1、ICS 85010Y 30 a国中华人民共和国国家标准GBT 126612008代替GBT 12661 1990纸和纸板 菌落总数的测定Paper and board-Determination of microbiological properties(Total【bacteriaI count)(ISO 87841：2005，Pulp，paper and board-Microbiological examination-Part 1：Total count of bacteria，yeast andmould based on disintegration，MC D)2008-08-19
2、发布 2009-05-0 1实施宰瞀鳃鬻瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会仪1”前 言GBT 126612008本标准修改采用ISO 87841：2005纸浆、纸和纸板微生物的测定第1部分：基于降解作用的细菌、酵母和真菌总数。本标准与IS0 8784-1：2005的主要差异如下：范围中明确本标准适用于大多数纸和纸板，尤其是与食品接触的纸和纸板(本版的第1章)；范围中规定了纸和纸板内部及表面茵落总数的测定方法(本版的第1章)；规范性引用文件将IsO 8784一l：2005中引用的国际标准转化为与之相对应的国家标准，取消了有关纸浆的引用标准(本版的第2章)；将IsO 87841：2005中第4
3、章的培养温度由37改为352，取消了其他菌类的测定要求(本版的第3章)；取消了1sO 87841：2005中的511和512，增加了附录A；增加了仪器的内容(本版的第5章)；增加了仪器和培养基的灭菌方法(本版的第6章)；修改了结果的计算和表述(本版的第9章)。本标准与ISO 8784一l：2005的结构对比在附录B中列出。本标准与ISO 87841：2005的技术性差异在附录C中列出。本标准代替GBT 12661 1990纸和纸板菌落总数的测定法。本标准与GBT 12661-1990相比主要变化如下：增加了前言；修改了范围，范围中明确本标准适用于大多数纸和纸板，尤其是与食品接触的纸和纸板(19
4、90版的第1章，本版的第1章)；增加了规范性引用文件(本版的第2章)；增加了原理(本版的第3章)；修改了试剂的要求(1990版的第6章；本版的第4章)；修改了仪器的要求(1990版的第5章；本版的第5章)；修改了试样的采取和制备(1990版的第8章；本版的第7章)；增加了结果的报告内容(本版的第9章)；修改了操作步骤中的内容，将30土1下培养72 h改为35土2下培养48 h(1990版的第9章；本版的第8章)；增加了资料性附录B和附录c。本标准的附录A为规范性附录，附录B、附录c为资料性附录。本标准由中国轻工业联合会提出。本标准由全国造纸工业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：天津市轻工业
5、造纸技术研究所、中国制浆造纸研究院。本标准主要起草人：聂俊红。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 12661-1990。本标准由全国造纸工业标准化技术委员会负责解释。1范围纸和纸板菌落总数的测定本标准规定了纸和纸板内部及表面菌落总数的测定方法。本标准适用于大多数纸和纸板，尤其是与食品接触的纸和纸板。2规范性引用文件GBT 126612008下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本
6、标准。GBT 450纸和纸板试样的采取及试样纵横向、正反面的测定(GBT 450 2008，ISO 186：2002。MOD)3原理将纸或纸板碎解后的悬浮液按规定的稀释浓度，在指定的培养基上制备成平板。在35土2有氧环境下培养48 h，按选择的平板和稀释因子计算每克样品的菌落总数。4试剂41乙醇：浓度为75(质量分数)。42培养基：营养琼脂培养基，其组成见第A1章。如果使用代替的营养琼脂应在试验报告中说明。43稀释液：灭菌生理盐水。5仪器一般实验室仪器及51天平：感量01 g。52放大镜：放大倍数10或15，做平板菌落计数用。53塞子：非脱脂棉或一次性使用的塞子。54锥形瓶：容量200 mL、
7、500 mL，并配有塞子(53)。55玻璃珠：直径5 mm。56保温箱：温度可以控制在351。57 pH计或6480精密pH试纸。58高压灭菌锅：可以在120和100 kPa的条件下操作。59烘箱：可以在1652时工作3 h。510酒精灯。51 1 刀或剪刀(灭菌)：用来切纸或纸板。512镊子(灭菌)：用来夹住纸或纸板的样品。513移液管或注射器：校准过的5 mL移液管或5 mL医用注射器。灭菌前，全部移液管的末端大口应用棉花塞住，将移液管或注射器放人金属盒或牛皮纸袋内进行灭菌。514培养皿：规格为幻o mm、90 ram(玻璃或一次性使用的平rm)。1GBT 1266120086仪器和培养基
8、的灭菌根据器材选用灭菌方法。61湿热灭菌：高压灭菌锅(58)。以下各项在120、100 kPa下灭菌20 min。a)锥形瓶(54)装玻璃珠(55)、稀释液(43)；b)培养基(42)。62干热灭菌：烘箱(59)。以下各项在165士2下，灭菌3 h。a)培养皿(514)；b)移液管或注射器(513)。加热前，移液管或注射器应完全干燥。63燃烧：酒精灯(510)。刀剪、镊子、刀具及类似的器具，应在使用前用75(质量分数)乙醇(41)浸泡。需要剪切试样时应从酒精中取出，流淌片刻，然后用酒精灯(510)燃掉器具上剩余的酒精。7试样的采取和制备71按照GBT 450规定取样，并作如下补充。72平板和卷
