1、ICS 67. 180. 10 X 31 号B中华人民共和国国家标准GB/T 18932.26-2005 蜂蜜中甲硝日达睡、洛硝日达睡、二甲硝眯瞠残留量的测定方法液相色谱法Method for the determination of melronidazole, ronidazole and dimelridazole residues in honey-Liquid chromatographic melhod 2005-02-04发布2005皿08-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检亵总局也士中国国家标准化管理委员会战叩GB/T 18932.26-2005 前GB/T 18932本
2、部分的附录A、附录B为资料性附录。本部分由中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局提出。本部分由中华全国供销合作总社归口。本部分起草单位z中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本部分主要起草人z庞国芳、刘永明、曹彦忠、贾光群、范春林、张进杰、李学民、石玉秋。本部分系首次发布的国家标准。I 蜂蜜中甲硝贴睡、洛硝盹瞠、二甲硝咪瞠残留量的测定方法1 范围GB/ T 18932的本部分规定了蜂方法。2 规范性引用文件下列文件中的条件，其随后所有的修协议的各方研究是杏口部分。GB/ T 6379 (GB/ T 6379一19GB/ T 6682 3 原理柱和BAKERBON4 试剂和材料4. 1 甲醇:色谱
3、纯。4.2 乙睛:色谱纯。4.3 乙酸乙醋:色谱纯。4.4 元水乙酸铀z分析纯。4.5 冰乙酸:优级纯。液相色谱法4.6 甲醇+水(5+95):量取5mL甲醇与95mL水混合。GB/T 18932.26-2005 是注日期的引用文，鼓如根据本部分达成复性和再现性98 7) 4. 7 乙酸盐缓冲溶液:0.82g/L。称取0.82g无水乙酸铀，用800mL水溶解，用冰乙酸调节pH至4.3，用水稀释至1L。4.8 洗脱1fIj:甲醇+乙睛十乙酸盐缓冲溶液(40+6+54)。4.9 Oasis HLB固相萃取柱或相当者:500mg , 6 mL。使用前分别用5mL甲醇和10mL 7.K预处理，保持柱体
4、温润。4. 10 BAKERBOND Carboxylic Acid固相萃取柱或相当者:500mg , 3 mL。使用前用5mL乙酸乙醋预处理，保持柱体湿润。GB/T 18932.26-2005 4. 11 甲硝贴略、洛硝皑瞠、二甲硝咪瞠标准物质E纯度二三98%。4. 12 甲硝啦瞠、洛硝贴瞠、二甲硝咪瞠标准储备溶液:1. 0 mg/mL。准确称取适量的甲硝贴瞠、洛硝贴瞠、二甲硝咪瞠标准物质，分别用甲醇配成1.0 mg/mL的标准储备液。储备液可在温度低于4C冰箱中保存二个月。4. 13 甲硝贴瞠、洛硝贴略、二甲硝咪瞠混合标准工作溶液z根据需要吸取适量甲硝盹瞠、洛硝盹瞠、二甲硝咪瞠标准储备搭液
5、，用流动相稀释成适当浓度的混合标准工作溶液，混合标准工作洛液应现用现配。5 仪器5. 1 液相色语仪z配有紫外检测器。5.2 分析天平:感量0.1mg和0.01g各一台。5.3 液体?昆匀器。5.4 固相萃取真空装置。5.5 振荡器。5.6 具塞玻璃离心管:50mL。5. 7 真空泵z真空度应达到80kPa。5.8 离心机。5.9 旋转蒸发器。5. 10 样品管:5mL。5. 11 pH计z测量精度:f:0.02o5.12 梨形瓶:200mL。6 试样的制备与保存6. 1 试样的制备对无结晶的实验室样品，将其搅拌均匀。对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过600C的水浴中温热，振荡，待样品全
6、部融化后搅匀，迅速冷却至室温。分出0.5kg作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。6.2 试样保存将试样于常温下保存。7 测定步骤7. 1 提取称取6g试样(精确到0.01g)置于50mL具塞玻璃离心管中，加入6mL水，在液体混匀器上棍匀，加20mL乙酸乙醋，于振荡器上振荡20min.离心，取上清液至梨形瓶中。再用20mL乙酸乙醋提取一次，合并上清液，用旋转蒸发器于450C水浴上减压蒸发至干，用5mL水榕解，待净化。7.2 净化将上述5mL水溶液移至OasisHLB柱中，以小于等于3mL/min的流速通过Oasis固相萃取柱后，用5mL水洗撮梨形瓶，移至OasisHLB柱中洗柱
7、，再用5mL甲醇+水(4.6)洗柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干20min.将OasisHLB柱下接CarboxylicAcid固相萃取柱，用5mL 乙酸乙醋以小于等于3mL/min的流速洗脱OasisHLB柱并通过CarboxylicAcid固相萃取柱，弃去Oasis HLB柱，分别用5mL乙酸乙醋和5mL乙腊洗涤CarboxylicAcid固相萃取柱，弃去全部流出液。在65kPa的负压下，减压抽干5min.用2mL洗脱剂(4.8)洗脱，收集洗脱液于5mL样品管中，用GB/T 18932.26-2005 洗脱剂定容至2mL，供液相色谱仪测定。7.3 测定7.3. 1 液相色
