1、ICS 67.050 X 04 中华人民主f工J庐飞、和国国家标准GB/T 20744-2006 蜂蜜中甲硝睡、洛硝口达睡、二甲硝咪瞌残留量的测定液相色谱m串联质谱法Method for the determination of metronidazole ronidazole and dimetridazole residues in honey一LC-MS-MS method 2006-12-31发布中华人民共和国国家质量监督检验检亵总局中国国家标准化管理委员会2007-03-01实施发布前言本标准的附录A和附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本标准由中华
2、人民共和国国家质量监督检验检疫总局归口。本标准起草单位:中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、山东农业大学。GBjT 20744-2006 本标准主要起草人:庞国芳、刘永明、曹彦忠、范春林、张进杰、李学民、吴艳阵、李金、连玉晶、林忠。本标准系首次发布的国家标准。I GB/T 20744-2006 蜂蜜中甲硝瞠、洛硝日达略、二甲硝眯瞠残留量的测定1 范围本标准规定了蜂蜜中甲硝睡、本标准适用于蜂蜜中甲硝本标准的方法检出限:2 规范性引用文件下列文件中的的修改单(不包CGB/T 6379. 1 GB/T 637 性与再现性的3 原理蜂蜜中三串联质谱仪测定4 试剂和材料?/.为GB/T66 4. 1
3、甲醇:色谱纯。4.2 乙腊:色谱纯。4.3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 甲酸:优级纯。液相色谱-串联质谱法4.5 无水硫酸铀:分析纯。在65咆吗J炉中灼烧6h，贮存4.6 洗脱剂:甲醇+乙脯十0.1%甲酸水4. 7 甲硝瞠、洛硝贴略、二甲硝眯盹标准物质z纯度注98%。相色谱-串联质i普视IJ定方法。咪咄检出限均为O.2g/kgo |用文件，其随后所有成协议的各方研究准。1，部分:总则与定义准测量方法重复1987) 净化，液相色谱-4.8 甲硝哇、洛硝盹啤、二甲硝咪瞠标准储备溶被:1. 0 mg/mLo准确称取适量的甲硝瞠、恪硝帖睡、二甲硝眯也标准物质，分别用甲醇配成标准储备液。储备液在低于40C
4、时可保存两个月。4.9 甲硝啤、洛硝贴瞠、二甲硝眯睡?昆合标准工作榕掖A和B.根据需要吸取适量甲硝嗖、洛硝帖睡、二甲硝咪咄标准储备梅液，用甲醇稀释成甲硝咀为1.0g/mL，洛硝贴I峰和二甲硝眯哇均为2.0g/mL的1昆合标准工作梅液Ao再吸取适量?昆合标准工作洛液A用甲晖稀释成甲硝略为0.010g/mL.洛硝贴哗和二甲硝眯盹均为0.020g/mL的?昆合标准工作榕液Bo昆合标准工作榕在A和B应现用现配。4. 10 甲硝瞠、梅硝贴也、二甲硝眯瞠?昆合基质标准工作陪破:根据需要吸取适量甲硝睡、洛硝脏l些、二G(T 20744-2006 甲硝咪l堕由合标准工作梅班A和B，用空白样品提取液稀释成被度分
5、别为0.25ng/mL、0.50ng/mL、1.00 ng/mL、5.00吨/mL的1昆合基质标准工作溶液。?昆合基质标准工作禧液应现用现配。4. 11 BAKERBOND Carboxylic Acid固相萃取柱或相当者:500mg , 3 mL。使用前用4mL乙酸乙醋预处理，保持柱体湿润。4. 12 臆膜:0.20m，5 但器5. 1 被相包谱呵串联质谱仪:配有电喷雾离子掘。5.2 分析天平:感量0.1mg和O.01 g 0 5.3 液体?昆匀器。5.4 固相革取真空装置。5.5 振荡器。5.6 具塞玻璃离心管:50mL 5. 7 真空泵:真空度应达到80kPa。5 8 离心机。5.9 旋
6、转蒸发器。5. 10 刻度样品管:5mLo 5. 11 梨形瓶:150 mL。5.12 筒形漏斗。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过600C的水浴中强热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室泪。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。7 测定步骤7. 1 提取称取10g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞玻璃离心管中，加入10mL水，在液体由匀器上海匀，加20mL乙酸乙醋，于振荡器上振荡20min，以3000r/min离心5min，取上清液过
7、盛有25g无水硫酸饷筒形漏斗至梨形瓶中。再用20mL乙酿乙醋提取一次，过无水硫酸铀筒形漏斗，合并上清液，用旋转蒸发器于4SC水踏上减压蒸发至约2mL，待净化。7.2 净化将上述撒缩被移至CarboxylicAcid固相萃取柱中，再分别用4mL乙酸乙醋和4mL乙睛洗涤梨形瓶租萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，喊压抽干萃取柱2min，用2mL搅脱剂以3 mL/min流速洗脱，收集洗脱液于5mL刻度样品管中，用搅脱剂定容至2mL，过0.20m滤膜，供榄相色谱串联质谱仪测定。7. 3 测定7. 3. 1 班帽色i营条件2 。色i昔柱:Atlantis dC18 ，3m，150 mmX2.1
