1、ICS 65. 120 B 46 中华人民11: ./、GB 和国国家标准GB/T 17814-2011 代替GB/T17814-1999 饲料中丁基瓷基茵香醋、二丁基挂基甲苯、乙氧睡和没食子酸丙醋的测定Determination of butyl hydroxy anisole, dibutyl hydroxy toluene, ethoxyquin and propyl gallate in feeds 2011-12-30发布数码防伪中华人民共和国国家质量监督检验检痊总局中国国家标准化管理委员会2012-06-01实施发布GB/T 17814-2011 前言本标准按照GB/T1. 1-2
2、009给出的规则起草。本标准代替GB/T17814-1999(饲料中丁基是基苗香醋、二丁基是基甲苯和乙氧喳的测定。本标准与GB/T17814-1999相比主要变化如下:一标准名称更改为饲料中丁基是基茵香醋、二丁基是基甲苯、乙氧喳和没食子酸丙醋的测定;-一增加了用高效液相色谱法测定饲料中丁基是基苗香醒(BHA)、二丁基是基甲苯(BHT)、乙氧喳(EQ)和没食子酸丙醋(PG)含量作为第一法(仲裁法)，原标准中气相色谱法测定饲料中丁基是基茵香醒(BHA)、二丁基是基甲苯(BHT)和乙氧喳(EQ)含量作为第二法。本标准由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)归口。本标准起草单位:上海市兽药饲
3、料检测所、中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所国家饲料质量监督检验中心(北京门。本标准主要起草人:商军、黄士新、王蓓、华贤辉、潘娟、蔡金华、刘雅妮、曹莹、李兰。本标准所代替标准的历次版本发布情况为:一一-GB/T17814-1999。I 1 范围饲料中丁基瓷基茵香醋、二丁基瓷基甲苯、乙氧睡和没食子酸丙醋的测定GB/T 17814-2011 本标准规定了饲料中丁基是基菌香酷(BHA)、二丁基经基甲苯(BHT)、乙氧喳(EQ)和没食子酸丙醋(PG)的高效液相色谱测定方法和饲料中丁基是基菌香酷(BHA)、二丁基是基甲苯(BHT)、乙氧喳(EQ)的气相色谱测定方法。本标准高效液相色谱测定方法适用
4、于配合饲料、复合预混合饲料、浓缩饲料、鱼粉和骨粉中丁基是基菌香酷(BHA)、二丁基是基甲苯(BHT)、乙氧喳(EQ)和没食子酸丙醋(PG)含量的测定;气相色谱测定方法适用于配合饲料、鱼粉中丁基起基菌香酷(BHA)、二丁基是基甲苯(BHT)和乙氧喳(EQ)含量的测定。高效液相色谱测定方法的检出限为:丁基是基茵香酷(BHA)1. 1 mg/kg、二丁基是基甲苯(BHT)1.6 mg/kg、乙氧喳(EQ)1. 8 mg/kg、没食子酸丙醋(PG)1. 3 mg/kg;定量限为:丁基是基菌香醒(BHA)5.6 mg/kg、二丁基是基甲苯(BHT)8.0 mg/kg、乙氧喳(EQ)8. 8 mg/kg、
5、没食子酸丙醋(PG)6.5 mg/kg。2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法GB/T 14699. 1饲料采样GB/T 20195动物饲料试样的制备3 原理高效液相色谱法:用乙腊超声提取试样中BHA、BHT、EQ和PG，提取液经有机相针式滤器过滤，滤液经0.22m有机滤膜过滤，滤液经反相柱的高效液相色谱仪分离，紫外检测器检测，外标法定量。气相色谱法:试样中BHA、BHT和EQ用正己烧提取，离心分离后(如遇干扰待
