1、中华人民共和国国家标准丝虫病诊断标准及处理原则Diagnos“c criteria and principles of management of filariasis GB15985一1995根据中华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法制定本标准。1 主题内容与适用范围本标准规定了丝虫病（班氏丝虫病和马来丝虫病）各期，即微丝蝴血症、急性丝虫病和慢性丝虫病的诊断标准、治疗方法及防治原则。本标准适用于疫区专业机构开展丝虫病防治工作和各级卫生防疫、医疗保健机构对丝虫病患者的诊治。2诊断原则根据流行季节丝虫病流行区居住史、临床表现以及病原学检查、血清免疫学检查等予以诊断。3诊断
2、标准3. 1 微丝拗血症3. 1. 1 流行季节流行区居住史。3. 1. 2 夜间采血检查微丝拗阳性。确诊病例z具备3.1. 2。3. 2 急性丝虫病3. 2. 1 流行季节流行区居住史。3. 2. 2 有反复发作的非细菌感染性肢体（或阴囊、女性乳房）淋巴结炎淋巴管炎（或精索炎、辜丸炎、附辜炎），局部疼痛、触痛、肿胀、温热感，或有丹毒样皮炎，症状持续超过3天，伴有发热、头痛、不适等全身症状。注：马来丝虫病急性进症局限于肢体3. 2. 3 夜间采血检查微丝蝴阳性。3. 2. 4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。疑f以病伊jz具备3.2. 1、3.2. 2 0 确诊病例：疑似病例加
3、3.2. 3或疑似病例加3.2.4。3. 3慢性丝虫病3. 3. 1 较民期流行区居住史。3. 3. 2 有不对称性肢体淋巴水肿、象皮肿、稍膜积液、乳廉尿以及阴囊或女性乳房肿大（马来丝虫病慢性体征局限于肢体淋巴水肿、象皮肿，且肿胀处限于膝、肘关节远端）。或兼有3.2. 2的表现。3. 3. 3 夜间采血检查微丝蝴阳性。国家技术监督局199512 15批准1996 07-01实施 i GB 15985-1995 3.3.4 间接荧光抗体试验或酶联免疫吸附试验检测抗体阳性。3. 3. 5 在尿、淋巴液、精膜积液（或其他抽出液内查见微丝锄，在淋巴管、淋巴结内查见成虫或在病理组织切片查见丝虫断面。疑似
4、病例具备3.3. I、3.3. 2 0 确诊病例：疑似病例加3.3. 5或3.3. 3或3.3. 4。4 处理原则4. 1 病原治疗4. 1. 1 个体治疗4.1.1.1 班氏丝虫病一般用海群生（乙胶嚓总剂量4.2日7天疗法总量7084mg/kg，即每次o.2日，每天3次，连服7天（成人量，儿童用量应递减，孕妇、哺乳期妇女及有严重疾患者应缓治或兔子治疗，下同）为一疗程，需复治23个疗程，间隔半月以上。4.1.1.2 马来丝虫病般用海群生总量2g的4天或2天疗法（总量3340mg/kg），即o.5g顿服，连续4天或0.5g，每天2次连续2天，复治Z3个疗程，间隔半月以上。对微丝拗密度较高者，首次
5、治疗宜用海群生1日10天微量递增疗法即第14天，每天12.5mg I第57天，每天25mg1第89天每天50mg1第10天补足！.Og顿服）。4. 1. 2 群体治疗4.1.2.1 班氏丝虫病4.1.2.1.1 人群微丝拗率在10%20%的地区，于血检普查后，采用全民普服。.3%海群生药盐6个月（海群生总量约9g），对检出的微丝蝴血症者再用海群生3g5天疗法，即每次0.3日，每天2次，5天为一疗程，治疗23个疗程，间隔半月以上，4.1.2.1.2 人群微丝蝴率在5%10%的地区，于血检整群抽样调查后，全民普服0.3%海群生药盐6个月。4.1.2.1.3 人群微丝拗率在5%以下地区，采取普查，对
