1、中华人民共和国国家标准海洋调查规范海洋生物调查G 12763.6-91 be specification for oc咽nographicsurvey Marlne blo1o回国1survey 1 主题内容与适用范围本标准规定了海洋生物调查的技术要求、采祥、分析及资料整理等内容和方法。本标准适用于海洋环境基本要素调查中的海洋生物调查。2 引用标准GB 2014 蚕丝、合纤筛网技术要求GB 12763.1海洋调查规范总则GB 12763.7海洋调查规范海拌调查资料处理3 术语、符号3.1 叶绿素叶绿素是自养植物细胞中一类很重要的色素，是植物进行光合作用时吸收和传递光能的主要物质。叶绿素a是其中
2、的主要色素。Chla表示海水中的叶绿素a。3.2 初级生产力单位时间内，单位体积海水中(或单位面积海区内)浮游植物同化无机碳的能力。3. 3 生产力指数单位时间内，单位叶绿素a同化无机碳的能力。3.4 微生物一群个体微小、结构简单、生理类型多样的单细胞或多细胞生物。3. 5 细菌异养生长速率异养细菌利用有机物进行生长繁殖的速率。3.6 细菌异养活性异养细菌进行生理代谢活动的能力。3. 7 浮游生物缺乏发达的运动器官，运动能力很弱，只能随水流移动，被动地漂浮于水层中的生物群。3.8 底栖生物生活于海洋基底表面或沉积物中生物的总称。依个体大小，凡被孔宽为0.5mm套筛网目所阻留的生物，称为大型底栖
3、生物。凡能通过孔宽为0.5mm套筛网目，而被孔宽为0.042mm所阻留的生物，称为小型底栖生物。国凉技术监督局1991-03-22批准1992-01-01实施GB 12763.6-91 3. 9 亏损生物生活于船底及水中一切设施表面的生物，这类生物一般是有害的。3.10 游泳动物具有发达的运动器官，能自由游动，善于更换栖息场所的一类动物的总称。第一篇一般规定4 妓术设计根据调查任务进行技术设计，其内容包括设站、项目、内容、方法、时间、次数、预期成果、专业配备、人员素质、船只及器材设备。应特别注重海上采样和室内分析的技术要求和保证措施。5 调查要求5.1 调查项目5.1.1 叶绿素和初级生产力5
4、.1.2 微生物5.1.3 浮游生物5.1.4 大型和小型底栖生物5.1.5 污损生物5.1.6 游泳动物5.2 辅助参数海洋生物调查时，应视需要确定与其有关的专业参数，并同步进行观测。5.3调查方式5.3.1 大面观测5.3.2 断而观测5.3.3 连续观测5.4 采样方法5.4.1 采样适用于叶绿素浓度和初级生产力、微生物、浮游植物等项采祥。按规定水层采样(见表1)。表1采样层次m 水深范围标准层次; ，.，.，.，-. I /，-r-l ._. (D+l - D.) . . . . (3) 式中，p，一一水柱叶绿素a含量，.mgJm2;冉，(Chla)一一第8层叶绿素a浓度，mg/m3J
5、D.一第s层的深度，m，一取样层次数;I王in-l0 12.1.3 计算水柱叶绿萦a平均浓度值GB 12763.6-91 向(Chla)冉(Chla)一D一一式中，p，.(Chla)一水柱叶绿素a平均浓度值，mg/ml;p, (Chla)一一水柱叶绿素a含量，叫1m2;D一一最大取样深度，m，12.2填写海生表7(见附录剧。12.3绘制分布图12.3.1 平丽分布图12.3.1.1 各层次分布图等值线取值标准，0.10，0.20，0.30，0.50，0.75，1.00 ,1. 50 , 2. 00 , 3. 00 , 5. 00 , 10. 00 mg/m , 12.3.1.2 含量分布图.