6、测组分的样品，则需取上清液，用柱层析净化处理)，取上清液用气相色谱、FID检测器检测，外标法定量。4 实验方法本标准所用试剂和水，未注明其要求时，均指分析纯和符合GB/T6682中规定的三级水。色谱分析中所用水均为符合GB/T6682中规定的一级用水。4.1 第一法高效灌相色谱法(仲裁法)4.1.1 试剂和溶液4. 1. 1. 1 乙睛:色谱纯。1 GB/T 17814-2011 4. 1. 1.2 乙酸。4.1. 1. 3 乙酸溶液(2%):量取20.0mL乙酸(4.1.1.2)，用水稀释至1000 mL，摇匀，即得。4. 1. 1. 4 丁基是基菌香酷标准品(BHA):含量注96.0%。4
7、. 1. 1. 5 二丁基是基甲苯标准品(BHT):含量二三96.0%。4. 1. 1. 6 乙氧喳标准品(EQ):含量注96.0%。4. 1. 1. 7 没食子酸丙醋标准品(PG):含量注96.0%。4.1. 1. 8 混合标准储备液:分别称取BHA(4.1. 1.的、BHT(4.1. 1. 5)、EQ(4.1. 1. 6)0. 250 g(精确至0.0001 g，视其含量，换算成100%再称样)和PG(4.1. 1. 7)0. 125 g(精确至0.0001 g，视其含量，换算成100%再称样)，置250mL棕色容量瓶中，用乙睛(4.1.1. 1)溶解，定容至刻度，摇匀;精密量取该液20.
8、00 mL，置200mL棕色容量瓶中，用乙睛(4.1.1.1)定容至刻度，摇匀。使PG浓度为0.05mg/mL, BHA、BHT、EQ浓度为0.1mg/tnL，贮存于4.C冰箱中，有效期为2周。4. 1. 1. 9 混合标准工作液z分别精密量取混合标准储备液(4.1.1. 8)0. 50 mL, 2. 00 mL, 4. 00 mL, 8.00 mL,16. 00 mL, 20. 00 mL, 25. 00 mL置50mL棕色容量瓶中，用乙腊定容至刻度，摇匀，配制成PG为0.50g/mL，2.00阅jmL，4.00g/mL，8.00g/mL，16.0周/mL，20.0g/mL和25.0g/mL
9、标准工作液，BHA、BHT、EQ为1.00g/mL，4.00g/mL， 8.00g/mL， 16.0g/mL，32.0g/mL， 40.0g/mL和50.0g/mL标准工作液。临用现配。4. 1.2 仪器和设备4. 1.2. 1 实验室常用仪器设备。4. 1. 2. 2 分析天平:感量为0.0001g. 4. 1.2.3 具塞三角瓶:250mL 4.1.2.4 超声波清洗器。4. 1. 2. 5 一次性注射器:10mL。4. 1. 2. 6 有机相针式滤器:直径25mm，孔径O.45mo 4. 1. 2. 7 微孔惊膜:有机相，孔径0.22m。4.1.2.8 高效液相色谱仪z配有紫外检测器或二
10、级管阵列检测器。4. 1. 3 试样制备按GB/T14699.1采样，按GB;T20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，混匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。4. 1. 4 分析步骤4. 1. 4. 1 试样溶灌制备称取试样2g5 g(精确至0.0001 g)，置250mL具塞三角瓶(4.1.2. 3)中，精密加入乙腊(4. 1. 1.1)50. 00 mL，摇匀，置超声波清洗器(4.1.2.的中提取40min，在提取过程中振摇2次3次。冷却至室温，摇匀，静置。用一次性注射器(4.1.2. 5)吸取上述提取液10mL，用有机相针式滤器(4.1.2. 6) 过滤，滤液经0.22m微孔滤
11、膜(4.1.2.7)滤过，滤液作为试样溶液，供液相色谱测定。4. 1. 4. 2 测定4. 1.4.2. 1 液相色谱参考条件2 色谱柱:C18柱，长150mm，内径3.9mm，粒径5m，或性能相当者;柱温:室温;流动相:乙腊(4.1.1.1)+乙酸溶液(4.1.1.3)=68+32(体积比); 流速:0.5rnL/rnin; 检测波长:280nrn; 进样量:20L;色谱图:参见附录A。4. 1.4.2.2 标准曲线绘制GB/T 17814-2011 按液相色谱参考条件(4.1.4. 2.口，向基线平稳的高效液相色谱仪(4.1.2.8)连续注入棍合标准工作液(4.1.1.9)，浓度由低到高，