6、微丝拗血症者用海群生3g5天疗法治疗23个疗程，间隔半月以上。4. 1. 2. 2 马来丝虫病4.1.2.2.1 人群微丝哟率在5%10%的地区，采取普查，对微丝锄血症者用海群生总剂量地的4天或2天疗法治疗34个疗程，间隔半月以上，亦可采取全民普服0.3%海群生药盐46个月。4.1.2.2.2 人群微丝拗率在5%以下地区，采取普查，对微丝蝴血症者用海群生组的4天或2天疗法治疗23个疗程，间隔半月以上。4.1.2.2.3 群体治疗时间以冬、春季节为宜。4.2 对症治疗（详见附录。4.3 媒介防治4. 3. 1 结合环境整治和新农村建设，清除蚊媒擎生地。4. 3. 2提倡使用蚊帐、纱窗、纱门等防蚊
7、设备和应用驱蚊剂。4.3. 3 在有嗜人按蚊的马来丝虫病流行区，可结合症疾防治开展杀虫剂室内灭蚊。294 A1 血液检查A 1. 1 I甲!ill牒，圭GB 15985-1995 附录A病原学检查（补充件）A 1. 1. 1 血片制作：于晚9时至翌晨2时，以酒精棉球消毒耳垂或指端）待干，用三楼针快速深刺，轻挤出血液，取血3大滴，约等于60L，置于已编号的清洁载玻片上，涂成边缘整齐、厚薄均匀的椭圆形或￥：方形厚血膜（约￥：3cm、宽1.5cm），平放于有盖的玻片盒内，以防落灰或虫吃。A1.1-2 血片染色次日，将经自然干燥的血片放入清水中溶血5！Omin，至血膜呈乳白色，取出晾干，甲醇固定，染色
8、。大规模普查可用珊砂美蓝染色，鉴定虫种及保存宣用吉氏液或苏木素染色。A1.1.2.1 棚砂美蓝染色法取美蓝泣，棚砂拢，置研钵内，边研边加水，待溶解后冲洗入瓶中加蒸馆7j( JOOmL配成原液，过滤后放置备用。染色时取原液5ml，加清水配成5%稀释液，染35min，使血月亮皇天蓝色，然后用清水轻轻冲洗。本法染色前可不必先溶血、固定。A 1. 1. 2. 2 吉氏染色法染液由吉氏粉0.5g，中性甘油25mL及甲醇25mL配成。先置染粉于研钵内，加少量甘油充分研磨，边研边加，至甘油加完为止，然后倾入lOOmL玻塞瓶内，用甲醇小量多次洗涤甘油染液倾入瓶内，塞紧瓶塞，充分摇匀，置于55soc温箱内24h
9、或室温下35天，即为原液，放进愈久染色效果愈佳，l脑用时稀释a将溶血后已干的血片用甲醇固定约lmin，然后滴加10%染液（原液加清水稀释配成）染45min，用蒸馆水轻轻冲洗。A 1. 1. 2. 3 德氏苏木素染色法，染液由A液即镀明矶饱和液（镀明饥20g、蒸馆水lOOmL);B液（苏木素结晶lg加纯酒精lOmL)1C液（甘i油25mL加甲醇25ml，）配成。将B液逐滴加入A液中，倒入一不盖紧的容器内，置于空气流通处，经2周至1个月使其充分氧化，过滤后加入C液，密封备用。血片溶血固定步骤同前e用上述染液染1020min，用0.05% 0. 1%稀盐酸脱色片刻，流水冲洗至血膜呈蓝色。A 1. 1
10、. 3 血片镜检：将染色的血片在低倩显微镜下顺序逐个视野检查微丝拗并计数根据微丝蝴的大小、体态、折光性、有无鞠膜、表皮是否光滑及内部结构等特征，于以识别。在高倍镜下观察微丝蝴的体核及头端空隙、神经环、排泄细胞、排泄孔、旺孔、尾核等结构。必要时需要用油镜作进一步鉴别。A1.1.4 班氏与马来微丝拗形态鉴别要点见表Al.特征长度，m宽度.m体态头端空隙( j主宽比）体中要尾接A 1. 2 微丝拗浓集法表Al班民微丝蜗马来微丝蝴244296（平均260)177230（平均220)5 37 0 5. 96. 0 柔和，弯曲自然，无小弯僵直，大弯上有小弯较短较长() (21) 圆形，排列整齐，各核分开清
11、晰可数卵圆形，大小不等，排列紧密，常相互重叠不易分清无2个A 1. 2. 1 改良蒸馆水法：取静脉血lmJ，（取血时间同Al.1），置于盛有o.4mL3. 8%拘橡酸俐的离心管内，强匀后加蒸馆水8lOmL，反复摇匀待红细胞溶解后经每分钟3000转离心35min，倾去上液，加O.05 n1ol/J，氢氧化纳8lOmL，按住管口，用力振荡数次，放匠5lOmin，使纤维蛋白凝块迅速溶2!1.i GB 1 5 9 8 5 1 9 9 5 解，再离心，吸除上清液，将沉渣涂片，待干、染色、镜检。A 1. 2. 2 微孔膜过滤法：将已编号的直径25mm、孔径协m的微孔薄膜经蒸饱水漂洗后装入过滤器内，滤膜下垫