9、筒包装的纸或纸板取样时，从每单位样品中弃去纸或纸板的顶部几层，以除去污染的表面。然后用无菌刀(511)平行于纸轴或平板纸的一边切两刀，再垂直切两刀，可为几层纸的厚度。切下矩形样品，去掉上层纸页和两端纸边，然后用合适的包装容器包装。一组试样应至少包含5个纸页(3个用于测定，2个用作保护页)，样品规格应最少为200 mmX 250 mm。73试样的制备：在无菌室内操作，用无菌镊子(512)夹出样品。用同样的方法将样品剪成5 mm5 mm左右的方块，放在天平上的培养皿(514)中，不应加盖，称取试样i0 g。8操作步骤81试样悬浮液的制备向盛有i00 mL稀释液(43)的内装玻璃珠(55)的锥形瓶(
10、54)中，倒人10 g试样。充分摇动约10 min，直至悬浮液不再含有纤维团块，制成1：100的悬浮液。82平板分离和保温培养称取试样和进行平板分离，应是无菌室，确保无菌操作。821涂板前用30w紫外线灯管灭菌30min。822用移液管(513)吸取5 mL配制好的悬浮液(8I)，分别加到5个培养皿中，每个培养皿各1 mL。然后在每个培养皿中倒入冷却至约45的培养基(第A1章)15 mL20 mL，立即摇动各培养基使纤维分散，以达到培养基和纤维均匀分布，以便准确计算菌落数。每一批试验的培养基应作一个对照培养皿，以检查其无菌性和是否有空气污染。823如果预计试样中含有较多的菌落总数，可进一步配制
11、更高稀释度的悬浮液。但每做一个新的稀释度，应更换移液管(513)。824尽量将试样稀释度调节到每个培养皿产生30300菌落数。对于那些细菌含量较低的试样，可降低其稀释度。825接种后的培养胍，水平放在桌面上，使其凝固。然后颠倒过来放入保温箱(56)中，在35士2条件下保温培养48 h。2GBT 12661200883菌落计数检查有菌落生长的培养皿。可将培养皿的背面划成几等份，用肉眼观察，并用放大镜(52)复查有无遗漏，记下菌落数和稀释度。9结果的表述91结果报告菌落呈片状生长的平板不宜采用；计数符合要求的平板上的菌落，按式(1)计算：XAK5 (1)式中：x细菌菌落总数，单位为菌落形成单位每克
12、(CFUg)；A5块培养基平板上的细菌菌落总数，单位为菌落形成单位每克(CFUg)；K稀释度。当菌落数在i00以内时，按实有数报告大于i00时，采用两位有效数字。92不含菌落如果最初的悬浮液不含菌落，那么将结果报告如下：每克试样不超过10个菌落形成单位。10精密度微生物学家承认在普通平板分离计数中存在10的固有误差。该方法使用平板分离计数，因此所固有的误差微生物学家可以理解。几位有能力的微生物学家同时对试样进行平板分离，结果显示彼此之间的误差为5。11试验报告试验报告应包括以下内容：a)本标准编号；b)鉴定试样的所有资料；c)试验时间和地点；d) 以每克试样所含菌落总数表示的结果；e)任何偏离
13、本标准的操作或能够影响试验结果的工作条件。GBT 126612008A1营养琼脂培养基成分牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水A2制备附录A(规范性附录)培养基含量5 g10 g0 g15 g20 g1 000mL除琼脂外，将其他成分溶解于蒸馏水中，调pH至7274。然后加入琼脂，加热溶解，分装后在121灭菌15 rain，备用。试验室制备上述培养基时，应保证上述组分完全溶解，然后置人合适的容器灭菌。使用琼脂时，应参照其包装上的说明进行。附录B(资料性附录)本标准与对应的ISO 8784-I：2005章条编号对照表B1给出了本标准与对应的IsO 87841：2005章条编号对照一览表。表B1 本标准与
14、对应的ISO 8784-I：2005章条编号对照GBT 126612008本标准章条编号 对应国际标准章条编号1 12 23 44 551513 616661637172 773 88182 929383 i09192 1193 1210 13A1 附录AA2附录B附录BGBT 126612008附录C(资料性附录)本标准与Iso 8784-1：2005的技术性差异及其原园表c1给出了本标准与ISO 87841：2005的技术性差异及其原因的一览表。表C1本标准与ISO 8784-1：2005技术性差异殛原因本标准的章条编号 技术性差异 原 因与晷际标准的范围和攫I定菌类不同。 Is0 87841：2005范围适用于纸浆、纸本标准适用于大多数纸和纸板，尤其针对涉 和纸板，并规定了细菌、酵母和真菌的测1 及用于与食品接触的这类纸和纸板。本标准只定。本次修订只采用国际标准的一部分。规定了纸和纸板内部和表面菌落总数的测定不包括纸浆及酵母和真菌的测定方法2 将国际标准转化为与之相对应的国家标准 以适合我国国情修改了ISO 87841：2005中第4章的“在 与GB 159792002一次性使用卫生337培养”改为“35士2”(本标准的第3章) 用品卫生标准中的规定相符舍6 增加了仪器和培养基的灭菌方法 根据实际的操作情况9 修改了结果的计算和表述 符合标准的实际的操作情况