12、以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作图，得到标准曲线回归方程。4. 1.4.2.3 定量测定注入试样溶液(4.1.4. 1)，其中PG、BHA、EQ和BHT的峰面积响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进行分析。依峰面积，从标准曲线中得到试样溶液(4.1. 4.1)中PG、BHA、EQ或BHT的浓度。4. 1.4.2.4 结果计算试样中PG、BHA、EQ和BHT的含量丸，以质量分数表示，单位为毫克每千克(rng/kg)，按式(1)计算。式中zX1 =兰卫兰卫-m . ( 1 ) c一一由标准曲线而得的试样液中PG、BHA、EQ或BHT的浓度，单位为微克每毫升(g/rnL); V一一
13、试样定容体积，单位毫升(rnL); D一一试样稀释倍数;m一一试样质量，单位为克(g)。4. 1. 4. 2.5 结果表述测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留到小数点后一位。4. 1.5 重复性在重复性条件下，同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.2第二法气相色谱法注:检测全过程，尽可能避光(或不在强光下操作，以减少损失。4.2. 1 试剂和溶液4.2. 1. 1 正己烧。4.2. 1. 2 丙酣。4.2. 1.3 二氯甲烧。4.2. 1. 4 二氯甲烧-丙酣混合液:9+1，体积比。4.2. 1. 5 元水硫酸铀:500oc烘4h。4.2.
14、1.6 氟罗里硅土z孔径177rn149rn(80目100目)，5500C烘4h，存于干燥器中。3 GB/T 17814-2011 4.2. 1.7 助滤剂:Celite545 , 20m45ma 4.2. 1.8 医用脱脂棉。4.2. 1.9 t昆合标准溶液:分别称取BHA(4.1. 1. 4)、BHT(4.1. 1. 5)、EQ(4.1.1. 6)0. 5 g(精确至0.0001 g，视其含量，换算成100%再称样)，置于50mL棕色容量瓶中，以正己烧(4.2.1.1)溶解并定容。此液为10mg/mL。然后稀释成系列标准液:1.00 mg/mL,O. 50 mg/mL,0.10 mg/mL
15、, O. 05 mg/mL, 0.01 mg/mL。4.2.2 仪器和设备4.2.2. 1 气相色谱仪:配置氢火焰离子化检测器(FID)。4.2.2.2 氮气钢瓶:氮气纯度为99.99%。4.2.2.3 氢气发生器z氢气纯度为99.99%。4.2.2.4 空气钢瓶:一般压缩空气。4.2.2.5 离心机:4000r/min。4.2.2.6 粉碎机:粉碎粒度达380m(40目)。4.2.2.7 超声波处理机。4.2.2.8 微型混合器。4.2.2.9 分析天平t感量O.)OO 1 ga 4.2.2. 10 具塞刻度玻璃试管:10mL。4.2.2. 11 铝制试管架。4.2.2. 12 具活塞层析柱
16、:15 cmX , 1 cma 4.2.2.13 旋转蒸发器:带抽真空装置(或真空泵)。4.2.2.14 浓缩烧瓶:150mL，带5mL刻度尾接管。4.2.3 试样制备按GB/T14699. 1采样，按GB/T20195制备试样，磨碎，通过0.45mm孔筛，海匀，装入密闭容器中，避光低温保存备用。4.2.4 分析步骤4.2.4. 1 试样溶液制备4.2.4. 1. 1 提取称取试样2g(精确至0.0001 g)于10mL具塞刻度试管中，加人少许元水硫酸纳(4.2.1.日，再加5.0 mL正己烧(4.2.1.1)，加塞。在微型混合器(4.2.2.8)上混合0.5min，将试管放至u试管架上，连同