12、一张同样大小经生理盐水润湿的滤纸。用注射器取静脉血lmL（取血时间同Al.1 l，加5%拘橡酸纳O.lmL抗凝，吸入10%聚氧乙烯脂肪醇硫酸纳或可用2%吐温80、0.I%碳酸氢销或10%聚氧乙烯脂肪醇硫酸销（ES）溶液9mL，混匀后，去针头，直接插入过滤器，缓慢推动注射器，使己溶血的血液通过滤膜，以！OmL生理盐水洗涤滤膜3次。开启过滤器，取出薄膜，自然晾干后，置热苏木素中染色5min，水洗，待干，镜检。A2 淋巴液、鞠膜积液、乳魔尿内微丝蝴的检查A2. 1 淋巴液、精膜积液（或其他抽出液）直接涂片或用生理盐水稀释10倍离心后检查沉渣。液体蛋白含量高而呈胶状易凝者加抗凝剂后检查。A2. 2 乳
13、廉尿（或乳廉积液）：取乳康尿4mL于试管中，加乙酷2mL，混合振摇，使乳廉中脂肪充分溶解，弃去上层脂肪，加水稀释10倍后离心检查。A3 活体组织检查A3. 1 检查淋巴管、淋巴结内成虫：将手术取出的结节，用大头针固定于木板或软木板上，分离结节周围组织，仔细将病变的淋巴管壁切开，分离内容物，取出干酶样版样物检查。如于结节出现2周以后切除、解剖，则管内腋样物可能已纤维化。腋样物内含大量巨噬细胞、单核细胞、嗜酸粒细胞及夏雷晶体。将干酷样物或纤维组织移至玻片上，加数滴生理盐水，然后用解剖针将外层组织分离，即可见被包围的成虫。时间较久者发生粘连，虫体成碎段，不易将虫体与组织分离，则可用一针将包围的组织固
14、定，另针将虫体沿其长轴向端轻移，或将组织移至盛有生理盐水的培养皿中，使虫体半浮，较易分离。但如结节形成较久，则不易取得完整的成虫。v成虫或虫段可保存于甘油酒精（70%酒精95mL，甘油5mL）中供鉴定。A3. 2病理组织学检查：切下可疑的淋巴结、淋巴管结节或其他组织，用10%中性甲隆固定12天，移至70%酒精中作病理切片。在切片中除可发现丝虫成虫外，尚可见到嗜酸粒细胞、网状内皮细胞、淋巴细胞、浆细胞、纤维母细胞、异物巨细胞、肉芽肿、假错核、纤维组织增生、淋巴管周围炎、管腔内肉芽组织增生形成栓塞或息肉状阻塞管腔等病理变化。在切片中所见结构清楚的雌虫体内的微丝蝴体核清晰，所在淋巴管壁有少量浆细胞、
15、淋巴细胞和嗜酸粒细胞浸润，而无纤维素沉积或肉芽肿形成者，则成虫可能为活虫。如虫体周围有较多的嗜酸粒细胞和散在的组织，虫体被炎细胞包绕形成肉芽肿，纤维化后形成纤维化结节，或结节内虫体已钙化，则均为死虫。如出现中性粒细胞浸润、渗出，内膜内皮细胞肿大、增生，则为继发性细菌感染。时间接荧光抗体试验（IFAT)Bl. 1 抗原片附录B血清免疫学检查（补充件）Bl. 1. 1 马来丝虫成虫冰冻切片抗原z用马来丝虫感染期幼虫腹腔感染长爪沙鼠。6个月后，从感染鼠腹腔收集雌性成虫。用生理盐水洗涤2次，蒸馆水漂洗1次，包埋于3%5%甲基纤维素中，用冷冻切片机制成厚45pm的切片每一切片含46个虫体横断面），贴附于
16、洁净的载玻片上，用丙翻固定，干燥保存于20备用。296 GB 15 98 5 1995 Bl. 1. 2 马来微丝哟断片抗原从感染马来丝虫的长爪沙鼠腹腔液中收集马来微丝拗，用PBS（或生理盐水）洗净。其悬液贯冰格过夜，次日离心浓集，以甲醇固定，然后进行反复超声断碎，超声粉碎机输出功率不小子25W（每次30s，间隔3060s，共3Smin）.至微丝锄断片为长2030mo滴1滴微丝拗断片悬液（100断片滴）在洁净的载玻片t，经50左右热烘固定3min后使用。Bl. 2 血样：血清或滤纸血。Bl. 2. 1 血清：采集受检者的静脉血或末梢血，离心后收集血清。在低温下运送，4保存20c可保存2年左右。
