1、中华人民共和国国家标准霍乱诊断标准及处理原则GB 15984 1995 Diagnostic criteria and principles of management of cholera 霍乱是由01群和0139群霍乱弧菌引起的急性肠道传染病，是发病急、传播快、波及西广、危害严重的甲类传染病，也是当今三种国际检疫传染病中最严重的一种。根据中华人民共和国传染病防治法和中华人民共和国传染病防治法实施办法的规定，制定本病的诊断标准及处理原则。1 主题内容与适用范围本标准规定了霍乱的诊断标准，对病人、疫点、疫区的处理原则等，并推荐了对霍乱的病原学检查、血清免疫学检查、霍乱弧菌的鉴定和分型方法以及对
2、病人的补液疗法等。本标准适用于全国各级卫生防疫、医疗保健机构对由01群和0139群霍乱弧菌引起的霍乱的诊断和处理。2诊断原则根据夏秋季节霍乱流行期间的疫区内，凡有腹泻，伴有呕吐，从粪便或吐泻物检出01群或0139群霍乱弧菌或血清检查对01群或0139群霍乱弧菌的抗体有明显升高者予以诊断。病人的临床症状可由轻度到重度不等。3诊断标准3. 1 疑似霍乱诊断标准a. 凡有典型临床症状如剧烈腹泻，水样便（黄水祥、清水祥、米？甘祥或血水祥，伴有呕吐，迅速出现严重脱水，循环衰竭及肌肉痊孪（特别是脐肠肌的首发病例，在病原学检查尚未肯定前。b. 霍乱流行期间有明确接触史如同餐、同住或护理者等，并发生泻吐症状，
3、而元其他原因可查者。具有上述项目之一者诊断为疑似霍乱。3. 2 确定诊断标准也凡有腹泻症状，粪便培养01群或0139群霍乱弧菌阳性；b. 霍乱流行期间的疫区内，凡有霍乱典型症状（见3.I剖，粪便培养01群和0139群霍乱弧菌阴性，但无其他原因可查者；c. 在流行期间的疫区内有腹泻症状，作双份血清抗体效价测定，如血清凝集试验呈4倍以上或杀弧菌抗体测定呈8倍以上增长者pd. 在疫源检查中，首次粪便培养检出01群或0139群霍乱弧菌前后各5天内有腹泻症状者。临床诊断s具备h0确诊病例s具备a或c或d。国家技术监督局1995-1215批准1996-07 01实施282 GB 15984一19954 1
4、1苗床分型标准4, 1 轻型仅有腹泻症状，极少伴呕吐，大便一天少于10次，大便性状为软便、稀便或黄水样便，个别患者粪便带粘液或血，皮肤弹性正常或略差，大多数患者能照常进食及起床活动，脉搏、血压、尿量均正常。4.2 中型腹泻次数一日1020次精神表现淡漠，有音哑，皮肤干而缺乏弹性，眼窝下陷，有肌肉注孪，脉搏细速血压（收缩压）儿童9. 33kPa ( 个十（一一+, GB 15984一1995注。括弧内为少数菌株结果。C3. 2 试验方法；a. 第N组霍乱噬菌体裂解试验s本项试验与噬菌体分型在同一平皿上进行，方法见C4.l.2b. 多粘菌素B敏感试验z将1.5%普通琼脂加热溶化，待冷却至50左右，
5、按每毫升培养基加入50单位多粘菌素B，摇匀后倾注平皿，凝固后备用。在平皿背面用玻璃笔划出若干方格。将被检菌23h肉汤培养物一接种环点在培养基表面，待干后放37培养过夜，观察结果。被检菌不生长或生长不足10个商落为敏感，记录为号。 鸡血球凝集试验：在清洁平皿内划出方格，用直径4mm的接种环取一滴生理盐水滴在每个方恪内，取被检菌18h琼脂培养物少许，在生理盐水中制成浓厚菌悬液。再用接种环各加一滴经洗海三次的2.5%鸡血球生理盐水悬液，充分摇匀，肉眼观察结果。lmin内出现血球凝集者为阳性，血球呈均匀分散状态者为阴性。埃尔托型为阳性，古典型一般为阴性。d. v P试验将被检菌接种于葡萄糖磷酸盐蛋白陈
6、水，37培养23夭。然后取出lmL培养物加5%一荼盼乙醇溶液O.6mL，振荡5s，加入40%氢氧化御液0.2mL，再振荡缸，去掉棉塞置室温。在lh内出现红色反应者为阳性。阴性者在试剂加入后逐渐出现浅褐色。古典型为阴性，而埃尔托型多为阳性。e. 溶血试验z取被检菌24h普通肉汤（中试管装8lOmL）培养物lmL,1%绵羊红血球（生理盐水洗3次，最后1l次离心速度为2000r/min，离心lOmin)lmL，混匀后放37c . 2h观察初步结果，再放4C冰箱过夜观察最后结果试验应有已知溶血株、不溶血株和肉汤管做对照。达半数血球溶解者为溶血阳性。为证明为不耐热溶血素，可将被检菌的培养物加热5630m