6、(4 等值线取值标准，1.00 ,1. 50 , 2. 00 , 3. 00 , 5.00, 10.00, 20. 00 , 30. 00 , 50. 00 , 100. 00 , 200. 00 , 300.00,500.00 mg/m气12.3.2 断面分布图等值线取值标准，0.10，0.20，0.30，0.50，0.75，1.00 ,1. 50 , 2. 00 , 3. 00 , 5. 00 , 10. 00 mg/耐。12.3.3 以上取值标准，可视具体情况增减。13 海洋初级生产力(C示踪法)测定13. 1 方法原理一定数量的放射性碳酸氢盐H吨031-或碳酸盐HC032加入到己知二氧
7、化碳总浓度的海水样品中，经一段时间培养，测定浮游植物细胞内有机C的量，即可计算浮游植物通过光合作用合成有机碳的量。13.2 主要仪器设备13.2.1 水下光量子仪、水下照度计或透明度盘。13.2.2 样品培养箱或培养瓶罩用中性衰光材料，将光衰减为100%, 50% , 30% , 10% ，5%和1%。13.2.3 抽滤装置见11.2. 2条。13.2.4 滤膜见11.2. 3条或孔径为0.65m的纤维素醋微孔滤膜。13.2.5 液体闪烁计数仪13.2.6 通风橱13.2.7 振荡器13.3 试剂13.3.1 过滤海水用调查海区的海水，经玻璃纤维或纤维素醋微孔滤膜过滤，盛于干净的试剂瓶和洗瓶中
8、备用。13.3.2 c工作溶液GB 12763.6-91 用过滤海水稀释C贮备液，使放射性强度约为1850 kBq/c时，或视要求而定。13.3.3 闪烁液13.3.4 测总计数闪烁液每10cm闪烁液中加O.2 cm (V /V)苯乙胶圄13. 3. 5 O. 1 mol/dm盐酸13.4 测定步骤13.4.1 萃灭校正方程的确定用一系列(一般6个)C萃灭标准瓶，在液闪计数仪上测定。用直线回归法得出道比求效率的方程。13.4.2 采样深度的确定使用水下光量子仪或照度计，测定水柱中不同深度的光辐射强度，或者用透明度盘测定海水的透明度，确定采样的光学深度。13.4.3 水样测定13.4.3.1 采
9、样按预定深度采样，并记录于海生表2(见附录G)。采样时应使用不透光和没有铜制部件的采水器，水样避免阳光直接照射。13. 4. 3. 2 水样分装采样后，尽快在弱光下，将水样经孔径为180m左右的筛绢过滤，分装至培养瓶。培养瓶必须清洗干净，并经2%(V /V)稀盐酸浸泡24h以上。每层样品应包括两个自瓶和一个黑瓶，第一和第四层样晶还应各分装一个零时间培养瓶，零时间培养瓶中水样体积必须准确.剩余水样按第11章的规定，测定各层次水祥的叶绿素a浓度。13.4.3.3 加C工作液取相同体积的C工作溶液加至每个培养瓶.所加数量视样品中浮游植物多少和培养时间而定。一般在水深小于200m海区，培养24h ,:
10、bn 37370 kBq，大于200m海区加370740kBq o 13.4.3.4 取总计数样用微量吸液器从每一零时间培养瓶中吸取一定体积水样两份，分别移入2个总计数闪烁瓶中，盖紧，混匀，供作放射性活度测定。13.4.3.5培养将已加有C的培养瓶(零时间培养瓶除外)，放入各相应的培养箱内，或罩上各相应的培养罩，再放入透明的培养箱内。记下开始培养时间，培养箱应置于阳光不受遮蔽处，并用流动的表层海水保持培养期间的温度恒定，培养时间一般在224h之间，并尽量接近当地中午时间.13.4.3.6 零时间样品的过滤培养开始后，立即过滤两个零时间样品，所得载有浮游植物的滤膜，放入闪烁瓶，在通风橱中，加入1
11、 cmO. 1 mol/dm盐酸，15m姐后加盖。或在通风橱中以浓盐酸蒸气熏滤膜15min，放入烁闪瓶.13. 4. 3.7 过滤样品培养后，过滤水样步骤见13.4. 3. 6条，13.4.3.8 放射性活度测定向装有带浮游植物的滤膜的烁闪瓶加10cm液闪液，在振荡器上缓慢振荡至少20min，用液体闪烁计数仪测定，并记录于海生表5和见附录剧。13.4.4 水样二氧化碳总浓度测定测定海水样品的盐度，计算海水中二氧化碳总浓度g(C) = (0. 067 8 - O. 05) X O. 96 X 12 000 . . . . . . . (5) GB 12763.6-91 式中2(C)一一海水中二氧
