1、ICS 67050X 04 蘑园中华人民共和国国家标准GBT 229782008牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of dexamethasone residues in milk and milk powderLC_MSMS method2008-12-31发布 2009-05-0 1实施丰瞀徽鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会捉仲刖 吾GBT 22978-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局提出并归1：3。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检
2、验检疫局。本标准主要起草人：马育松、葛娜、郭春海、段文仲、陈瑞春、吕红英、窦彩云、贾海涛、庞国芳。1范围牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定液相色谱一串联质谱法本标准规定了牛奶和奶粉中地塞米松残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中地塞米松残留量的测定和确证。本标准的方法检出限：牛奶为02 pgkg，奶粉为10 pgkg。2规范性引用文件GBT 22978-2008下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日
3、期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT S37912004，IS0 5725一I：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，ISO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682-2008，IS0 3696：1987，MOD)3原理牛奶和奶粉样品用乙腈提取试样，C-s固相萃取柱净化，液相色谱一串联质谱仪测定，外标法定量。4试剂和材料水为GBT 6
4、682规定的一级水。41甲醇：色谱纯。42乙腈：色谱纯。43甲酸：优级纯。44 01甲酸溶液：移取1 mL甲酸(43)于装有约800 mL水的1 L容量瓶中，用水定容至刻度并混匀。45地塞米松标准物质(CAS：50052)：纯度大于等于99。46地塞米松标准储备溶液：准确称取100 mg地塞米松标准物质(45)，用甲醇溶解并定容至100 mL，配成浓度为10 mgmL的标准储备液。该溶液在4保存。47 地塞米松标准工作溶液：吸取适量的地塞米松标准储备溶液(46)，用甲醇配成1tgmL和01,ugmL两种浓度的标准工作溶液。该溶液在4保存。48地塞米松基质标准工作溶液：根据需要吸取适量的地塞米松
5、标准工作溶液(4。7)，用空白样品提取液稀释成适当浓度的基质标准工作溶液，临用前配制。49 C，。固相萃取柱：500 mg，3 mL。使用前分别用3 mL乙腈和3 mL水预处理，保持柱体湿润。410滤膜：022 pm。5仪器与设备51液相色谱一串联质谱仪：配有大气压化学电离源(APCI)。】GBT 22978-200852分析天平：感量01 mg和001 g。53涡旋混匀器。54固相萃取装置。55具塞塑料离心管：50 mL。56真空泵：真空度应达到80 kPa。57离心机。58旋转蒸发器。59氮气吹干仪。510样品管：lOmL。511梨形瓶：150mL。6试样的制备与保存61牛奶取均匀样品约2
6、50 g装入洁净容器作为试样，密封置4下保存，并标明标记。62奶粉取均匀样品约250 g装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。7测定步骤71提取711牛奶样品称取10 g试样(精确到001 g)置于50 mL具塞塑料离心管中，加入20 mL乙腈，涡旋混匀1 min，以5 000 rmin离心10 min，取上清液至梨形瓶中。用旋转蒸发器于45水浴上减压蒸发，将提取液浓缩至体积小于5 mL。712奶粉样品称取2 g试样(精确到001 g)置于50 mL具塞塑料离心管中，加入10 mL水涡旋30 S混匀，以下操作同牛奶样品。72净化将提取液移至经预处理的C，。固相萃取柱中，用5 mL水洗涤梨形瓶
7、和萃取柱，弃去全部流出液。在65 kPa的负压下，减压抽干1 rain，用5 mL乙腈以小于等于3 mLmin流速洗脱，收集洗脱液于10 mL样品管中，在45水浴中用氮气吹干，用050 mL流动相溶解残渣，经022 p-m滤膜过滤后供液相色谱一串联质谱仪测定。73测定条件731液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a) 色谱柱：Inertsil ODS一3 C18，5 pm，150 mmX 21 ram(内径)或相当者；b)流动相：乙腈+01甲酸溶液(1+1)；c) 流速：200,o-Lmin；d)柱温：40；e)进样量：20 pL。732质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：大气压化学电
8、离源(APCI)；b)扫描方式：正离子扫描；2GBT 22978-2008c)定性离子对(mz)：39323732，39323552；d)定量离子对(mz)：39323732；e)喷雾压力：11410j Pa；f) 干燥气体流量：5 LmLn；g)干燥气体温度：250；h) 大气压化学电离源蒸发温度：250；i) 电晕电流：4 000 nA；j)毛细管电压：1 500 V。733液相色谱一串联质谱测定7331定性测定样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的混合基质标准校准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表1规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表1 定性确证
9、时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50 20K50 10K20 K，10允许最大偏差 土20 士25 士30 ：d：507332定量测定在上述色谱条件下，用6个不同浓度的地塞米松基质标准工作溶液分别迸样，以基质标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中地塞米松的响应值应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，地塞米松的参考保留时间为34 min。地塞米松的选择离子流图参见附录A中的图A1。本方法的添加回收率数据参见附录B中的表B1。74平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取试样外
10、，均按上述步骤同时完成空白试验。8结果计算地塞米松残留量利用数据处理系统计算或按式(1)计算：xcxm-V xrl=000uuum 式中：x试样中地塞米松残留量，单位为微克每千克(ffgkg)；c从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)v试样溶液定容体积，单位为毫升(mL)；m最终试样溶液所代表的试样质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，重复性和再现性的值以95的可信度来计算。3GBT 22978-200892重复性在重复性测定条件下，获得的两次独立测试结果的
11、绝对差值不超过重复性限(r)，牛奶和奶粉中地塞米松添加浓度范围及重复性方程见表2。表2添加浓度范围及重复性和再现性方程 单位为毫克每千克样品基质 鹾加旅度范围 重复性限r 再现性限R牛奶 o210 r一0 103 om+o016 1 R一0268 lm+0018 0奶粉 1010 lg r=0265 5lgm一0613 5 lgR一0846 0Igm一0361 3注：仇为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9，3再现性在再现性测定条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，牛奶和奶粉中地塞米松的添加浓度范围及再现性方程见
12、表2。附录A(资料性附录)地塞米松标准物质选择离子流图地塞米松标准物质选择离子流图，见图A1。型_lLGBT 22978-2008一 393 2373 2Ltrain圉A1 地塞米松标准物质选择离子流图8642避斗咖咖。8642GBT 22978-2008附录B(资料性附录)回收率本方法中地塞米松添加浓度及其回收率范围的试验数据，见表R】。表B1 地塞米松添加浓度及其回收率范围的试验数据样品基质 添加浓度(pgkg) 回收率范围02 70o110oo5 75o105 o牛奶1o 78O99010o 803104,o10 65o95o2o 65o95o奶粉5o 75oi00010。0 78O-9706