7、in后再做溶血试验。古典型不产生可溶性溶血素埃尔托型有些产生，有些不产生不耐热的可溶性溶血素。C4 噬菌体生物分型c4. 1 噬菌体分裂C4. 1. 1 利用五株国内分离的弧菌噬菌体（VPlVP5）将埃尔托型霍乱弧菌分成32个噬菌体型表C2）。表C2埃尔托型霍乱弧菌噬菌体分型表对分型噬菌体的敏感性强菌的噬菌体型VP! VP2 VP3 VP4 VP5 十+ + + + 2 + + + 十3 + + 十十4 十+ 十十5 十十十十6 + 十十十1 十十+ 8 + 十9 十+ 10 卡十+ 11 十+ + 12 十十十13 + 十十14 + + + 15 + + 十2剖7GB 15984-1995
8、续表CZ元7与h型噬菌体的敏感性弧菌的噬菌体型VP! VP2 VP3 VP4 VP5 16 十十+ 17 十+ 18 十+ 19 + + 20 + + 21 + + 22 + + 23 + + 24 + 十25 + + 26 十+ 27 十28 + 29 + 30 + 31 + 32 时，1.2 噬菌体分型方法s在1.5%普通琼脂平皿的背面，用玻璃笔划出9个方格，再将被检菌23h肉汤培养物0.2ml，加至已融化并冷至50的0.7% 4mL半固体琼脂中，混匀后倾注于琼脂平皿上。待干后，于第15格分别滴加VP！VP5分型噬菌体的原液（10810/mL）；第6、7格分别滴加第N组；雀乱噬菌体原液（1
9、0/mL）及常规稀释液（10/mL），第8、9格滴埃尔托型霍乱弧菌的溶原噬菌体两个代表株（溶原性菌株的1820h肉汤培养物，经5630min水浴杀菌后使用），作为对溶原噬菌体敏感性的测定。待干后放37C培养过夜，观察结果。依据被检菌对VPlVP5噬菌体的敏感性，按表CZ判定其噬菌体型别。时，2埃尔托型雀乱弧菌的生物分型C4. 2. 1 根据菌株的溶原性、对溶原噬菌体的敏感性、山梨醇发酵试验和溶血试验等四个生物学性状，将埃尔托型霍乱弧菌分成12个生物型（表C3）。表C3埃尔托型霍乱弧菌生物分型表生物学性状生物型溶原性对溶原噬菌体的敏感性山梨醇试验溶血试验 + + b + c + + d 十e 十
10、f g + 十+ h 十十十+ + 十十k + 十+ 288 GB 15984-1995 C4. 2. 2 溶原性测定z从埃尔托型霍乱弧菌复愈型抗链霉素株SM6的普通琼脂平皿培养物上挑取光滑圆整的典型菌落接种普通肉汤，37c培养812h，作为指示菌。在直径9cm平皿中倾注一薄层1.5%普通琼脂培养基，待凝固后，于平皿底的背面用玻璃笔划出1620个方格，并注明被检菌号a将4时，o.7%普通半固体琼脂培养基加热融化，待冷至50加入链霉素2000单位及指示菌O. 3ml，混匀，倾注子上述己凝固的琼脂平皿底层上。待凝结后，将被检菌的1824h肉汤培养物，用接种环分别滴加在指示菌平皿的每个小格内，待干后
11、放37培养过夜。出现不透明的磨玻璃样噬斑或裂解区，边缘有明显的、窄的、不圆整的裂解环者为阳性。C4. 2. 3 对溶原噬菌体敏感性的测定在噬菌体分型的平皿上，滴加埃尔托溶原噬菌体代表株（溶原性菌株的1820h肉汤培养物，经5630min水浴杀菌后使用）37培养过夜后观察结果。出现不透明噬斑者为阳性，表明被检菌株对溶原噬菌体敏感，即为复愈型菌株，不出现噬斑者可能是溶原株，也可能是非溶原株。C4. 2. 4 山梨醇发酵试验z将0.1日蛋白陈与o.5g氯化锅加于lOOmL蒸铺水中加热溶解。调整pH8.0 或9.0之后，加o.25%盼红指示剂lmL和山梨醇2.饵，溶解后分装小试管，每管3mL,0. 0
12、6MPa高压蒸汽灭菌20min,取被检菌23h肉汤培养物0.lmL，接种于山梨醇发酵管（pH8.0), 37培养3h观察结果。流行株发酵迟，培养基呈粉红色，为（）；非流行株发酵快，培养基呈黄色，为（）。使用pH9.o山梨醇发酵管时培养45h观察结果。C4. 2. 5 溶血试验同C3.Ze, c4.3 噬菌体“生物分型区分两类菌株标准将噬菌体分型与生物分型结合起来，即噬菌体生物分型，可将埃尔托型霍乱弧菌区分为流行株和非流行株两类菌株。噬菌体I5型生物型af为流行株，其中噬菌体13型生物型ad为常见的流行株，如la、Jd、3b等。噬菌体632型生物型gl为常见的非流行株，如Bi、9k、30k等；噬
