1、ICS 13.310 A 92 中华人民共和国公共安全行业标准GA 656-2006 人血液(痕)ABO血型检测凝集法、解离法Detection method for ABO blood type in human blood(stains)一Hemagglutination test , elution test 2006-11-03发布2007-03-01实施中华人民共和国公安部发布前本标准的4.1a)为强制性的，其余为推荐性的。本标准的附录A、附录B为规范性附录。本标准由全国刑事技术标准化委员会提出并归口。本标准起草单位z公安部物证鉴定中心、黑龙江省公安厅等。GA 656-2006 本标
2、准起草人:温佩忠、张大安、刘开会、李晓平、朱爱民、李澎、刘旭丹、常彩琴、张英兰、李兆隆等。I 自咱1 拮围人血液(痕)ABO血型检测凝集法、解离法GA 656-2006 本标准规定了法医生物物证检验中料准备、操作方法和结果判定。本标准适用于从事法2 规范性引用文件下列文件中的条款通的修改单不包括勘误的是否可使用这些文件GA 471-2004 3 原理凝集法z人红发生抗原抗体反应解离法(蛋白条件下抗原抗体复A、B血型物质，50C -56C条件下，的抗体与相应的指胞发生凝集反应的4 试剂与器材4. 1 试荆a) 标准抗A抗体、b) 甲回事(分析纯); c) 生理盐水;d) A型、B型指示红细胞悬液
3、(的鸡蛋清溶液(3%)(见附录B)。4.2 器材a) 台式离心机zb) 光学显微镜;c) 负压吸引装置;d) 恒温箱;的加样器、加样器吸头;f) 眼科剪、眼科银、分离针;g) 载玻片、盖玻片、载玻片架、洗片架、保温盒、白黯盘、毛细管;h) 玻璃笔、捷纸。用文件，其随后所有议的各方研究血型。合物，在一定。检材中的。当在左右时，游离1 GA 656一20065 操作方法5. 1 凝集法检测人血液ABO血型5. 1. 1 取待检血被少许，用生理盐水离心洗涤(1000 r/min, 3 min. ) 1次3次，并用生理盐水配成3%-5%的红细胞悬班。5. 1.2 取洁净阻玻板，两凹处分别标记A与B.两
4、凹内分别滴加标准抗A、标准抗B抗体试剂各1滴。5. 1. 3 于两凹内分别滴加5.1. 1中配制的3%5%的红细胞悬被l滴，摇动凹玻板，摇句抗体和细胞，室温观察凝集情况，5min -10 min后记录结果。5.2 蛋白粘片法检测人血ntABO血型5.2. 1 取措净载玻片，用玻璃笔在两端各画一直径O.6 cmO. 8 cm圆圈。分别用记号笔注明A、B端及检材标号。置于载玻片架上。5.2.2 用吸管吸取3%蛋清榕液少许，分别点铺于载玻片A、B端的圆圈内，并吸去多余的蛋清液体。5.2.3 以洁净剪刀、慑子取血攘纱布的一根带血痕纱线约0.1cm长(或相应大小的其他类检材，或刮取极微量的检材粉末)于蛋
5、清榕液上，用分离针仔细分离。5.2.4 待蛋清自然干燥眉，各滴加甲醇溶液一滴固定，自然挥发干燥。5.2.5 按标记在A、B两端圆圈内分别滴加抗A、抗B血清试剂覆盖检材，然后将其连同载玻片架放置于保温盘内，室温负压(760mmHg)吸收20min。如果没有负压吸引器，置40C，._，80C冰箱中吸收约2小时。5.2.6 取出载玻片垂直放在洗片架上，垂直浸人盛有冷自来水的白黯盘内，不经晃动立即垂直取出换水，如此反复8次，._，12次。5.2.7 用滤纸平铺于载玻片上吸干水分，按标记分别在两端滴加相应的0.1%0.2%指示红细胞，加盖盖玻片，放入56.C恒温箱内热解离5minv10 min。5.2.