8、 mm(内径)或相当者;b) 疏动相z乙腊十0.1%甲酸水(30+70); c) 流速:200L/min;d) 柱温:30C ; 的进样量:20L。7.3.2 质谱条件a) 离子晴、z电喷雾离子摞(ESD;b) 扫描方式:正离子扫描;c) 检测方式:多反应监测;d) 电喷雾电压:5 500 V; 的雾化气压力:0.069MPa; b 气帘气压力:0.069MPa; g) 辅助气流速:6L/min; h) 离子拥温度:700C;i) 定性离子对，定量离子对，去族电压和碰撞能量见表1 表1三种硝基咪瞠药物的质i普参数中文名称英文名称定性离子对Cm/z)定量离子对(m./:;:)172. 1/128
9、. 1 甲硝瞠metronidazole 172.1/128.1 172.1/82.1 洛硝盹瞠ronidazole 20 1. 1/140. 2 20 1. 1/140.2 20 1. 1/110. 1 142.2/96.1 二甲硝眯瞠dimetridazole 142.2/96.1 142.2/81. 2 t 7.3.3 施相色谱，串联质谱测定G/T 20744-2006 去簇电压/v碰撞能量/V30 19 30 34 26 14 26 20 40 22 40 40 在仪器最佳工作条件下，用甲醋瞠、洛硝贴睡、二甲硝眯啤泪合基质标准工作陪掖分别进样，以峰面积为纵坐标，1昆合基质标准工作梅液被
10、度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品榕被中甲硝啤、洛硝咄咄、二甲硝咪膛的响应值均应在仪器测定的线性范围内。甲硝啤、梅硝H达I强、二甲硝眯睡标准物质总离子流图参见图A.l。在上述色谱条件和质谱条件下，甲硝咄、洛硝陆嗤、二甲硝咪盹的参考保留时间见表2.表2三种硝基眯瞠药物的参考保留时间中文名称保留时间/min甲硝腔2.80 洛硝险盹3. 12 二甲稍眯也3.57 本方法的添加回收率数据参见附录B。7.4 平行试验投以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 空臼试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8 结果计算结果按式(1)计算z3 G/T 20744-20
11、06 AU-AU HUXU AU-nu -i v-m 一X . ( 1 ) 式中:X一一试样中被测组分残留量，单位为微克每千克(g/kg);C一一从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ng/mL); V一一-样品洛液最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一样品洛液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。法:计算结果应扣除空白值。9 精密度本标准的精密度数据是按确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性视定条件d硝咄咄、二甲硝眯咄含r。蜂蜜中甲硝I哇、洛-0.5884 0.788 1 9.2 再现性在再现性测硝盹略、二甲硝蜜中甲硝睡、洛4 GB/
12、T 20744-2006 附录A(资料性附录)标准物质总离子流图甲硝I哇、洛硝盹i哇、二甲硝咪嗤标准物质总离子流图，见图A.L二甲硝眯哇2.3e4 , 甲硝唾3. 57 2. 2.2e4 2.1c4 2.0e4 1. ge4 1. 8e4 1. 7e4 1. 6e4 1. 5e4 1. 4e4 1. 3e4 1. 2e4 1. le4 1. Oe4 9000.0 8000.0 7000.0 6000.0 5000.0 4000.0 3000.0 2000.0 1 000.0 0.0 l 2 3 4 5 6 7 B 9 t/min 圈A.1 甲硝睡、洛硝盹瞄、二甲硝咪睡标准物质总离子流固5 GB
13、/T 20744-2006 6 附录B(资料性附录)回收率本方法中甲硝也、洛硝咄咄、二甲硝眯瞠添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B.1o表B.1甲硝睡、洛硝皑皑、二甲硝眯咄添加激度及其平均回收率的试验挝据药物名称添加浓度!阅/kg)平均回收率/c%)0.05 76.0 O. 10 79. 0 甲硝随0.20 77.0 1. 00 82.4 O. 10 69.5 O. 20 78.5 洛硝险哦0.40 73. 9 2. 00 71. 7 O. 10 75.6 0.20 74.9 二甲硝眯哗0.40 75.4 2. 00 81. 7 SON-叮叮hONH阁。华人民共和国家标准蜂蜜中甲硝醋、洛硝瞌睡、二甲硝咪咄残留置的测定渡相色谱幡串联质谱法GB/T 20744-2006 国中铃中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.75 字数13千字2007年3月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2007年3月第一版定价10.00元9华书号:155066 1-28927 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533GB/T 20744-2006
