1、ICS 65.020 B 61 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 528-2010 代替NY.厅528-2002食用菌菌种生产技术规程Code of practice for spawn production of edible mushroom 2010-05-20发布2010-09-0实施争中华人民共和国农业部发布NY/T 528一2010前言本标准按照GB/T1. 1-2009给出的规则起草。本标准代替NY/T528一-2002(食用茵茵种生产技术规程)，与NY/T528-2002相比主要技术变化如下一二-修改了适用范围(见1，2002年版第1章); -增加了两个术语(见3.1、
2、3.10); 修改了环境卫生要求(见4.2.2，2002年版4.2.2);修改了使用品种和种源(见4.5，2002年版4.5);修改了容器(见4.7.1，2002年版4.7.1); 一删除了分装气见2002年版4.7.4);一修改了灭菌效果的检查方法(见4.7.5，2002年版4.7.的;一-增加了接种点要求气见4.7.7.5);修改了培养条件要求(见4.7.9，2002年版4.7.10);修改了留样的贮存温度(见4.7.13，2002年版4.7.14); 增加了标签、标志、包装、运输和贮存(见5)。本标准的附录A和附录B为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本标准
3、起草单位:农业部微生物肥料和食用菌菌种质量监督检验测试中心、中国农业科学院农业资源与农业区划研究所、中国农业科学院食用菌工程技术研究中心。本标准主要起草人.张金霞、黄晨阳、高巍、郑素月、张瑞颖、胡清秀、陈强。本标准于2002年8月首次发布，本次为第次修订。I NY/T 528-2010 食用菌菌种生产技术规程范围本标准规定了食用茵茵种生产的场地、厂房设置和布局、设备设施、使用品种、生产工艺流程、技术要求、标签、标志、包装、运输和贮存等。本标准适用于不需要伴生菌的各种各级食用菌菌种生产。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是
4、不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB 191 包装储运图示标志(GB191-2008, ISO 780:1997 ,MOO) GB 9688 食品包装用聚丙烯成型品卫生标准GB/T 12728一2006食用菌术语NY/T 1742-2009 食用茵茵种通用技术要求3 术语和定义GB/T 12728一2006界定的术语，以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了GB/T12728-2006中的-些术语和定义。31 32 3. 3 3.4 3.5 3.6 食用菌edible mushr咽Jm可食用的大型真菌，包括食用、食药兼用和药用三大类用途的种类
5、。注改写GB/T12728-26，定义2.1.40 晶种variety 经各种方法选育出来的具特异性、致(均一)性和稳定性可用于商业栽培的食用菌纯培养物。GB/T 12728-26，2.5.1J 菌种spawn 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。GB/T 12728-2006,2.5. 6J 母种stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物。也称一级种、试管种。GB/T 12728-2006 ,2.5. 7J 原种mother spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。GB/T 12728-2006
6、, 2.5. 8J NY!T 528-2010 栽培种planting spawn 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。GB!T 12728-26，2.5.9J 3. 7 种木wood-pieces 采用一定形状和大小的水质颗粒或树校培养的纯培养物，也称种粒或种枝。注改写GB/T12728 2006，定义2.5.2403. 8 固体培养基solid medium 以富含木质纤维素或淀粉类天然物质为主要原料，添加适量的有机氮源和元机盐类，具一定水分含量的培养基。常用的主要原料有:木屑、棉籽壳、秸秤、麦粒、谷粒、玉米粒等，常用的有机氮源有