6、8 取出载玻片，置保温盒内室温放置10min20 min后，放于显微镜下，以分离针尖轻点盖玻片，观察红细胞凝集情况，记录结果。6 结果判定凝集法结果判定见表1，蛋白粘片法结果判定见表20表1凝集法检测人血液ABO血型结果判定检材编号A侧B侧结果判定1 。2 十A 3 + B 4 十十AB 表2蛋白轴片法检测人血躏ABO血型结果判定检材编号A侧B侧结果判定l 。2 + A 3 十B 4 十+ AB 2 GA 656-2006 7 注意事项7. 1 凝集法检测人血耀ABO血型7. 1. 1 待检血液如果为新鲜血液，可以不用洗涤，直接配成3%-5%的红细胞悬液。7. 1. 2 洗涤红细胞的次数，应根
7、据其上清液的颜色判定。如果颜色发红，说明有红细胞破坏，应轻微洗撮，在判定结果时应考虑此因素。7. 1. 3 抗体和红细胞温合后，应即刻摇功凹玻板，避免红细胞粘附板底，影响凝集的观察。7. 1. 4 肉眼观察难于判定红细胞是否凝集或凝集较弱，难于正常分型时，可在显微镜下观察。必要时检测其血清抗体或用其他方法检测。7. 1. 5 一些难于判断的情况，应考虑亚型及其他稀有型。7.2 蛋白粘片法检测人血搞ABO血型7. 2. 1 检验的同时应分别取空白处检材和已知各型的人血瘟检材做空白和已知对照，井只有当空白和已知对照检测结果正确时，样本的检验结果才能果信。7.2.2 指示红细胞应新鲜配置，井在显微镜
8、下检查有无自凝集现象，隔天使用应进行重新出禄。另外，指示细胞为同型多人份棍合血液制备的较好。7.2.3 标准抗A抗体、标准抗B抗体试剂效价应为1: 128左右。7.2.4 加抗体吸收后的搅涤次数应根据洗涤手法、检材的种类和量做相应的调整，血斑不同于精斑、唾被斑等体液斑和多数组织浸液检材的搅捧次数。洗海用自来水温度不能过高。7.2.5 若无条件负压吸收，则应放于保湿盒内，置4.C8.C冰箱30min至数小时，使之充分吸收。7.2.6 结果观察时间不宜超过1h. 7.2.7 本法灵敏度高，要严格操作，避免检材交叉、污染。3 GA 656-2006 A. 1 配制材料a) 新鲜A型、B型、0型人红细
9、胞pb) 生理盐水;c) 离心机、离心管、吸管;d) 加样器、加样器吸头;e) 记号笔。A.2 操作步骤附录A(规范性附录)揭示红细胞配制A.2.1 在3个10mL离心管上分别标上A型、B型、0型字样，并分别加入5mL-8 mL生理盐水，然后分别加人的0.5mL新鲜A型、B型、0型人红细胞。A. 2. 2 将以上3个离心管离心，800r/min-1 000 r/min, 5 mino A. 2.3 轻轻将上清液吸出、弃去。如果上清液为无色透明，进行下一步，如果上清液颜色披红，则要重复A.2.1和A.2. 2步骤，直至其颜色为无色透明。A. 2. 4 用生理盐水将A.2. 3洗涤后的红细胞分别配
10、成o.1%0. 2%A型、B型和0型红细胞悬液。4 GA 656-2006 附录B(规范性附录)3%鸡蛋清溶液配制配制材料新鲜鸡蛋:生理盐水;吸管;加样器、加样器头B. 1 ) abicd 操作步骤B.2 蛋清榕液字样。到B.2. 1的生理盐水中，5 日人5mL生理盐水，并在离端开一小口，然后B.2:1在10mL B.2.2 用一尖用吸管反复吹mwmWM刷服也CON-司。中华人民共和国公共安全行业标准人血班痕)ABO血型栓测提集法、解商法GA 656-2006 * 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销字千刷9印数次字如何川月U24张?铸印刷开本880X 1230 1/16 2007年1月第一版定价10.00元 书号:155066 2-17418 如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533:GA 656-2006