17、试管架一起放入超声波(4.2.2.7)处理槽内，槽内水位以刚好与试管中试样液位取齐或稍过，超声提取15 mina取出，将试管外水液擦去，放入离心机(4.2.2.5)，以4000 r/min离心2min，取出试管。上清液为待测溶液。注1:如遇较难提取的试样，可于前一天称样，加正己烧浸泡过夜，第二天再提取测定。注2:也适合于维生素预混料、单组分抗氧化剂BHA、BHT、EQ的测定，而且可免除程序升温，节省时间。4.2.4. 1. 2 净化4. 2. 4. 1. 2. 1 如遇干扰待测组分的样品，须作如下柱层析净化处理:首先按4.2.4.1.1提取样品，只是提取液由5.0mL正己烧(4.2.1.1)改
18、为10.0mL正己烧(4.2.1.1)。注:本方法是以程序升温去除色谱图后面可能出现的杂质峰(避免干扰后续上机样品的测定)。如色谱图中，前面4 GB/T 17814-2011 各待测组分不受杂峰干扰，则尽可不必采用净化处理，避繁求简。但要常注意清洗进样器。4. 2. 4. 1. 2. 2 装柱:层析柱(4.2.2.12)底先放少许脱脂棉(4.2.1.8)，再加少许(约2g)元水硫酸铀(4.2.1.日，用正己烧(4.2.1.1)调制氟罗里硅土(4.2.1.6)适量(约4g，以装满柱为准)，湿法填充于层析柱(4.2.2.12)中，上端先加约5g助滤剂(4.2.1.7)，再加约5g元水硫酸铀(4.2
19、.1.5)，铺平。注:如用柱层析净化时，一定要注意氟罗里硅土的活性。550c烘4h能保持3d ,3 d后，用前需在130c烘4h(特别是夏天湿度大时，更需注意);活性太强，EQ过柱洗脱不下来时，可加分析用水脱活(加氟罗里硅土质量的2%的水，摇匀，过夜平衡)。4. 2. 4. 1. 2. 3 淋洗:用移液管准确吸取4.2. 4. 1. 2. 1所得上清液5.0mL上柱。先以30mL正己烧(4.2.1.1)淋洗，再以80mL二氯甲烧-丙酣混合液(4.2.1.4)淋洗，速度以大约每分钟2mL为宜。用旋转蒸发器(4.2.2.13)浓缩至约1mL，用正己烧(4.2.1.1)定容至2.0mL，待测。4.2
20、.4.2 测定4.2.4.2.1 气相色谱参考条件4. 2. 4. 2. 1. 1 毛细管柱法色谱柱:HP-1石英毛细管柱，25mX O. 32 mmo 载气:氮气:2.0mL/mi出n;尾吹气:3omL/mi旧1川in盯F氢气:3omL/mi旧ln川1川;空气350 mL/r宵ml川山ln。隔垫吹扫:6mL/min 分流比:20110 检测器温度:240.C。进样口温度:210.C。柱温t参见附录B。色谱图:参见附录C。4. 2. 4. 2. 1. 2 填充柱法色谱柱:5%SE-30玻璃填充柱，2.5 mX3. 5 mm。气体流速:氯气:40mL/min;氢气:25mL/min;空气:250
21、mL/min。进样口、检测器温度:230.C。柱温z参见附录B。色谱图:参见附录C。4.2.4.2.2 定量测定分别取系列混合标准溶液(4.2.1.9)1L进样，测得不同浓度BHA、BHT、EQ的峰面积(或峰高)，以浓度为横坐标，峰面积(或峰高)为纵坐标，分别绘制工作曲线。同时取试样溶液(4.2.4.1)1L进样，测得峰面积或峰高)分别与工作曲线相比较定量，按式(2)或式(3)计算求得。4.2.4.2.3 结果计算试样中BHA、EQ和BHT的含量X2，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(2)计算。v-K t-叽-m一-t s-S A-A Z X . ( 2 ) 式中zA一一进
