1、GBjT 1B640 2002 前兰兰汇S日本血吸虫病(sch旧osomoiaS1Saponicum)是牛、马、猪、羊、犬、猫等几十种哺乳动物和人的白种共患寄生虫病，流行于亚洲部分国家，在我国发生于淮河以南有钉螺生长的地区，是人的主要寄牛虫病之一，家备中主要发生于牛，其次是猪、羊。本病的病!且是日本分体吸虫(schstosomajaponicum)，亦称H本血吸虫，简称血吸虫。诊断本病的方法有检查粪便中虫卵、粪便毛蝴孵化、环卵沉淀试验、间接血凝试验、乳胶凝集试验、酶联免疫吸附试验、斑点酶标记等。改进的粪便毛蝴孵化法和间接血凝试验可作为该病酋选检疫技术。前者是病原检1lt诸法中检til率较高的方
2、法，后者属血清学诊断，操作简便、省时、敏感性高、结果判定容易。两法均可用于家畜血吸虫病检疫、诊断和流行病学调查.后者还可用于血吸虫病基本消灭和消灭地区的监测。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物检疫标准化技术委员会归门。4标准起草单位:中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所。本标准主要起草人:沈杰、钱承贵。Ljl 1 范围中华人民共和国国家标准家畜日本血吸虫病诊断技术Diagnostic techniques for domestic animals schistosomoiasis Japonicum 本标准规定f粪便毛蝴孵化法和间接血凝试验技术。GB/T 18640-2002
3、本标准适用于家畜日本血吸虫病的诊断、检疫、流行病学调查，间接血凝试验还可用于基本消灭和消灭地区血吸虫病的监测。2 粪便毛蝴孵化法2. , 材料准备2. ,. , 水pH值6.87.2，元水虫和化学物质污染包括氯气)的澄清水，否则需先分别作如下处理。2.1. 有氯气的自来水应在接具中存放8h以上。2.1.1.2 河水、池水、井水、雨水等混有水虫的水加温至60( ，冷后再用。或在每5万mL水中加含30%有效氯漂白粉0.:l5g，搅匀，存放20h，待氯气逸尽;也可在放漂白粉后加入硫代硫酸纳O.2在0.4 g脱氯，0.5 h后用。2.1.1.3对浑浊的水，于每5万mL水中加明矶35g，充分搅拌待水澄清
4、后用。2. 1.2 器材、试拥，竹筷、4080孔的铜筛滤杯、260孔的尼龙筛兜、500mL量杯、粪桶、放大镜、显微镜、吸臂、载玻片、盖玻片、炉、水温计、盆、水缸、水楠、剪刀、闹钟、天平、200mL 250 mL -C_角烧瓶、500 mLl 000 mL长颈平底烧鼠、脱脂棉、食盐。2. ,. 3 送粪札包括村名、组名、饲养员戎畜主姓名、畜另rJ、畜名或畜号、性别、年龄、有无孕、采粪H期。2. 1.4 孵育室(箱)。室温低于20C时需有保持20C25C的环境条件，如泪箱或有取暖设备的房间。2.2 操作方法2. 2. 1 采粪和送检采粪季节宜于春、秋两季，其次是夏季，不宜于冬季。采粪时间最好于清晨
5、从家畜直肠中采取，或新排出的粪便。采粪量牛、马粪200g，猪粪100g，羊和狗粪农家汶口E。每份粪样需附上填好的送粪卡，于采粪当天送到检验室。2. 2. 2 洗粪和孵化:将每头家畜的粪便分三份，每份粪量牛、马50g，猪20g，羊、犬10g 。然后根据实际情况选用下列一种方法进一步操作。2.2.2.1 尼龙筛淘洗孵化(25C)后，放在铜筛中淘洗，弃去滤杯，滤液倒入尼龙筛兜中用水沟洗干净，最后将洗粪渣倒人三角烧瓶或平底长颈烧瓶中加满25C左右清水。为便于观察毛助，在瓶颈下二分之一处加块2cm3 cm厚的脱脂棉，再加满水。2.2.2.2 塑料杯顶管孵化:置粪于铜筛滤杯中，在盛满水的特别塑料杯内充分淘