7、麦款、米糠等，常用的元机盐类有硫酸钙、硫酸缓、磷酸二氢何等。固体培养基包括以阔叶树木屑为主要原料的木屑培养基、以草木植物为主要原料的草料培养基、以禾谷类种子为主要原料的谷粒培养基、以粪草为主要原料的粪草发酵料培养基、以种粒或种校为主要原料的种木培养基、以棉籽壳为主要原料的棉籽壳培养基等。3. 9 种性characters of variety 食用菌的品种特性，是鉴别食用茵茵种或品种优劣的重要标准之一。一般包括对温度、湿度、酸碱度、光线和氧气的要求，抗逆性、丰产性、出菇迟早、出菇潮数、栽培周期、商品质量及栽培习性等农艺性状。注:改写GB/TJ 2728-2006，定义2.5.L 3. 10 批
8、次spawnbatch 同一来源、同一品种、同一培养基配方、同一天接种、同一培养条件和质量基本一致的符合规定数量的菌种。每批次数量母种50支、原种二三2瓶(袋)、栽培种2000瓶(袋)。4 要求4. 1 技术人员应有与菌种生产所需要的技术人员，包括检验人员。4.2 场地选择4.2. 1 基本要求地势高燥，通风良好，排水畅通，交通便利。4. 2. 2 环境卫生要求300 m之内无规模养殖的禽畜舍、垃圾和粪便堆积场，无污水、废气、废渣、烟尘和粉尘污染源，50m 内元食用菌栽培场、集贸市场。4.3 厂房设置和布局4. 3. 1 设置和建造4.3. 1. 1 总则有各自隔离的摊晒场、原材料库、配料分装
9、室(场)、灭菌室、冷却室、接种室、培养室、贮存室、菌种检验室等。厂房从结构和功能上应满足食用茵茵种生产的基本需要。4 3. 1.2 摊晒场2 NY/T 528-2010 地面平整、光照充足、空旷宽阔、远离火源。4. 3. 1.3 原材料库防雨防潮，防虫、防鼠、防火、防杂菌污染。4. 3. 1. 4 配料分装室(场)水电方便，空间充足。如安排在室外，应有天棚，防雨防啊。4.3. 1. 5 灭菌室水电安装合理，操作安全，通风良好，排气通畅、迸出料方便，热源配套。4. 3. 1. 6 冷却室洁净、防尘、易散热。4.3. 1.7 接种室防尘性能良好，内壁和屋顶光滑，易于清洗和消毒，换气方便，空气洁净。
10、4. 3. 1. 8 培养室和贮存室内壁和屋顶光滑，便于清洗和消毒$墙壁厚度适当，利于控温、控湿，便于通风;有防虫防鼠措施。4.3. 1. 9 菌种检验室水电方便，利于装备相应的检验仪器和设备。4.3.2布局应按菌种生产工艺流程合理安排布局，无菌区与有菌区有效隔离。4.4 设备设施4.4. 1 基本设备应具有磅秤、天平、高压灭菌锅或常压灭菌锅、净化工作台或接种箱、调温设备、除湿设备、培养架、恒温箱或培养室、冰箱或冷库、显微镜等及常规用具。高压灭菌锅应使用经有资质部门生产与检验的安全合格产品。44.2 基本设施配料、分装、灭菌、冷却、接种、培养等各环节的设施应配套。冷却室、接种室、培养室和贮存室
11、都要有满足其功能的基本配套设施，如控温设施、消毒设施。4.5 使用品种和种源4.5. 1 品种从具相应技术资质的供种单位引种，且种性清楚。不应使用来历不明、种性不清、随意冠名的菌种和生产性状未经系统试验验证的组织分离物作种源生产菌种。4.5.2 种源质量检验母种生产单位每年在种源进入扩大生产程序之前，应进行菌种质量和种性检验，包括纯度、活力、菌丝长势的-致性、菌丝生长速度、菌落外观等，并做出菇试验，验证种性。种源出菇试验的方法及种源质量要求，应符合NY/T17422009中5.4的规定。4.5.3 移植扩大母种仅用于移植扩大原种，一支母种移植扩大原种不应超过6瓶(袋);原种移植扩大栽培种，瓶谷
12、粒种不应超过50瓶(袋).木屑种、草料种不应超过35瓶(袋)。4. 6 生产工艺流程培养基配制分装灭菌+冷却接种培养(检查)成品。4.7 生产过程中的技术要求4.7. 1 容器4. 7. 1. 1 使用原则3 NYjT 528-2010 每批次菌种的容器规格要一致。4.7 1 2母种使用玻璃试管或培养皿。试管的规格18rnrn X 180 rnm或20rnrn X 200 rnrn，棉塞要使用梳棉或化纤棉，不应使用脱脂棉;也可用硅胶塞代替棉塞。4.7. 1.3 原种使用850rnL以下、耐126C高温的元色或近元色的、瓶口直径4crn的玻璃瓶或近透明的耐高温塑料瓶，或15crnX 28 crn
