1、ICS 65.150 B 52 GB 中华人民共和国国家标准GB/T 25888-2010 月鱼量Snakehead 2011-01-10发布数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会2011-06-01实施发布剧吕本标准的附录A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会泼水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位:中国水产科学研究院长江水产研究所。本标准主要起草人:方耀林、周瑞琼、孟彦、邹世平、张燕、许映芳。G/T 25888一2010I GB/T 25888-2010 月锺1 范围本标准确立了月鲤CChanna asiatica
2、 Linnaeus)的名称与分类、主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性、检测方法以及检验规则与结果判定。本标准适用于月鲤的种质检测与鉴定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 18654. 1 养殖鱼类种质检验第1部分:检验规则GB/T 18654. 2养殖鱼类种质检验第2部分:抽样方法GB/T 18654.3养殖鱼类种质检验第3部分:性状测定GB/
3、T 18654. 12 养殖鱼类种质检验第12部分:染色体组型分析3 名称与分类3. 1 学名月鲤CChanna asiatica Linnaeus)。3.2 分类地位直卢形目CPerciformes)、攀伊亚目CAnabantoidei)、鲤科CChannidae)、鲤属CChanna)。4 主要形态构造特征4.1 外部形态特征4. 1. 1 外形体呈圆筒形，后部侧扁。头略扁平，顶部被较大的鳞片，不规则。眼上侧位，位于头的前部。吻宽短，圆钝。口宽大。下顿突出，上、下顿均有细齿。鼻孔两对，前后分离，前鼻孔呈管状，向前伸过上唇;后鼻孔小，近眼前缘上方。侧线在臀鳝起点上方中断，折断处前后两端相隔1
4、个2个鳞片，后段贯穿于体侧中部。元腹鳝，胸鳝宽圆。背鳝、臀鳝基底长。尾鳝圆形。体绿褐或灰黑，腹部灰白色。体侧沿中线有7个12个向后两侧作斜向的斑纹。尾柄基部两侧各有一边缘为白色的深色近圆形斑块。背鳝与臀鳝上有白色斑点。月鲤外形图见图1。图1月锺外形图GB/T 25888-2010 4.1.2 可数性状4. 1. 2. 1 背鳝鳝式背鳝鳝式:D.41480 4. 1. 2. 2 臀鳝鳝式臀鳝鳝式:A.2632。4. 1. 2.3 胸鳝鳝式胸鳝鳝式:C.1416。4. 1. 2. 4 侧线鳞侧线鳞:53兰芳护204. 1. 2. 5 鲤靶数鱼思把数:第一直思弓外跑祀数1104. 1.3 可量性状体
5、长为体高的4.3倍6.9倍，为头长的3.1倍4.5倍。头长为吻长的4.4倍6.8倍，为眼径的4.3倍8.0倍，为眼间距的1.8倍4.3倍。体长为尾柄长的16.0倍24.0倍，为尾柄高的8.9倍12.6倍。尾柄长为尾柄高的0.3倍O.71倍。4.2 内部构造特征4.2.1瞟单室，元嫖管，细长。4.2.2 脊椎骨总撤脊椎骨总数5152。4.2.3 腹膜灰白色。5 生长与繁殖5.1 生长不同年龄组野生J鲤体长和体重的实测值见表10表1不同年龄组月鲤体长和体重的实测值年龄1 2 3 4 体长范围/cm8.013.5 18. 124. 2 23. 327.5 26, 431. 5 雌347. 2421.