6、洗后，弃去滤杯，沉淀30 mm，倒王;三分之二，加2日、水，盖t中间有孔的塑料杯盖，再加满水，再将盛满水的试管门寒一块2 cm-3 cm 厚的脱脂棉，倒插入塑料杯的孔中。2.2.2.3 直孵将粪置于量杯中加少量水搅匀，再加满水，沉淀30min左右，倒去三分之命至一分之一，余F的粪水倒入平底长颈烧瓶中，加水至瓶颈F二分之一处，加人2cID-3 Cm脱脂棉球.再加满孵申华人民共和国国家质量监督检验检疲总局2002- 02 -19批准2002- 05-01实施G/T 18640-2002 化用水。2.2.3 孵育:将装好的三角烧瓶(平底长颈烧瓶或塑料杯)放于20C26C箱(室)中，在有一定光线的条件
7、F进行孵育。2.2.4 判定从孵育开始JIJ1 h , 3 h , 5 h后各观察一次，每个样品每次观察应在2min以上。发现血吸虫毛蝴即判为阳性。血吸虫毛蝴眼观为针尖大小，灰白色、梭形，折光强，和水中其它小虫不同处是近水面作水平或斜向直线运动。当用肉眼观察难与水中的其它小虫相区别时，可用滴管将虫吸li1置显微镜下观察，显微镜下可见毛蝴前部宽，中间有个顶突，两侧对称，后渐窄，周身有纤毛。在个样品巾有1- 5 个毛拗为十，日10个毛拗为十十.11 20个毛蝴为十+.21个毛拗以上为十十+。3 间接血凝试验3. 1 材料准备3. 1. 1 器材tV形微孔有机玻璃血凝板(孔底角90).25L定量移液
8、器，滴管、可插针头的滴管或1 mL2 mL注射器.12号针头。3. 1.2 生理盐水、蒸馆水。3. 1. 3 诊断液和阴、阳性血清:按说明书处理和保藏。3.2 操作方法3. 2. 1 Ifl滴管i商4滴生理盐水于血凝板左边第l孔内，用同一滴管加入被检血清1滴，使血清成5倍稀释。3. 2. 2 用借口号针头滴管在板左边第2、3孔中各加生理盐水1滴(L)。3. 2. 3 用移液器将第1孔中血清混匀，混匀方法是反复吸吹三次，然后吸25L己混勾液加入右边邻孔巾，此孔血清成1 10稀释。3. 2. 4 !Il移液器和3.2. 3一样混匀第2孔血清，吸取25L加入第3孔中，此时该孔血清成1 20 稀粹。3
9、. 2. 5 用移液器和3.2. 4 样?昆匀第3孔血清，吸取25L丢弃。3. 2. 6 每份被检血清和阳、阴性血清按同样方法用3个孔，也可不用阴性血清而设生理盐水对照孔，此时另取2个孔各加25L生理盐水作空白对照。3. 2. 7 用带12号针头的滴管加入1, 10及1, 20血清稀释孔及专白对照孔各一滴珍断液，振荡血凝板，使诊断液和血清混匀，置20C37C条件下1h2 h.等空白或阴性血清对照孔中血球全部沉于孔底小央，呈一圆形红点，且阳性血清两孔中血球没有全部沉人孔底中央即无圆形红点或仅有很小的圆形红点目1I可判定结果。3. 3 判定3. 3. 1 判定标准a)红血球全部下沉到于L底中央，形成紧密红色圆点，周缘整齐为阴性(-); b)主l血球少最沉于孔底中央，形成-较阴性小的红色剧点，周围有少量凝集红血球为弱阳性(+ ) ; c)红血球约半数沉于孔底中央，形成一更小红色圆点，周围有-层淡红色凝集红血球为阳性(十斗hd)红血球均匀地分散于孔底，形成一淡红色薄层为强阳性(十十十九3. 3. 2 结果判定:以血清10倍和20倍稀释孔出现3.3. 1中的川、c)、d)凝集现象时，被检血清判为。! M丁1 瓜问3.、3ftl1阴性或生理盐水对照孔2h后红血球沉淀图象不标准，说明生理盐水质量小合标准或国l凝板lL未洗净，需检查原因，重新操作。153