13、耐126C高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都应使用棉塞，棉塞应符合4.7.1.2规定;也可用能满足滤菌和透气要求的无棉塑料盖代替棉塞。4. 7. 1. 4 栽培种使用符合4.7.1.3规定的容器，也可使用17crnX 35 crn耐126C高温符合GB9688卫生规定的聚丙烯塑料袋。各类容器都应使用棉塞或元棉塑料盖，并符合4.7.1.3规定。使用耐126C高温的具孔径。.2 frnO. 5m元菌透气膜的聚丙烯塑料袋，长宽厚为630rnrnX 360 rnrnX80rn，元菌透气膜2个，大小35rnrnX 35 mrn，或495rnmX 320 mmX 60m，元菌透气膜1个
14、，大小35mn川5rnm。4.7.2 培养原料4 7.2. 1 化学试剂类化学试剂类原料如硫酸镜、磷酸二氢饵等，要使用化学纯或以上级别的试剂。4.7. 2. 2 生物制剂和天然材料类生物制剂如酵母粉和蛋白胀，天然材料如木屑、棉籽壳、麦款等，要求新鲜、元虫、元瞒、无霉、洁净、干燥。4. 7. 3 培养基配方4.7.3 1 母种培养基一般应使用附录A中第A.1章规定的马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)或第人2章规定的综合马铃薯葡萄糖琼脂培养基(CPDA)，特殊种类需加入其生长所需特殊物质，如酵母粉、蛋白陈、麦芽汁、麦芽糖等，但不应过富。严格掌握pH，4.7. 3. 2 原种和栽培种培养基根据当地原料
15、资源和所生产品种的要求，使用适宜的培养基配方(见附录酌，严格掌握含水量和pH值，培养料填装要松紧适度。4. 7. 4 灭菌培养基配制后应在4h内进锅灭菌。母种培养基灭菌。11MPaO. 12 MPa, 30 min，木屑培养基和草料培养基灭茵0.12MPa,1. 5 h或O.14 MPaO. 15 MPa，1问谷粒培养基、粪草培养基和种木培养基灭菌O.14 MPaO. 15 MPa, 2. 5 h。装容量较大时，灭菌时间要适当延长。灭茵完毕后，应自然降压，不应强制降压。常压灭菌时，在3h之内使灭菌室温度达到100C，保持100C10 h12 h。母种培养基、原种培养基、谷粒培养基、粪草培养基和
16、种水培养基，应高压灭菌，不应常压灭菌。灭茵时应防止棉塞被冷凝水打湿。4. 7. 5 灭菌效果的检查母种培养基随机抽取3%5%的试管，直接置于28C恒温培养;原种和栽培种培养基按每次灭菌的数量随机抽取1%作为样品，挑取其中的基质颗粒经无菌操作接种于附录A.1规定的PDA培养基中，于28C恒温培养;48h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。4. 7. 6 冷却冷却室使用前要进行清洁和除尘处理，然后转入待接种的原种瓶(袋)或栽培种瓶(袋)，自然冷却3lJ适宜温度。4 NY/T 528-2010 4. 7. 7 接种4.7.7. 1 接种室(箱)的基本处理程序清洁搬人接种物和被接种物+接种室(箱)的消毒
17、处理。4.7.7. 2 接种室(箱)的消毒方法应药物消毒后，再用紫外灯照射。4.7.7.3 净化工作台的消毒处理方法应先用75%酒精或新1吉尔灭溶液进行表面擦拭消毒，之后预净20min。4.77.4 接种操作在无菌室(箱)或净化工作台上严格按无菌操作接种。每-箱(室)接种应为单-品种，避免错种，接种完成后及时贴好标签。4. 7. 7. 5 接种点各级菌种都应从容器开口处点接种，不应打孔多点接种。4. 7. 7. 6 接种室箱)后处理接种室Cti)每次使用后，要及时清理清洁，排除废气，清除废物，台面要用75%酒精或新洁尔灭溶液擦试消毒。4. 7. 8 培养室处理在使用培养室的前两天，采用无扬尘方