12、化碳的总浓度(以C计),mg!m, 8 海水实用盐度(无量纲)。14 初级生产力的资料整理14.1 数据计算14.1.1 计算加入C的量R RtVIX1000 =-V, 式中:R一一加入C的量，kBq;R，一一各总计数闪烁瓶澳i得C数量的平均值，kBq;V，一一培养水样的体积，C时，V，一一取测总计数水样的体积，mm3014.1.2 计算海洋初级生产力 = i生二生匕旦旦l l R N 式中:Pt -海洋初级生产力(以ct竹，mg!(m h), R一一加入C的量，阔的R，一一白瓶样品中C放射性活度的平均值，kBq;Rb一一零时间样品中C的放射性活度，kBq;(C)一一海水中二氧化碳的总浓度，m
13、g/m3; N一培养时间，h。14.1.3 计算生产力指数式中:1一一生产力指数，h-I;P，-水体初级生产力，mg!(m.的各冉(Chla)一一水体中叶绿素a的浓度，mg/m3014.1.4 计算水柱初级生产力l= t一冉(Chla) . . (6) . (7) (8) 引p，+P =;一了土!. (D;+l队). . . . . .叫9)式中z凡一一水柱初级生产力，mg!(m.的gp，一一第$层初级生产力，mg!(m.h) , 饰一一采样层次数;D, 第z层深度，rn;1，;豆in一1。14.2 填写海生表们见附录剧。14.3绘制分布图14.3. 1 平面分布图GB 12763.6-91
14、等值线取值标准:1.0,5. 0, 10. 0, 20. 0, 30. 0,50. 0, 100. 0, 150. 0, 200. 0 mg/(m2的。14.3.2 断面分布图等值线取值标准:0.1，0.3.0.5，1.0, 3. 0, 5. 0，10.0，30.0，50.0，100.。吨/(m h)。14.3.3 以k等值线取值标准，可视具体情况增减。第三篇微生物调查15 技术要求15.1 微生物调查包括测定细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的数量，细菌异养生长速率和细菌异养活性。15.2 采样站位和层次15.2. 1 站位布设应尽量和其他专业一致。15.2.2 采样水层见第一篇表1，大洋调查可增加
15、500、1000、2000m等水层的采样.15.2.3 海洋沉积物中微生物调查，只采底质表层样。调查微生物垂直分布时，见第六篇分层采样。15.3 元菌操作15.3.1 采水器上的采样瓶、袋应预先灭菌。15.3.2 实验室内水、泥样分样和分离培养鉴定过程中，均按无菌要求操作。15.3.3 其他凡属海上调查所需物品，如水样贮存瓶(棕色)、移液管(1、5、10cm3)、培养皿等均需洗净，包封灭菌，足量备用囚15.3.4 样品应在采样后2h内处理、分析。若暂放冰箱保存，不得超过24h. 16 采样16. 1 主要仪器设备16. 1. 1 采水器根据采样深度，选用击开式或尼斯金(Niskin)采水器。1
16、6.1.2 采泥器弹簧采泥器或箱式采泥器，见第五篇。16.2 采水样1日.2.1见第一篇规定，并接实际情况选用采水器。16.2.2 采水容器开启后，应停留片刻，待水样装满。16.2.3 按测定项目计算采水量，若同一水层分几次采样，样品应混匀，再接各测定项目要求分装、处理。16.3 采泥样用无菌工具从预定层次中取10-20g样品，置于无菌容器。17 样晶分析17. 1 主要仪器设备17. 1. 1 拍滤装置包括滤器、支架、抽滤瓶和真空泵。17. 1.2 滤膜17.1.2.1 微孔滤膜(Milli归Ite)，直径25mm和47mm，孔径。.2m。GB 127日3.6-9117.1.2.2 核孔滤膜
17、(Nuclepore)，直径25mm，子L径。.2m.17.1.3 荧光显微镜具有荧光装置的显微镜。17.1.4 液体闪烁计数仪具有测定吨和泪的功能。17. 1.5 螺盖试管和闪烁汁数瓶50 cm螺盖玻璃试管。20 cm与闪烁仪匹配的玻璃或塑料闪烁瓶。125 cm螺盖玻璃三角烧瓶囚17.2 培养基、试剂和工作溶液17.2.1 培养基17.2.1.1 细菌培养基蛋白脏、5.0 g 酵母膏1. 0 g FePO, 0.01 g 琼脂20.0 g 陈海水1 000 cm 6-7.8 17. 2. 1. 2 放线菌培养基可溶性淀粉K2HP04 KNO, M且SO，. 7H,O FeS04 琼脂陈海水p