22、样样液中BHA、BHT、EQ峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米(v s或mm);p d GB/T 17814-2011 mst-一-BHA、BHT、EQ标准品进样的绝对量，单位为纳克(ng);V一一样品提取定容体积，单位为毫升(mL); A.t一一一标准液的BHA、BHT、EQ峰面积或峰高，单位为微伏秒或毫米(v s或mm);m一一称样量，单位为克(g);吼一一样液的进样体积，单位为微升(L)。如样品用柱层析净化处理，试样中BHA、EQ和BHT的含量凡，以质量分数表示，单位为毫克每千克(mg/kg)，按式(3)计算。式中zX, =. X mot X_ X 2 一3 - A.t X m X Vi
23、/0. V1 V2一一-样液进样前定容体积，单位为毫升(mL); V1 -样品提取液分取过柱体积，单位为毫升(mL)。4.2.4.2.4 结果表述测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留到小数点后一位。4.2.5 重复性. ( 3 ) 在重复性条件下，同一分析者对同一试样同时两次平行测定所得结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。6 E GB/T 17814-2011 附录A(资料性附录)丁基挂基苗香醋、二丁基是基甲苯、Z氧喳和没食子酸丙醋标准晶的高效灌相色谱色谱圄丁基短基面香醋、二丁基连基甲苯、乙氧喳和没食子酸丙醋标准品的高效液相色谱图见图A.loAU 0.40 0.30 e、司0.20
24、俨30.10 0.00 0.00 2.00 4.00 6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 1一一没食子酸丙酶;2一一丁基起基茵香隧53一一乙氧噎;4一一二丁基经基甲苯。mm 圄A.1标准溶璋的高效灌相色谱图7 GB/T 17814-2011 附录B(资料性附录)气相色谱法的程序升温圈B.1 毛细管柱的程序升温图见图B.l。150 C 11 min 图B.1宅细管柱的程序升温图B.2 填充柱的程序升温图见图B.2o川一川200C 圄B.2填充柱的程序升温图8 10 min GB/T 17814-2011 附录C(资料
25、性附录)丁基挂基茵香醋、二丁基握基甲苯和乙氧喳标准晶的气相色谱图丁基是基茵香醋、二丁基起基甲苯和乙氧喳标准品的毛细管柱气相色谱图见图C.LEEH白白.-yll-NEEo-的.dVl-H町团由.-C.1 EE回由白.由ll|的mH国.同的产国严的1一一丁基短基茵香隧52一一二丁基经基甲苯;3一一乙氧噎。9 丁基挂基茵香醋、二丁基握基甲苯和Z氧睡标准品的毛细管柱气相色谱圄图C.1GB/T 17814-2011 C.2 丁基楚基茵香醋、二丁基是基甲苯、乙氧喳标准品的填充柱气相色谱图见图C.2。EEhS EEN-T -dVIl-N .mill-EEdv同1一丁基短基茵香隧52-一二丁基瓷基甲苯33一一
26、乙氧喳。图C.2丁基握基菌香睡、二丁基经基甲苯和Z氧睡标准晶的填充柱气相色谱固10 -FON-叮户hFH阁。华人民共和国家标准饲料中丁基挂基茵香睡、二丁基握基甲苯、Z氧暖和没食子酸丙醋的测定GB/T 17814-2011 国白* 中国标准出版社出版发行北京市朝阳区和平里西街甲2号(100013)北京市西城区三里河北街16号(100045)网址总编室:(010)64275323发行中心:(010)51780235读者服务部:(010)68523946中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销 开本880X 1230 1/16 印张1字数20千字2012年4月第一版2012年4月第一次印刷 书号:155066. 1-44374定价18.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68510107GB/T 17814-2011 打印日期:2012年5月14日F002
