1、ICS 67 050B 50 SB中华人民共和国水产行业标准SCT 30412008水产品中苯并(a)芘的测定高效液相色谱法Determination of benzo(a)pyrene in aquatic productsHigh performance liquid chromatography20080807发布 20080807实施中华人民共和国农业部发布前 言本标准的附录为赘料性附录。丰标准由中华人民共和国农业部撞业局提出。本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会门口。本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所，本标准主要起草人：杨贤庆、陈胜军、事来好、岑剑伟、
2、郝淑贤、戚勃、马海霞sc，T 3041 2008范围水产品中苯并(a)芘的测定高效液相色谱法水标准规定了水产品中苯并(a)芘的高教濉相色谱测定方法本标准适用于水产品及水产加下品中苯井(a)芘的4定。2规范性引用文件soT 304I 28r别文什中的条款通过小标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修玎版均不适用于本标准然而鼓励根据本标准达成协议时各方研究是否可使用这些文件的最新版本。儿是卜注日期的一川U文什，其最新版本适用于小标准。c,BiT 6682分析实验室用水规格干i式验方法SCT 3016水产品抽样方法3方法原理州经氢氧化钾电化后用正
3、己烷提取通过同相柱净化用正己烷二寰【甲烷溶液洗脱，旋转蒸拉器燕干，姨渣用乙腈溶解，经反帽色谱柱分离。荧光检测嚣检测，外标法定量。4试剂除特别照明外，所用试剂均为分析纯。4 I水：符合GBT 6G82一级水的耍求。4 2乙腈：色潜纯。4 3甲醇。4 4正己烷。4 5二氯甲烷。4 6无水硫醴钠：630T灼烧4 h冷却至窒温，贮存于F燥器中备川。4 7固相革般柱：佛罗里柱(Florisil)，250 rag，3mI使用前活化。4 8 50氢氧化钾溶液：称取50 0 g氢氧化钾加适量蒸馏水溶解，冷却后，用蒸馏水稀释定容至100ml。，摇匀即可。4 9正己烷一氯甲烷溶叵：将2ml。二氯甲烷加到6mL正己
4、烷f液巾，4 10苯井(a)芘标准品：纯度98 0H。4 11标准贮备液：准确称琅苯并(a)芘标准品0 OiO 0 g置于100mL容量瓶中，加乙腈定夺至刻度，藩贮备液诳崖为100 ngm【。置4冰箱中密封保存(保存时间不超过3个月)，4 12标准T作液：准确吸取1 00m1，的标准贮备液置于i00m【J容量瓶中用乙腈稀释至刻度。分别准确吸取一定体积的谚溶瘦制成浓度为0 5 nmL、3 0 rigmL、lO 0 rigmL、50 0 rigmT。、1 00 0rigmI。、1 30 O rigm1。、200 0 ngm1的标准T作液。5仪器设备5 I岛效液相色谱仪：酉己荧光检测器；iSCT 3
5、041-20085 2离C,9l：5 000 rrain。5 3超声被震荡器。5 4旋转蒸发器。55旋涡振蔼器。5 6分析天平：感量o 01 g和o D00 l g。57氯吹仪。58高速组织捣碎机。5 9无水硫醚钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠25 g。510固相革取装置。5 11圆底烧瓶50mL和100mI，。5 12试管：10mL；5 13聚丙烯离心管：i00 ml。5 14微孔过滤膜：孔径0坫,um。6测定步骤6 1试样制备6 1 1鲜活水产品的试样制备：按SOT 3016的规定执行。6 1 2水产加工品的试样制备：抽取至少3个包装件取试样200 g绞碎混旨均匀后分为两份-一份用于检验
6、，另一份作为留样。6 2提取称取试样5 g(精确至001 g)，加230mL=角瓶中，加25mL甲醇和50“的氢氧化钾溶液(4 8)10 ml。，在60C水浴中浸提30 min，不时振摇。然后再超声振蔼10 mln，转穆至100 mI一聚丙烯离0管中，,bOA20mL正己烷，旋涡混匀5min，4 000 rmm离心N0ntin分层，取上层正己烷相经无水硫酸钠杜滤100mL嚆I底烧瓶中，再用1jmI，正己烷按l述操作重复提取水相一线。将提取渍n 50C水浴中旋转蒸发，当圆底烧瓶中剩下约lmL渣体时，取下唰底烧瓶，将液体移人斌管中，再加2 TnL正己烷清诜，合并到试管中，重复清洗一次。收集的液体留
7、过柱用；6 3净化先使用3 mL一氯甲烷、s mL正己烷活化圊相萃靴柱(4 7)，流速约为2 fnL，rmn。将提取液州10mI正己烷洗柱子中，再用8mI的正己烷二氯甲烷溶液(4 9)洗脱用舳m1圆底烧瓶收集洗脱液。将洗脱液在j0水浴中旋转蒸发浓缩，待瓶巾剩下约1mL时，取下唧底烧瓶，将葭体移人试管巾，再-,b0人2mL正已烷清洗圆底烧瓶2次，合并至试管中，氮气吹干，准确加l_00mL五腈，超声溶解后，用0 45 Hm的微孔滤膜过滤，供高效谴相色暗仪测定。6 4试样测定6 4 1色谱条件6 4 1 1色谱柱：厦相CI250 minX4 6一，粒度5岬；或与之相肖的色谱柱。6 4 1 2流动相：
8、乙腈上水【75+25)，6 4 1 3流速11 0 nlLrain。6 41 4挂温：35。6 4 1 5检趔4器波长：激发波长237 mm发射波长405啪，6 41 6进样昔，20lL。SCl304120086 4 2色谱分析：分别取标准丁作液(4 1 2)和试样提取梭于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱分析，记录井析结粜，响应值均应在仪器检测的线性范围之内根据标准品的保留时问定性，外标法定量。标准品色谱图参见附录A。6 5空白试验不加试样，在相同试验条件下，与试样测定的同批进行空白试验。7计算试样巾苯井(a)芘的含量拄式(1)计算。计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字。X：CXV1
9、 000 nm式中：x 觯中苯并(a)芘的台孱，单位为微克每千克(”gkg)；(一试样中苯井(a)芘的肯量，单位为微克每毫升(EmL)m试样质量单位为克(g)V试样定容的体积单忙为毫一(mL)，8方法夏敏度、准确度和精密度8 1灵敏度水方法最低椅j限为0 1 ugkg最低定量限为0 5“gkg。8 2准确度本方法添加浓度为0 5,gkg40t,gkg时，回收率为7j“儿o8 3精密度小方法批内和批间的相对标准偏差15“。sc7T 3041 200B附录AC资料性附录】苯井(a芘藏相色谱田A 1浓度为5 mgL苯并(a)茈f|_标准液相色谱图见图A瞳A 1 浓度为5删IJ苯井aI芘的标准蘸相色谱圈A 2试样空白色谱图见图九2。围A 2试样空白色谱圈A 3试样巾苯并(a)芘色谱罔见罔A 3SCT 30412008图A 3试样中苯井(a)芘色谱图