18、法清沽，并进行药物消毒杀菌和灭虫。4.7.9 培养不同种类或不同品种应分区培养。根据培养物的不同生长要求，给予其适宜的培养温度(多在室温200C 24 OC) ，保持空气相对湿度在75%以下，通风，避光。4.7. 10 培养期的检查各级菌种培养期间应定期检查，及时拣出不合格菌种。4.7. 11 入库完成培养的菌种要及时登记人库。4.7. 12记录生产各环节应详细记录。4.7. 13 留样各级菌种都应留样备查，留样的数量应以每个批号3支(瓶、袋)。草菇在130C 160C贮存;除竹蒜、毛木耳的母种不适于冰箱贮存外，其他种类有条件时，母种于40C60C贮存，原种和栽培种于lOC40C下，贮存至使用
19、者购买后在正常生产条件下该批菌种出第一潮菇(耳)。5 标签、标志、包装、运输和贮存5. 1 标签、标志出售的菌种应贴标签。注明菌种种类、品种、级别、接种日期、生产单位、地址电话等。外包装上应有防晰、防潮、防倒立、防高温、防雨、防重压等标志，标志应符合GB191的规定。5.2 包装母种的外包装用木盒或有足够强度的纸盒，原种和栽培种的外包装用木箱或有足够强度的纸箱，盒(丰富)内除菌种外的空隙用轻质材料填满塞牢。盒(箱)内附使用说明书。5.3 运输各级菌种运输时不得与有毒有害物品混装混运。运输中应有防晒、防潮、防雨、防冻、防震及防止杂菌污染的设施与措施。5 NY/T 528-2010 5.4贮存应在
20、干燥、低温、无阳光直射、元污染的场所贮存。草菇在130C160C贮存，除竹蒜、毛木耳母种不适于冰箱贮存外，其他种类有条件时，母种于40C60C、原种和栽培种于lOC40C的冰箱或冷库内贮存。日NY/T 528-2010 附录A规范性附录)母种常用培养基及其自己方A.1 PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，琼脂20g，水10mL，pH自然。A.2 CPDA培养基(综台马铃薯葡萄糖琼脂培养基)马铃薯200g(用浸出汁)，葡萄糖20g，磷酸二氢锦2g，硫酸镑。.5g，琼脂20g，水1000mL，pH自然。7 NYjT 528-2010 附录B(规范性附录)
21、原种和栽培种常用培养基配方及其适用种类B. 1 以木屑为主料的培养基配方见13.1. 1、B.1.Z、B.1. 3，适用于香菇、黑木耳、毛木耳、平菇、金针菇、滑菇、猴头菇、真姬菇等多数木腐菌类。B. 1. 1 阔叶树木屑78%，款皮zo%，糖1%，石膏1%，含水量58%士Z%。B. 1.2 阔叶树木屑63%，棉籽壳15%，款皮zo%，糖1%，石膏1%，含水量58%土Z%。B. 1.3 阔叶树木屑63%，王米芯粉15%，款皮zo%，糖1%，石膏1%，含水量58%士Z%oB.2 以棉籽壳为主料的培养基配方见B.Z. 1, B. Z. Z，B.Z.3，B.Z.4，适用于黑木耳、毛术耳、金针菇、滑菇、
22、真姬菇、杨树菇、鸡腿菇、猴头菇、侧耳属等多数水腐菌类。B. 2.1 棉籽壳99%，石膏1%，含水量60%士Z%。B.2.2 棉籽壳84%89%，麦款10%15%，石膏1%，含水量60%士Z%。B.2.3 棉籽壳54%69%，玉米芯ZO%30%，麦款10%15%，石膏1%，含水量60%士Z%。B.2.4 棉籽壳54%69%，阔叶树木屑ZO%30%，麦款10%15%，石膏1%，含水量60%士Z%。B.3 以棉籽亮或稻草为主的培养基配方见B.3. 1, B. 3. Z, B. 3. 3，适用于草菇。B. 3.1 棉籽壳99%，石灰1%，含水量68%土Z%。B. 3. 2 棉籽壳84%89%，麦款10
23、%15%，石灰1%，含水量68%士Z%。B. 3. 3 棉籽壳44%，碎稻草40%，麦款15%，石灰1%，含水量68%士Z%。B.4 发酵料培养基配方见B.4.1、B.4.Z，适用于双抱蘑菇、双环蘑菇、巴氏蘑菇等蘑菇属的种类。B. 4.1 发酵麦秸或稻草(干)77%，发酵牛粪粉(干)ZO%，石膏粉1%，碳酸钙Z%，含水量6Z%土1%，pH7.50B. 4. 2 发酵棉籽壳(干)97%，石膏粉1%，碳酸钙Z%，含水量55%:l:1%，pH7.5。B.5 谷粒培养基小麦、谷子、玉米或高粱97%98%，石膏Z%3%，含水量50%土1%，适用于双抱蘑菇、双环蘑菇、巴氏蘑菇等蘑菇属的种类，也可用于侧耳属各种和金针菇的原种。B.6 以种木(枝)为主料的培养基阔叶树种木70%75%，附录B.1. 1配方的培养基Z5%30%。适用于多数木腐菌类。8