8、谱条件a)色谱柱:Diamonsil C18 , 5m，250 mmX4. 6 mm(内径)或相当者pb)流动相:乙腊+乙酸盐缓冲溶液(10+90); c)流速:1. 0 mL/min; d)柱温:250C;e)进样量:50L;f)检测波长:315nm。7.3.2 液相色谱测定用甲硝贴瞠、洛硝贴睡、二甲硝咪哇混合标准溶液分别进样，以峰面积为纵坐标，工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中甲硝贴略、洛硝贴略、二甲硝眯略的响应值均应在仪器测定的线性范围内。甲硝咄咄、洛硝贴瞠、二甲硝眯略标准物质色谱图参见图A.1。在上述色谱条件下，甲硝盹瞠、洛硝啦瞠、二甲硝咪瞠
9、的参考保留时间见表1。表1甲硝脏略、洛硝盹睡、二甲硝眯睡的参考保留时间硝基咪瞠类药物名称甲硝隧瞠洛硝贴瞠二甲硝咪嗖本方法的添加回收率数据参见附录B。7.4 平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。7.5 空白试验除不称取试样外，均按上述步骤同时完成空白试验。8 结果计算结果按式(1)计算:式中zX V1000 = c -一.-一一一m 1 000 X一一试样中被测组分残留量，单位为毫克每千克(mg/kg); 保留时间/min12. 7 15.0 21. 2 C一一从标准工作曲线得到的被测组分榕液浓度，单位为微克每毫升(g/mU;V一一样品榕液最终定容体积，单位为毫升(mU;m 样品溶液
10、所代表最终试样的质量，单位为克(g)。注2计算结果应扣除空白值。9 精密度. ( 1 ) 本部分的精密度数据是按照GB/T6379的规定确定的，重复性和再现性的值以95%的可信度来计算。9. 1 重复性在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限(r)，蜂蜜中甲硝贴瞠、洛硝咄瞠、二甲硝咪瞠含量范围及重复性方程见表2。3 GB/T 18932.26-2005 表2含量范围及重复性和再现性方程名称含量范围/(mg/kg)重复性限r再现性R甲硝啦啦0.010-0. 100 r=0.030 3 m+2. 167 3 R=0.080 7 m+ 1. 040 8 洛硝盹嗖0.010-0.
11、 100 r=O. 0608 m午1.872 7 R=O. 062 0 m+ 1. 719 0 二甲硝眯唾0.010-0. 100 r=O. 0627 m+ 1. 441 1 IgR=O. 709 9 19 m一0.4377 注:m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。9.2 再现性在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，蜂蜜中甲硝贴略、洛硝贴略、二甲硝咪略的含量范围及再现性方程见表2。4 附录A(资料性附录)标准物质色谱圄甲硝贴瞠、洛硝贴哇、二甲硝咪瞠标准物质色谱图见图A.L二0.00100 0.00095
12、 0.00090 0.00085 0.00080 o. o. o. o. o. o. o. o. o. o. o. 0.00005 -0.00010 圄A.1GBjT 18932.26-2005 22.00 24.00 I / m;n 5 GB/T 18932.26-2005 6 附录B(资料性附录)回收率本方法中甲硝贴嗖、洛硝贴略、二甲硝咪瞠添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B.1。表B.1 甲硝岖睡、洛硝瞌睡、二甲硝咪睡添加浓度及其平均回收率的试验数据药物名称添加浓度/(mg/kg)平均回收率/(%)0.010 86.27 0.020 87.13 甲硝聪唾0.050 87.35 O. 1
13、00 86. 33 0.010 84.64 0.020 89.38 洛硝防略0.050 82.87 O. 100 87.99 0.010 85. 96 0.020 84.86 二甲硝咪睡0.050 90. 70 O. 100 88.61 的OON-N.N的户问筒。华人民共和国家标准蜂蜜中甲硝皑皑、洛硝瞌略、二甲硝眯瞠残留量的测定方法液相色谱法GB/T 18932.26-2005 国由 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峙印张O.75 字数12千字2005年2月第-次印刷开本880X1230 1/16 2005年2月第一版定价10.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533奇峰书号:155066 1-22373 GB/T 18932.26-2005