6、 4 体重范围/g19. 231. 8 98.4-146.7 218. 6300. 2 体长范围/cm7. 513. 7 17. 422. 5 24. 127. 9 28. 432. 1 雄体重范围/g18. 729. 6 87. 2132. 1 207. 6314. 8 387. 6485. 4 5.2 繁殖5.2.1 成熟年龄5 29. 633. 8 453. 6604. 3 30. 233. 8 493. 6624. 5 在长江流域，雌雄月鲤的初次性成熟年龄均为2冬龄;在珠江流域雌雄月鲤的初次性成熟年龄均为1冬龄。5.2.2 产卵类型4月份至7月份为月踵的繁殖季节，5月份至6月份为繁殖盛
7、期，产卵适宜水温为18oc 28 oc。具筑巢行为，在一个繁殖季节可多次产卵，卵黄内有油球，为浮性卵。5.2.3 怀卵量绝对怀卵量为1000粒15000粒。相对怀卵量为15粒/g32粒/g。2 GB/T 25888-2010 6 遗传学特性6.1 染色体组型月鲤的体细胞染色体有两种核型:a) 2n=46，染色体臂数(NF):56，核型公式:2m十8sm+36st，t;染色体组型见图2。b) 2n=44，染色体臂数(NF):56，核型公式:4m+8sm+32st，t;染色体组型见图3088 nA 真售 1I Dn A民R A Jln 011 。由。ann 1)1:、禽AA ,. . L5阳一n图
8、2月蜡染色体组型(2n=46) 8& 88 ft 确籍I1 执a 1 。a费仿。 AA 精a。ft . . L一5一一III图3月撞染色体组型(2n=44) 6.2 同工酶月鲤脾脏乳酸脱氢酶(LDf同工酶电泳及扫描图见图4。LDH4 LDH4 LDH3 鞍慨:LDH2 LDH + 图4月盟脾脏乳酸脱氢酶(LDH)同工酶电泳固和扫描固3 GB/T 25888-2010 7 检测方法7. 1 抽样按GB/T18654.2的规定执行。7.2 主要形态构造特征按GB/T18654. 3的规定执行。7.3 年龄鉴定7.3.1 选取背鳝起点至侧线鳞之间的鳞片10片左右。7.3.2 在鱼体表取鳞部位涂上少许
9、淡氨水，当表皮和蒙古液溶解成胶状后，用抹布将其擦去。此时，鱼体体表上鳞片清晰可见，用慑子将鳞片取出后在清水中清洗干净。7.3.3 将鳞片按其在鱼体上的位置夹在两个载玻片的中央，贴上标签，两端用胶布带封好，备鉴定年龄。7.3.4 在显微镜10X4倍或10X5倍下，依据月鲤鳞片上的年轮标志数目鉴定年龄。月鲤年轮的主要特征表现在环片的切割现象。切割呈现2种不同的类型:普通切割型，表现为上一年的环片群在侧区与下一年的第1环片相切割，并伴随有环片的断裂、扭曲等现象;疏密切割型，表现为侧区环片的切割同时伴随有环片排列的疏密出现。7.4 怀卵量测定于繁殖季节，对临产卵前的雌鱼进行活体解剖，取出性成熟的卵巢(
10、凹期)，称重后，在卵巢组织前、中、后部各取0.5g左右试样，用5%(体积分数)福尔马林固定，在解剖镜下计数开始沉积卵黄的卵粒数，平行两次，求得试样的平均卵粒数即为卵密度，卵粒数/卵巢重(粒/g汀，以卵密度乘以卵巢童，即得卵巢中所含的全部卵粒数。雌鱼的绝对怀卵量G按式(1)计算:G=(n1/W1 + n2 /W2) /2 . ( 1 ) 式中zG一一绝对怀卵量，单位为粒;w 卵巢重量，单位为克(g);n1 试样1的卵粒数，单位为粒;W1 试样1的重量，单位为克(g); n2 试样2的卵粒数，单位为粒zW2 试样2的重量，单位为克(g)。7.5 染色体组型分析按GB/T18654. 12的规定执行
11、。7.6 同工酶分析7.6.1 试剂及配制方法同工酶各种试剂的配制见附录A。7.6.2 样晶的采集与制备取月鲤脾脏0.5g，加1.5 mL的磷酸缓冲液(0.1mol/L, pH=7.1)，在1mL匀浆器中冰浴匀浆，匀浆液于4.C、12000 r/min离心30min，取上清液，重复以上离心过程2次，至上清液澄清。7.6.3 制胶先将混匀的6.5%(质量分数)分离胶液倒入模板，插好梳子，置于36.C左右30min。待凝胶聚合好，置于4.C冰箱中保存，备用。7.6.4 点样点样量为20L.吸取18L样与2L澳酣蓝指示剂混匀，加到点样孔中。4 7.6.5 电泳分离7.6.5.1 采用聚丙烯酷胶凝胶垂
12、直板连续电泳。7.6.5.2 电极缓冲液:pH为8.3的Tris-甘氨酸。GB/T 25888-2010 7.6.5.3 电泳:稳压300V(起始电流约30mA)电泳5h6 h(澳酣蓝至胶边缘Zcm处)。7.6.5.4 染色:电泳结束后，放入预先配好并在37oc恒温箱中保温的同工酶染色液中染色，至酶带显色清晰。7.6.6 扫描本标准由双波长飞点扫描薄层分析仪根据酶带染色强度不同自动识别。8 检验规则与结果判定按GB/T18654. 1的规定执行。5 GB/T 25888-2010 附录A(规范性附录)同工酶各种试剂的配制A.1 磷酸缓冲液(0.1mol/L , pH=7. 1)的配制A. 1.