18、H 17.2.1.3 霉菌培养基NaNO, K,HPO, KCl M gSO, . 7H,0 FeSO 照糖琼脂20.0 g 0.5 g 1. 0g 0.5 g 0.01 g 20.0 g 1 000 cm 7.2-7.4 3.0 g 1. 0 g 0.5 g 0.5 g 0.01 g 30.0 g 20.0 g GB 1 2 7 6 3. 6 -91 陈海水1 000 cm 17.2.1.4 酵母菌培养基酵母膏5.0 g 葡萄糖20.0 g 蛋白陈10.0 g 琼脂20.0 g 陈海水1 000 cm 将上述已制备好的各种培养基趁热分装。经高压(98.1 kPa)灭菌20min后，制成平板和
19、试管斜面。17.2.2 试剂和工作溶液17.2.2.1 陈海水取天然海水贮存于暗房或具黑、红布罩的玻璃瓶中，放置3个月以上.使用时取其清液。或经孔径。.45m滤膜过滤的海水。17.2.2.2 表面活性剂将吐温-80(Tw田n-80)按1, 2 000比例配成水溶液，灭商备用。17.2.2.3 盯睫橙染色液将0.1g n丫睫橙染色剂溶于100cm蒸馆水中，并经0.2m滤膜过滤。该液可于冰箱(5C)中存放两周。17.2.2.4 伊拉克黑染色液将1.0 g伊拉克黑染色剂榕于含2%(V /V)乙酸的500cm无颗粒无菌蒸馆水中.可在冰箱中长期保存.17.2.2.5 甲醒溶液经O.2m滤膜过滤的40%(
20、V /V)甲醒溶液。17.2.2.6 甲基-HJ胸腺嗜院核背工作溶液取市售放射比活度高于或等于1.85X 101Bq/mol的甲基-HJ胸腺嘈睫核苦的贮备液。使用前用无颗粒无菌蒸馆水稀释成1n mol/cm嚣的工作溶液。17.2.2.7 O-u-CJ葡萄糖工作溶液取市售的放射比活度大于或等于7.4X 10 Bq/mol O-u-CJ葡萄糖的贮备液，用氯化销溶液(NaCI) = 35 g/dm稀释成1.85X 10 Bq/cm的工作溶液，并按10g/cm量加入非放射性葡萄糖。然后定量分装于安音臣中，封熔后高压灭菌15min备用。17.2.2.8 三氯乙酸用蒸馆水分别将该试剂配成10%(V/川的萃
21、取榕液和5%(V/V)冲洗溶液.17.2.2.9 闪烁液市售或根据配方配制的闪烁液.17.3 祥品处理17.3.1 水样处理17.3.1.1 日丫睫橙直接计数的水样加2%(V /V)甲隆溶液固定，如在冰箱(5C)保存不超过两周。17.3.1.2 滤膜萌发平板计数的水样按10cm /dm量加灭菌的吐温-80水溶液，17.3.1.3 细菌异养生长速率测定的水样GB 12763.6-91 取20cm水样装入50cm螺盖试管，按5n mol/dm浓度加入甲基-HJ胸腺略睫核背O.1 cm工作溶液，混匀，现场水温中培养30min，水深大于200m海区的样品需较长的培养时间。对于新海区，应先进行最佳培养时
22、间的预备试验。空臼样应在加入放射性同位素前，按2%(VjV)量加甲醒榕液杀死菌体。测祥和空白样均需重复。17.3.1.4 细菌异养活性测定的水样将水样注入125cm带螺盖三角瓶中，留出2-3cm的空间，加1cm 0-(u-CJ葡萄糖工作潜液，盖紧并混匀。现场水温中暗培养1h。空白样不经培养(加入葡萄糖溶液后立即抽滤)。测样和空白样均需重复。17.3.2 泥样处理17.3.2.1 微生物计数的泥样取约1g样品，精确称重后，置于含吐温-80(10cm jdm)的定量(20-100cm)海水中充分振荡，制成悬浮液。17.3.2.2 测定干重的泥样保存余下的泥样供测干重。17.3.3 记录将以上结果分
23、别记录于海生表9.ll.12.13(见附录白。17.4 样品分析17.4.1 水梓微生物计数17.4.1.1 日丫睫橙直接计数法适用于测定细菌总数。工作程序如下z8. 滤膜染色先将未经染色的核孔滤膜于伊拉克黑染色液中浸泡4h以上，使用前将滤膜于无颗粒无菌蒸馆水中漂洗，除去过剩的染料，b. 滤器装配先以酒精擦拭滤器，后用无颗粒元菌蒸饱水淋洗滤器内壁，再放置滤膜(光滑面朝上).装好滤器及抽滤装置;C. 细菌染色加5cm3无颗粒无菌蒸馆水于滤器中，移入适量样品(控制在每个视野出现菌体50个左右)，按滤器现存水量再滴入10%的盯睫橙溶液，轻轻混匀并染色2min; d. 抽滤负压(50kpa)滤干，用无
24、颗粒无菌蒸饱水淋洗滤器内壁2-3次，并抽滤至滤膜刚好呈湿润状态ge. 制片加一滴低度荧光显微镜泊于载玻片上，贴上载菌体的滤膜，再向滤膜加一滴油，盖上盖玻片(滤膜两面均不能有气泡);如用指甲油密封.$IJ片可在暗处保存24h , f. 计数在荧光显微镜泊镜下，随机取至少20个视野，计算具有细菌形态、呈亮绿色和桔红色的个体数;自空白样测定样品前，当天应加测只含染色液和无颗粒无前蒸锢水的空白样，测空白样时，每个视野不得出现2个以上的菌体，否则应重新处理$h. 计算样品含菌数. (10) GB 12763. 6 -91 式中:/1/一一样品含菌数，个/cm3;N. 各视野平均菌数，个PS 滤膜滤水面积