17、其间不宜反复冻融，以免影响抗体效价。01.2.2 滤纸r血滴z用定量新华滤纸从受检者的耳垂或指尖取血冲吏血滴直径为1.2cm，血量约20!,（约相当血清1Ol，），编号、晾干后放入有干燥剂的塑料袋内低温保存。4（：可保存半年，20C可保存2年。Bl. 3 操作方法：受检血清用pH8.o、0.Olmol/L PBS稀释成l: 10或I: 20 （每一滤纸干血滴在0.1 或0.Znll，的PBS液中浸泡30n1in）。从冰箱取出抗原片，待复温后，在每切片或一滴抗原上加1滴稀释待检血清.1 37 c：湿育30mino用PBS洗3次（每次5min）后冷风吹干，滴加用PBS稀释的羊抗人lgG荧光抗体，f
18、JJ主湿育，洗涤，以0.01%伊文思蓝作背景染色Zmin，同上洗涤，吹干。再加缓冲甘油(pl-18.。）后在Z以盖玻片在荧光显微镜下检查。对阳性反应的血样需连续作倍比稀释检测，直至阴性反应为tI: h查后呈阳性反应的稀释度即为阳性终点滴度。B1. 4 反0.标准81.4. 1 马来丝虫成虫切片抗原，以虫体切面的荧光强度及荧光着色范围区分为4个等级：“一”虫体切而是桔红色无明显的黄绿色荧光；“”一般亮度的黄绿色荧光，显色范围较局限：“”中等亮度的黄绿色荧光，显色较广泛：“”明亮的黄绿色荧光，显色广泛。一般以1: 20血样滴度时荧光反应强度旦“十”及1t以上者判为阳性。81. 4. 2 做丝蝴断片
19、抗原，以微丝蝴断片的荧光强度及着色范围区分成4个等级：“一”微丝黝断端呈模糊的淡黄绿色或红色：“”断端呈黄绿色荧光，形似哑铃，反衬红色明显：“”断端黄绿色荧光显著！瑛t也高黄绿色荧光；“”断端和膜均呈明亮的黄绿色荧光。一般以110血样滴度时出现“”及其以仁的荧光反应，判为阳性。B2酶联免疫吸附试验（EI.ISA)B2. 1 抗原z马来丝虫成虫可溶性抗原，从感染马来丝虫长爪沙鼠的腹腔收集马来丝虫成虫。虫体经生理盐水洗泳和蒸馆水漂洗后，民丙翻脱脂干燥然后加0.01 %硫柳菜生理盐水研磨成匀浆，冻融3天（每天2次）J,j it 4 c冷浸34天，超声粉碎后低温高速（7OOOr/min）离心30min
20、，上清液即可溶性抗原。用分光光度仪测定235和280nm波长处的光密度值（）0）.接式也）计算抗原蛋白量2X(mg/mL)=(OD, OD2肘）x 0. 4 Bl ) 02.2操作hi去：B2. 2. 1 常规间接ELISA，用pH9.6, 0. 05mol/l，碳酸盐缓冲液将抗原按适宜的工作浓度（2Sg孔）稀释包被聚苯乙烯反应极每孔加0.3ml,4 C过夜。次日倾去抗原液用pH?.2 PBS吐温20(PBS/Tl洗涤3次每次5min，甩干。受检血清（或滤纸干血滴）用PBS/T稀释成1: 200，每孔加0.3mL，每样水力a:i孔，；可混往于37c：湿育泊，同上洗涤，甩干。每孔加入0.3mL
21、PBS/T的辣根过氧化物酶标记羊抗人lg(;fi;J上混育，）漾，甩干。然后加底物溶液邻苯二胶40mg，拧橡酸磷酸盐缓冲液50mL，蒸馆水50时，和30J-(，过氧化氢（H,0,)40pL o.3mL同上湿育，最后每孔加Zmol/J，硫酸（H,S(l,)751.终止反应。将每样品3孔的液量吸至比色杯（杯径cm），在分光光度仪上测量492nm波长处的光密度（）0）值。每板崎设阳性参考血清、阴性参考血清和空白对照孔。测得样品OD值进行校正。校正样品。D值样品OD值对照孔C)D值( BZ l 阳性参考血清C)D值对照孔OD值 GB 1 5 9 8 5 -1 9 9 5 B2. 2. 2 改良的间接E
