375.2/161. 2 16 9 7. 3. 3 在相色i普串联质i昔测定在仪器最佳工作条件下，采用内标法进行定量删定，内标为甲基强的松龙，为陆少基质的影响，定量采用基质标准工作洛液进样，样品溶被中地塞米松的响应值应在仪器测定的线性范围内。地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流圈参见圈A.1。在上述色谱条件和质谱条件下，地塞米松和甲基强的松龙参考保留时间见表2
11、0表2地塞米松和甲基强的松龙的参考保留时间名称保留时闭/min地塞米松3. 75 甲基强的松龙3.48 本方法的添加回收率数据参见附录Bo3 GB!T 20741-2006 7. 4 平行试验按以上步骤，对同一试悴进行平行试验删定。7.5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8 结果计算制定结果可由计算机按内标法自动计算，也可搜式(1)计算:x = c. X X _s_ x i X V X r_ ()(一;:X-X一一一. . . . ( 1 ) 八A(C-bm二，A; m 1 000 式中iX一一试样中被测物残留C，一一基质标准工作榕A一一试样洛液中A , -基质标准工Ci
12、一一基质标Ai一一基质标Ai m-一一一一一-一一-句句咱喻一一一庐卢一一-一-注3计算结果9 精密度9. 1 重复性在重复性扭J陆含量泡围及重名称地塞米松如果是值超过重复性限，9.2 再现性在再现性测定条件下，获得的两次独立松的含量范围及再现性方程见表3，4 和再现性的值1. 035 7lgm-0. 558 3 对差值不超过再现性限R，动物组织中地塞米GjT 20741-2006 附录A(资料性附录)地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图地塞米松和甲基强的松龙标准物质总离子流图，见图A.1，3.75 _L地塞米松1 600 1 550 1 500 1 450 1 400 1 350 1 3
13、00 1 250 1 200 1 150 1 100 1 050 1 000 950 900 850 800 750 700 650 600 550 500 450 400 350 300 250 200 150 100 50 。1 2 3 4 5 6 t/min 圄A.1 地塞米松和ffI基强的松龙标准物质总离子流圄5 GBjT 20741-2006 附录B(资料性附录)回收率本方法牛肉中地塞米松添加放度及其平均回收率的试验数据见表B.L表B.1 地塞米松添加激度及其平均回收率的试验数据药物名称添加浓度/(问/kg)平均回收率/%)O. 2 98. 68 0.4 89. 94 地塞米松1. 0 91. 36 10.0 98. 72 6 goN-shONH阁巳华人民共和国家标准畜禽肉中地塞米松残留量的测定被相色谱-串联质谱法GB/T 20741-2006 国申* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销特印张O.75 字数12千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价10.00元舍书号:155066 1-28925 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533