25、，cm勺S , 视野面积，cm2EV 过滤样品量，cm3。将分析结果记录于海生表们见附录G)。17.4. 1. 2 滤膜萌发计数法适用于测定微生物活菌数，多用于水深大于200m的海区囚工作程序如下:也滤膜处理使用前，置微孔滤膜(直径47mm)于蒸饱水中，间隔煮沸15-20min数次(滤膜灭菌)，至蒸汽中无丙嗣气味;b. 滤器装配见17.4.1.1条hC. 加样加适量样品(以每片滤膜出现40个左右的菌落为宜)，若加样量少，应添加适量无颗粒无菌蒸馆水稀释，用于放线菌、酵母、霉菌计数的样品，加样量应略大，每个样品一般取两种过滤量，每种过滤最重复三片滤膜。d. 抽滤见17.4.1.1条he. 培养将滤
26、膜粗糙面紧贴于备好的平板培养基上(滤膜和培养基间不得有气泡)，将平板倒置于25C恒温箱培养4-7d , f 计数在放大镜下或用菌落计数器，按菌落形态，分别计算各种培养基中四大菌类的菌落数(必要时，用显微镜观察确证), g. 计算样品含菌数几-v一N . . . . . . . (1 1) 式中，N一一样品含菌数，个/cm3;-ia -三片滤膜上的平均菌数，个gv一一过滤样品量，cm3。将分析结果记录于海生表9(见附录G)。17.4.1.3 平板计数法适用于测定水深小于200m海区的微生物活菌数。工作程序如f，a. 稀释用元颗粒无菌蒸馆水将样品制成梯度稀释液;b. 接种根据不同计数对象，取适当稀
27、释度样品。.1 cm (以平板上出现30-300个菌落为宜)，接种于相应的平板培养基上，并i涂布均匀g一般每个样品取两个稀释度，每个稀释度重复二个平板$C. 培养将平板倒置于25Cti温箱，培养4-7d，GB 12763.6-91 d. 计数见17.4.1.2条he. 计算样品含菌数式中，N一一样品含菌数，个Icm3;N，十一二个平板平均菌落数，个gD 样品稀释倍数sV 样品加入量，cm3a 将分析结果记录于海生表9(见附录剧。17.4.1.4 细菌异养生长速率测定工作程序如下zA. 萃取 (12) 样品培养至预定时间，立即置于冰浴中，保持10min后，加20cm冰浴冷却的10%(V /V)三
28、氯乙酸溶液，1m匀并萃取5min; b. 抽滤用微孔滤膜(直径25mm)负压(30kPa)抽滤萃取液至干，再用5%(V/V)三氯乙酸溶液淋洗滤器内壁及滤膜五次(每次1cm3); c. ifjIJ样宣滤膜子液闪瓶中，加1cm3乙酸乙酶，滤膜榕解(约需10min)后，再加10cm闪烁液，混匀并盖紧;d. 测定将制样置入液闪仪测定放射性活度值ge. 计算胸腺嘻睫核背吸收率式中:Rg 胸腺嘻院核背吸收率，mmol/(dm .时，一一样品的放射性活度值，q;U，-空白样放射性活度值，Bq;8，-H在胸腺嘻咙核苦中的放射比活度，Bq/mmol; T 样品培养时间，h;V 样品加入量，dm3回f. 计算细菌
29、菌体生产量p = 1. 4 X 10 R. 式中，P 细茵茵体生产量，个/(dm h); 1. 4X 10 吸收1m mol胸腺晴晓核营所生产的细菌个数(经验值)，个/mmol , R, 胸腺暗院核背吸收率，mmol/(dm .的。(13) (14) GB 12763.6-91 g. 计算细菌数量增倍时间N H一一叫一24 P (15) 式中:D，-细菌数量增倍时间，d;N 样品含细菌数，个/dm, P一一细茵茵体生产量，个/(dm h)。将分析结果记录于海生表10(见附录创。17.4.1.5 细茵异养活性测定工作程序如下3a. 抽滤使用微孔滤膜(直径25mm)，负压(30kPa) ，抽滤空白
30、祥和培养后的样品至干，再以无颗粒无菌蒸馆水淋洗滤膜三次(每次5cm川b. 制样将滤膜置于液闪瓶中，加1cm3酸乙醋，滤膜榕解(约10min)后，再加10cm闪烁液，盖紧瓶口并于暗处静置24h, C. 测定将制梓置入液闪仪测定放射性活度值，d. 标定测定每批葡萄糖工作母液的吨放射性活度值;e. 计算葡萄糖吸收率AA -T R一二C R (-R 式中:R. 葡萄糖吸收率，晴/(dm h) , R, 样品放射性活度值，Bq;R，一一空白样放射性活度值，Bq;A 样品含添加的非放射性葡萄糖浓度，地/dm，c 添加的吨放射性活度，BQ;T 样品培养时间，h.将分析结果记录于海生表11(见附录G)。17.
