1、ICS 67.050 X 04 中华人民共和国国家标准GB/T 22220-2008 食品中胆固醇的测定高效液相色谱法Determination of cholesterol in foods- High-performance Iiquid chromatography 2008-05-16发布2008-10-01实施二主Ff. 中华人民共和国国家质量监督检验检亵总局也士中国国家标准化管理委员会.-p G/T 22220-2008 前本标准由中国计量科学研究院提出.本标准由全国食品工业标准化技术委员会归口。- = F司本标准起草单位z中国计量科学研究院、北京市营养源研究所、北京锦绣大地检测中
2、心。本标准主要起草人z王晶、盛灵慧、李黎、刘玉峰、唐华澄、赵孟彬、尚燕芬。I GB/T 22220-2008 1 范围食晶中胆固醇的测定高效液相色谱法本标准规定了高效液相色谱法测定食品中胆固醇的条件和详细分析步骤。本标准适用于食品中胆固醇含量的测定。本标准最低检出限为2.6mg/100 g. 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水
3、规格和试验方法(GB/T6682-1992. neq IS0 3696: 1987) 3 方法提要样品经无水乙醇-氢氧化饵榕液皂化，石油酷和无水乙醒混合溶液提取，甲醇溶解定量后，采用高效液相色谱仪测定，外标法定量。4 试剂和溶渡除非另有说明，在分析中应使用分析纯试剂，水为GB/T6682推荐使用的一级水。4. 1 甲醇z色谱纯。4.2 元水乙醇。4.3 石油酷z沸程30c -60 c。4.4 元水乙醒。4.5 元水硫酸铀。4.6 氢氧化御。4.7 60%氢氧化饵禧液z称取60g氢氧化饵，加水40mL混合需解。4.8 胆固醇z纯度99%.4.9 标准贮备液z称取胆固醇标准品0.05g(精确至0.
4、1mg).用无水乙醇榕解定容至50mL.禧液每毫升相当于1mg胆固醇，放置4C密封可贮藏半年。4. 10 标准工作溶液z分别吸取标准贮备液(4.9)1.0 mL、2.0mL、3.0mL、5.0mL.用元水乙醇定容至10 mL.配制分别相当于0.1mg/mL、0.2mg/mL、0.3mg/mL、0.5mg/mL浓度标准榕液，5 仪器和设备实验室常规仪器设备和以下各项。5. 1 高效液相色谱仪z具有紫外检测器或相当的检测器。5.2 分析天平z感量0.1mg。5.3 色谱柱:C18反相色谱柱(4.6mmX150 mm.5m). 1 GB/T 22220-2008 6 分析步6. 1 样晶处理6. 1
5、. 1 皂化称取粉碎均匀的样品0.25g., 10 g(胆固醇含量约为0.5mg., 5 mg，精确至0.1mg)，于250mL 平底烧瓶中，加人30mL元水乙醇，10mL 60%氢氧化饵榕液(4.7)，混匀.将试样在100c磁力搅拌加热电热套皂化回流1h，不时振荡防止试样粘附在瓶壁上，皂化结束，用5mL元水乙醇(4.2)自冷凝管顶端冲洗其内部，取下圆底烧瓶，冷却至室温。6.1.2提取定量转移全部皂化液于250mL分液漏斗中，用30mL水分2次3次冲洗圆底烧瓶，洗液并人分液漏斗，再用40mL石油酷和乙酷混合液。+1，体积比)分2次3次冲洗平底烧瓶并人分液漏斗，振摇2min，静置，分层。转移水相
6、于第二个分液漏斗，再用30mL石油酷和乙醒混合液。+1，体积比)重复提取两次，弃去水相，合并三次有机相，用蒸馆水每次100mL洗涤提取液至中性，初次水洗时轻轻旋摇，防止乳化，提取液通过约10g元水硫酸铀(4.5)脱水，转移到150mL平底烧瓶中。6. 1.3 浓缩将上述平底烧瓶中的提取液在真空条件下蒸发至近干，用元水乙醇(4.2)溶解定容至5mL，溶液通过0.45m过滤膜过撞，收集清液于进样瓶中，待色谱仪测定。6.2 测定6.2. 1 色谱参考条件色谱柱:C18反相色谱柱(4.6mmX150 mm，5m); 柱温:38 c ; 流动相z甲醇F流速:1.0 mL/min; 测定波长:205nm;
7、 进样量:10L。6.2.2 标准曲线结制分别取10L标准工作液(4.10)注人高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定标准溶液的响应值(峰面积)，以浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制标准曲线.6.2.3 梓晶申胆固醇的测定取10L样液(6.1.3)注入高效液相色谱仪，在上述色谱条件下测定试样的响应值峰面积。由标准曲线上查得样液中胆固醇的含量，或利用回归方程式计算样液中胆固醇含量。7 结果计算2 样品中胆固醇的含量(x)以毫克每百克(mg/100g)表示，按式。计算z式中zcXV x=一一一X100 m x-一一样品中胆固醇的含量，单位为毫克每百克(mg/100g); c一一一样液中胆固醇的含量，单位为毫克每毫升(mg/mL);V一-定容体积，单位为毫升(mL);m一一一样品质量，单位为克(g).平行测定结果用算术平均值表示，保留三位有效数字。. . . ( 1 ) GB/T 22220-2008 8 允许差在同一实验室，由同一操作者使用相同的设备，按相同的测试方法，对同一样品独立进行测试获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过10%。