22、LISA，按适宜工作浓度用pH9.6的0.05moL碳酸盐缓冲液稀释抗原，包被40孔聚苯乙烯反应板，每孔加0.lmL ,4过夜。次日倾去抗原液，用pH7.2 PRS/T洗涤3次，每次5min,甩干。受检血样用PBS/T稀释成1 200，每孔加O.lmL，每样本加2孔，置湿盒，37湿育30min，同上洗涤，甩干。每孔加0.lmL PBS/T稀释的辣根过氧化物酶标记羊抗人lg，同上湿育，洗涤，甩干。然后加底物溶液。lmL，同上湿育后加2mol/L硫酸（H,SO,l 25L终止反应。用专用酶标检测仪（以PBS对照孔校正苓点后）测定492（或490)nm波长的各孔OD值。每板设阳性参考血清，阴性参考血
23、清和PBS对照。每样品的（）D值以2孔的平均OD值计，再以同板的阳性参考血清OD值作校正。样本OD值校正样品OD值zm血i由础，= . ( B3 ) B2. 3 反应标准测定100份以上健康人的血清，求其OD值和标准差（S凹，以OD均值加2SD作为阳性反应阀值（通常为0.4）。当样品OD值等于或大于该值时即判为阳性。或以样品OD值（P）和阴性参考血清OD值(Nl的比值PIN二三2者为阳性。B3 溶液的配制B3. 1 pH8. 0,0. Olmol/L PBS液原液0.2mol/L磷酸盐缓冲液a. NaH2PO, 2H20 蒸馆水加至15. 6 g 500 ml, b. Na,HPO, 12H,
24、O 35. 82g 蒸馈水加至500 mL 取a液5.3mL,b液94.7mL,NaCl 17g加水至2OOOmL。B3. 2 pH8. 0缓冲甘油5份甘油（一级）和1份0.Olmol/L PBS(pH8. 0）混匀后冰箱保存（无气泡）。B3. 3 pH9. 6、0.05mol/L碳酸盐缓冲液Na2C02 NaHC03 蒸馆水加至B3. 4 pH7. 2 PBS吐温20NaCl KH,PO, 15. 9 g 2. 93 g 1 000 mL 8. 0 g 0. 2 g Na,HPO, 12H20 2. 9 g KCl 0. 2 g 吐温20O. 5 mL 临用前加蒸馆水至1 000 mL B3
25、. 5 pH5. 0磷酸盐拧橡酸缓冲液底物溶液O. lmol/l，拧橡酸溶液（21.041 g/L) o. 2mol/L Na,HPO, (28. 4g/L) 蒸馆水邻苯二胶l自用前加30%过氧化氢（H202)298 25. 7 mL 24. 3 mL 50 mL 40 mg 40 L C1 急性丝虫病（肢体、阴囊、女性乳房）GB 15985 1995 附录C对症治疗（参考件）所用；肖炎镇痛药，急性症状缓解后停药。对下肢急性淋巴结、淋巴管炎（流火）患者，如能于发作预兆l驯服消炎镇痛药，可明显减轻急性症状或制止发作。合并细菌感染者需给于抗菌治疗。C2 慢性丝虫病C2. 1 肢体淋巳水肿、象皮肿烘
26、绑疗法对患肢采用辐射热或微波透热烘疗后用弹性绷带包扎。每天1次，前者每次lh,20次为一疗程，休息半个月，进行下疗程z后者每次30min,15次为疗程，休息2个月，进行下一疗程。在烘疗和休息期间，白天均需用弹性绷带持续包扎患肢，治疗23个疗程。兼有足蝉的患者，用抗霉菌治疗以控制霉菌感染。c2. 2 乳麽尿4般治疗发作期间注意休息，忌食油类、肉类和蛋类食物。出现乳廉凝块、排尿困难和尿滞留者，应减少饮水茧，以子按摩下腹部；或用中链汹CMCT）代替普通食用油脂，能迅速解除病人痛苦。MCT用量为成人每次服4蚀，每天3次，连ml月为疗程，可间隔服23个疗程。发作频繁，病情严重病例可采用硝酸银灌注或手术治疗。c2. 3 鞠膜积液子术治疗鞠膜积液量多者用鞠膜翻转术治疗。附加说明：本标准山中华人民共和国卫生部提出。本标准由中国预防医学科学院寄生虫病研究所负责起草。本标准主要起草人孙德建、史宗俊、邓珊珊。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。l I