31、4.2 泥样微生物计数17.4.2.1 微生物计数见17.4.1.3条ad，17.4.2.2 计算泥样含菌数nu -LW V- .-v a N-F A 式中，N泥样含菌数，个!g，N, 兰个平板的平均菌落数，个;V，一泥样悬浮液体积，cm勺(16) .(17) GB 1 2 7 6 3. 6 -91 D 悬浮液的再稀释倍数;V 接种量，cm3;W一一泥样的干重，g.将分析结果记录于海生表12(见附录剧。18 资料整理18.1 填写报表分别将细菌、放线菌、酵母菌和霉菌的数量以及细菌异养生长速率和细菌异养活性的测定结果，按GB 12763.7有关规定填写。18.2 绘制分布图18.2.1 断面分布
32、图一般以等值线表示，取值标准视具体情况而定。18.2.1.1 微生物数量断面分布图。18.2.1.2 细菌异养活性断面分布图.18.2.1.3 细菌生产量断面分布图.18.2.2 大面分布图一般以等值线表示，取值标准视具体情况而定。18.2.2.1 微生物数量大面分布图。18. 2. 2. 2 细菌异养活性大面分布图。18.2.2.3 细菌生产量大面分布图。第四篇浮游生物调查19技术要求19.1 浮游生物调查包括浮游生物种类组成和数量分布(时间、空间分布)。19.2 采水层次见第一篇表1，具体层次视要求而定，19.3 采水量水深大于200m的海区，每次采水不少于1000 cm;水深小于200m
33、的海区不少于500cm. 19.4 垂直拖网深度水深大于200m的海区拖网深度为200m. 19.5 垂直分段拖网水层根据测站深度规定采样水层如表2，表2垂直分段采样水层测站水深采样水层1000 g/肘。26.1.5 种类分布表鉴定后的定量样品，按分类系统记录于海生表28(见附录剧。26.1.6 主要种类分布图选择对总密度和总生物量，或各类群密度和生物量起决定性作用和分布普遍的种类，绘制分布图。26.2 拖阿资料26.2.1 种类分布表鉴定后的定性样品，记录于海生表29(见附录G26.2.2 主要种类分布图定性拖网主要种类分布图，绘制方法见26.1. 6条。26. 3 种类名录采泥和拖网的样品
34、鉴定之后，按分类系统顺序，列出调查海区大型底栖生物种类名录。GB 12763.6-91 第六篇小型底栖生物调查27 技术要求27.1 小型底栖生物调查包括测定主要类群的组成、生物量、栖息密度及其分布。27.2 从采泥器取芯样，必须是未受扰动的采泥样品回每站随机取芯样至少2个。27.3 干重生物量精密度土0.01mg，烘干温度60C，时间24ho 28 采样28.1 采样设备28. 1. 1 采泥器见第五篇，应依次选择箱式取样器弹簧采泥器和采泥器。28.1.2 有机玻璃管内径1.8cm、2.2cm、2.6cm和3.4cm。前两种适用于泥质底，后两种适用于砂质底回28.1.3套筛网目上层孔宽为0.
35、5mm，中层为0.2mm，下层为0.042mmo 28.1.4 撬式小型生物拖网网衣筛网孔宽为0.35-0.45mm。28. 1.5 船上设备同大型底栖生物。28.2 海上采样28.2. 1 取芯样用有机玻璃管从采泥器中取芯样，视泥样厚度取8-12cm的芯祥。取样的位置必须离开采泥器边缘至少2cm。随机取芯样2-4个。28.2.2 撬式小型生物拖网取样操作程序基本同大型底栖生物。调查船航速(可利用停机后的余速)应保持在1kn，拖网时间5mina 28.3 样品处理28.3.1 所用试剂z麻醉剂、固定剂和染色剂28.3.2 处理程序28.3.2.1 芯样测芯样长度，观察颜色，记录RPD层(氧化还