13、 1 A液0.1 mol/L，磷酸氢二铀(NazHP04)配制:取35.82 g Naz HP04 12Hz 0定容于1 000 mL蒸馆水中。A. 1. 2 B液0.1 mol/L，磷酸二氢铀CNaHzP04)配制:取13.80 g NaHzP04 Hz 0定容于1 000 mL蒸馆水中。A. 1.3 磷酸缓冲液由A液和B液按体积比67: 33的比例混合而成，现配现用。A.2 凝胶制备A. 2.1 凝胶制备溶液的配制各种凝胶制备溶液的配方见表A.1。表A.1各种凝胶制备溶液的配方溶液配制方法凝胶缓冲液取Tris56.75 g加200r蒸馆水，用浓盐酸调pH为8.9，加蒸馆水到250mL, 4
14、 .C贮存(用时稀释5倍)凝胶储液取丙烯酷胶33.3g、N，N-亚甲基双丙烯眈胶O.9 g、四甲基乙二胶(TEMED)338L溶于蒸馆水中定容到150mL, 4 c贮存过硫酸钱(AP)取过硫酸镀1.5 mg溶解到100mL蒸馆水中，4c贮存A.2.2 分离胶的制备用6.5%分离胶制成聚丙烯酷肢垂直板凝胶，该凝胶液配方见表A.20表A.2凝胶制备配方凝胶缓冲液/mL凝胶储液/mL过硫酸镀CAP)/mL纯水/mL总体积/mA.3 加样指示剂25 14.4 2.4 8.2 50 0.15%澳酣蓝-50%甘油:称取0.15g澳酣蓝溶于50mL蒸锢水，再加50mL甘油混匀。A.4 电极缓冲遭电极缓冲液母
15、液，其配方见表A.3。电泳时稀释10倍使用。6 溶液电极缓冲液母液(pH8.3) 表A.3电极缓冲液制备配制方法取甘氨酸28.80g溶于800mL水，用约6.00g的Tris调pH至8.3，加蒸馆水到1000mL GB/T 25888-2010 A.5 同工酶染色渣的配制A. 5.1 染色用各溶液配方见表A.4。表A.4染色用溶液配方溶液配制方法化硝基四氮瞠蓝(NBT)125 mg 辅酶1(NA) 250 mg A 吩嗦甲醋硫酸盐(PMS)10 mg 主4化纳(NaCl)145 mg 水(H20)100 mL B 乳酸纳15 mL 乳酸纳水(H20)85 mL C 取Tris60.5 g溶于8
16、00mL蒸馆水中，用盐酸调节pH至7.1，加蒸o. 5 mol/L Tris-HCl染色缓冲液(pH=7.D馆水到1000mL A.5.2 染色液配方:取A液10mL、B液10mL、C液18mL, Jj( 62 mL，混合均匀。EON-mNH阁。国华人民共和国家标准月鲤GB/T 25888-2010 由* 中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销晤印张O.75 字数13千字2011年2月第一次印刷开本880X12301/16 2011年2月第一版* 书号:155066. 1-41611 16.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价GB/T 25888-2010 打印日期:2011年3月30日F002A