13、菌体l5型生物型gl和噬茵体632型生物型af均为不常见的非流行株。在埃尔托霍乱疫情处理时按噬菌体生物分型结果区别对待，对流行株所致霍乱要加强监测和控制.:xt非流行株所引起的腹泻病例按一般腹泻病菌处理。01 口服补液治疗附录D补液疗法参考件）01. 1 口服补液盐处方：推荐使用下列口服补液盐ORS）配方。葡萄糖20以或白糖40g）、氯化销3.5g、碳酸氢销2.5g（或拘橡酸三销2.9g）、氯化绑.栓，加水lOOOmL（内含Na+90mmol,K+ 20mmol,Cl-80mmol,HC03 30mmol，葡萄糖lllmmol）。以上各药成分吁先行配好，装入小袋，临用时加水配制。市场上已有口服
14、补液盐成品出售使用时按说明兑水。01. 2 口服补液原则轻型患汗，最初4h依据体重或年龄，按表DI用量给予ORS液。以后般排出1份大便可给J.5份口服液体。如无条件拥l大便量，可根据病人能喝多少，就给服多少。中、重型患者经静脉快速输液，使血压回升，呕吐停止后，即可口服补液治疗。08)() GB 1 5 9 8 4 -1 9 9 5 a. 4320.9%氯化纳液10%葡萄糖1. 4 %碳酸氢纳（或166.7mmol乳酸纳入b. 1 1加碱液O.9%氧化纳液250mL+lO%葡萄糖250mL+5%碳酸氢纳25mL。1/2张液：3 2 1液10%葡萄糖0. 9 %氯化纳液I. 4%碳酸氢纳或166.
15、7mmol乳酸锅）。D2. 2. 2 补液法a. 轻型通常用口服补液疗法。不能口服者可用静脉输液，入院后24h输液量按每公斤体重100l50ml，计算，以生理盐水与5%葡萄糖液2 1比例给予，每分钟l2mL速度，并应注意补例。b. 中、重型z患儿重度脱水，需立即静脉补液，输液量在67h内按每公斤体重lOOmL计算，其间分两阶段进行。两阶段输液完成后，依据病情选择合适的继续补液方案。如呕吐停止可改用口服补液。c. 第一阶段静脉输液方案：按每公斤体重给予20mL等张液计算，于lh内输入。d. 第二阶段静脉输液方案：按每公斤体重给予80mL2/3张液或1/2张液计算。1岁以内患儿于6h内输入，1岁以
16、上患儿于5h内输入。e. 补例：低饵患儿一般按每日每公斤体重100300mg氯化饵计算，分34次口Rli，呕吐严重不能口服者，配成0.15 0. 3% （以0.15/o为宜）浓度的液体由静脉均匀输入，静脉给何必须在有尿后才能施行。f. 输液速度2四岁以上儿童最初15min内每分钟2030mL，婴儿以每分钟lOmL输入，以后按脱水及脉搏情况调整速度。待脱水、酸中毒纠正后，逐渐减慢至每分钟12mL(2030滴维持之。呕吐停止后改用口服补液。附录E抗菌治疗（参考件）雀乱病人在补液治疗的同时给予抗菌药物治疗，可减少腹泻量和缩短排菌期g密切接触者可口服抗菌药物预防，以降低发病率。常用抗菌药物如下，可根据
17、引起流行的霍乱弧菌对抗菌药物的敏感性及药品来源选用其中之一。E1 四环素：成人每日4次，每次o.拢。E2 复方新诺明：成人每日两次，每次lg；小JL按每日每公斤体重50mg计算，分2次服。:3 映喃瞠嗣（躏特灵）成人每日4次，每次！OOmg川、JL按每日每公斤体重lOmg汁算，分2次服。E4 强力霉素：成人每日2次，每次200mg，或服300mg，单剂。本药宜饭后口服。E5 氯霉素z成人每日4次，每次250mg;1J、儿按每日每公斤体重50mgit算，分4次服E6 黄连素成人每日3次，每次300mg;1J、儿按每日每公斤体重50mg计算，分3次服。El 喳诺国同类抗菌药：氟OJ匠酸，成人每日3次，每次400mg川、儿按每日每公斤体重1520mg汁算，分2次日服。毗赈酸，成人每日3次，每次500mg；小儿按每日每公斤体重4050mg计算，分2次服。用药期间注意尿的改变。GB 15984 1995 附加说明本标准由中华人民共和国卫生部提出。本记准由中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所负责起草。本标准主要起草人张树波、张迈仑、于长水。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。292