36、原电位不连续层)，装样品于广口瓶中(250cm或125 cm)。28.3.2.2 分层样品取样管倾斜一定角度，按刻度8-12cm , 4,-._. g cm , 2-4 cm , O2 cm，将样品分别装于样品瓶内。28.3.2.3 分装拖网样品吊上甲板后，搅匀，取2个100cm的泥祥分别装入500cm广口瓶。28.3.2.4 麻醉采泥和拖网样品，均加入与样品等体积的麻醉剂，摇动静置10min 0 28.3.2.5 固定麻醉后的采泥和拖网样品，均加入与样品等体积的固定剂固定。28.3.2.6 填写标签已装瓶的每号样品，需投入己填写好的标签(见附录E2)。28.3.2.7 记录GB 1 2 7
37、6 3. 6 .91 每站;采样结束，应填写海生表30(见附录剧。记录表、标签和样品瓶号应严格核对。28.3.2.8 活体样品供活体观察的样品，不加麻醉剂和固定剂，装瓶后即放入冰箱冷藏保存。29 样品分析29. 1 仪器设备29. 1. , 分离装置分两层套筛(上层筛孔宽度为0.5mm，下层为0.042mm)和兰层套筛(在两层套筛的中央加一中层，其筛孔宽度为0.2mm)两种。29. ,. 2 分样器见附录El。29. ,. 3 分析天平感量为0.01mg. 29.2 砂质沉积物的分离(倒上浮液淘洗法)29.2. , 样品分离前加入四氯四腆荧光素染色剂，染色24h以上。每100cm样品加入5cm
38、3染色剂。29.2.2 移样品至1dm3容量的量筒内，加自来水至800c时，加盖，颠倒摇动数次，静贵13min(视颗粒组成而定29.2.3 上浮液倒入分离装置(两层套筛)。重复三次。29.2.4 分别冲洗两层阿筛上残留物至备好的计数培养皿(见附录E1)，供计数。29.2.5 砂质样品的连续淘洗法，见附录E3.1.29.3 泥质沉积物的分离(分层分离法)29.3. , 染色，见29.2.1条。29.3.2 倾样品至分离装置(三层套筛)，用洗瓶冲洗至绝大部分较细粒级的颗粒被冲尽。29.3.3 分别冲洗三层网筛上的残留物至培养皿，供计数。29.3.4 小型动物数量过大时，应采用分样器取分样分选。29
39、.3.5 分选用套筛，特别是最低层的网筛应定期在体视显微镜下检查，发现锈蚀或网孔变形应立即更换。29.4 取分样29.4. , 沉积物分离后的小型生物样品，若数量太大时口I取分样鉴定计数目29.4.2 将样品移入分样器，注入自来水至1d时，加顶盖，颠倒摇动，静置1h，取分样。29.5 计数29.5. , 在高倍体视显微镜(40X)或倒置显微镜下观察、鉴定和计数，结果记录于海生表32(见附录G) . 29.5.2 对软型小型动物如腹毛虫、涡虫等应活体鉴定。对硬型小型动物如线虫、挠足类、介型类等可制成临时性或永久性封片鉴定。29.6 测定生物量29.6. , 直接称重法29.6. 随机取称样两份，
40、用重蒸水小心地漂洗，然后用吸管将样品连同几滴重蒸水一起置入微型铝销(或微型玻肌)内。每份样品应取线虫100200条，底栖梳足类3050个，介形类1020个，多毛类1020条。29.6.2 将样品置于60C烘箱内24h，取出后放入千燥器至恒重。29.6.3 用感量。.01mg的微量分析天平将每个样品称重三次，记录T海生表32(见附录剧。29.6.4 每次称重后并相应地称其称皿一次，记录于海生表32(见附录剧。GB 12763.6-91 29.6.2 体积换算法29.6.2.1 本法适用于小型动物各主要类群。29.6.2.2 取显微镜下描图测量结果，换算体积VL.W2.C .(26) 式中，V体积
41、，10-3mm3; L一体长(长尾种类量至锥状部，带长棘刺的种类至脏l丁)，mmjw一身体最大体宽，mm;C-一换算系数(不同类群的换算系数，见附录E4和图E4)。29.6.3 干重换算法式中，dW-一个体平均干重生物量，g，V一一个体体积，10-3mm3; k 个体假定平均密度为.13 , 0一个体假定干湿比为0.25，30 资料整理30. 1 精密度dW V K D 30.1.1 小型动物样品计数的精密度，以标准误差或置信度(95%C.L. )表示。30.1.2 统计分析之前，线虫数据用对数转换，挠足类和其他类群用平方根转换。30.2 密度30.2.1 计算密度. . (27) 4T .
42、. D ,;, X 10 . ., . . . .,. .28) 式中:D密度，个Im(或10个1m)! T一各芯样的个体平均数，个Pd一一取样管内径.cm。30.2.2 密度空间分布按海生表31(见附录G)要求，计算各站总密度，调查海区平均密度和年平均密度。30.2.3 密度垂直分布按海生表31(见附录G)要求(02，24cm.)计算各分层所占百分比，并相应计算各类群的百分比组成。30.3 生物量30.3.1 计算生物量B L; dW , D; (29) GB 1 2 7 6 3. 6 -91 式中.B一一小型动物的总生物量，g/m(或10g/m); dW一一第8个类群个体平均干重，g;函，
43、一-第5个类群的平均密度，个/m(或10/m);N 动物的类群数。30.3.2 根据30.3.1条分别计算各站总生物量，填写海生表32(见附录G)，并在此基础上求出调查海区平均生物量、年平均生物量和生物量的垂直分布。30.3.3 定性鉴定的结果记录于海生表33(见附录剧。30.4绘图30.4.1 各类群密度百分组成图和密度垂直分布图囚30. 4. 2 主要类群生物量百分组成图和生物量垂直分布图。第七篇污损生物调查31 技术要求31.1 污损生物调查包括大型污损生物和微型f亏损生物。31.2 太型污损生物调查的试板采用环氧商量醒玻璃布层压板，辅以船舶及其他海中设施调查。必须提供种类、数量、附着期
44、和季节变化。31.3 微型污损生物调查的试板采用载玻片。必须提供主要的微型污损生物种类及数量。32 采样32. 1 大型污损生物调查32.1. 1 港湾挂板调查32.1.1.1 试板分月板、季板、半年板和年板。一律用3mm厚的环氧盼醒玻璃布层压板，每片试板正中钻两个相距50 mm，孔径7mm的串板孔。每个点放1、2两组板，每组两个水层，共需挂放和回收76片试板，具体数量和规格见表40表4试板种类、规格及数量极别月板季板半年板年板规格.mm 3X80X140 3X80X145 3X80X 150 3X80X 150 数量，片I 2X2X1248 I 2X2X416 I 2X2X28 I 2X1X
45、24 32. 1. 1. 2 挂板点选择首先了解挂板海区的水深、透明度、水温、盐度和海流等情况。挂板期间还必须有周年的月平均水温、盐度资料。确定站位的原则是:有浮码头、浮缆、浮标或水产业的吊养绳缆等可供援板;便于管理;水流畅通，水域开阔团在一个港湾或一段近岸水域，通常只需设一个挂板点。河口区等环境变化大的水域，可增设个或几个点，且必须兼顾不同盐度梯度或水流畅通程序不同的点。32. 1. 1. 3 挂板周期、时间及层次每点撞板一周年。分月板、季板、半年板和年板，从3月l日开始，同时挂放，并按时回收和更换新板。35月.68月.91l月和122月分别代表春、夏、秋、冬四个季度。38月和92月分别代表
46、上半年和下半年。每组板都分表层和中层两个水层。表层板的上缘正好露出水面，中层板离水面2.0m。大潮期间低GB 12763.6-91 潮时的水深仍大于5m的水域，可在近海底0.5m处增挂底层板。32. 1. 1. 4 放板和取板在每月的头二天取、放板。挂放在水中的试板表面应与水面垂直。从水中取出的试板应在现场包于纱布中，并系以标签，然后固定在5%-8%(VjV)的中性甲醒溶液中。32.1.2 港湾以外海区挂板调查32. 1. 2. 1 站位根据离岸远近布站。32.1.2.2 水层分表层(离海面2m) , 10 , 25 , 50 , 100 , 150 , 200 m.和底层(离海底5m)。32
47、. 1.2.3挂板时间和周期6月上旬挂板，历时一周年取板。视需要可酌情增加季板。32.1.2.4 试板试板材料为环氧盼窿玻璃布层压板，规格3mmX200 mmX300 mmo 32.2.5 挂板和取板挂于特制浮标或潜标上的试板，每个水层挂两片。取板时，必须在现场将试板装入纱布袋并浸于固定剂中。32. .3 船舶及其他海中设施调查32. 1. 3. 1 取样前必须现场拍照或录像，现场测量厚度和覆盖面积率。根据不同对象，填写调查记录表。取样面积根据生物的多少酌定，一般是20cmX20 cm或30cmX30cm.32. .3.2 取样位置按下列规定实施:8. 船舶，取祥位置包括水线、船首侧面、船体底
48、部、船尾底部、舵和螺旋桨等六个位置，并记录于海生表35(见附录G); b. 浮标，取祥位置包括浮筒的水线、侧面、底部、尾部、尾内和沉块，并记录于海生表36(见附录G) ; c 浮役及浮码头，取样位置包括水线、侧面和底部gd. 码头桩柱，取样位置包括潮间带的高、中、低兰个湖区和大潮低潮线下1m的潮下区，必须测量污损生物群落的垂直分布和分带:观察和测量优势种的垂直分布上界和F界，并记录于海生表37(见附录G);e. 海中平台，根据平台的类型和海区，酌情取样;f. 遥测浮标、潜标及水下仪器仪表，取样位置必须注意不同水层和不同部位的代表性;g. 海底的声纳外壳、沉船及海底电缆，必须同时在顶部和近海底部位、暴露部位和隐蔽部位取样;h. 冷却水管道系统，取样位置包括管道口外的过滤栅、过滤鼓、及离管
