1、ICS 67050X 04 香亘中华人民共和国国家标准GBT 2295 12008河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法Determination of 1 8 sulfonamides residues in fugu and eelLCMSMS method2008-12-31发布 2009-05-0 1实施宰瞀粥紫瓣警矬瞥星发布中国国家标准化管理委员会况111刖 茜本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由国家质量监督检验检疫总局提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局。本标准主要起草人：贾光群、曹彦忠、张进杰、石玉秋、姚智慧、庞国芳。G
2、BT 229512008河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 2295120081范围本标准规定了河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物(见表2)残留量液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定。本标准的方法检出限均为50-gkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果
3、的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 63791 2004，ISO 5725 1：1994，IDT)GBT 63792测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，ISO 57252：1994，IDT)OBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 6682 2008，ISO 3696；1987，MOD)3原理河豚鱼、鳗鱼中磺胺类药物残留用乙腈提取，离心，上清液经无水硫酸钠脱水后，用氮气浓缩仪吹至近干，残渣用乙腈一001 molL乙酸铵溶液溶解，用正己烷脱脂，过02 pm滤膜后，样品溶液供液相
4、色谱一串联质谱仪测定，内标法定量。4试剂和材料41水：GBT 6682，一级。42甲醇：色谱纯。43乙腈：色谱纯。44甲酸：色谱纯。45正己烷：色谱纯。46乙酸铵：优级纯。47无水硫酸钠：经650灼烧4 h，置于干燥器中备用。48 O01 molL乙酸铵溶液：称取077 g乙酸铵(46)溶于l 000 mL水中。49定容液：乙腈一001 molL乙酸铵溶液(3+22)。量取12 mL乙腈(43)和88 mL乙酸铵溶液(48)混合均匀。410 01甲酸溶液：吸取10 mL甲酸(44)，用水稀释至1 000 mL。411 十八种磺胺类药物标准物质：磺胺嘧啶(CAS：68-359)、磺胺噻唑(cAs
5、：7214一o)、磺胺吡啶(cAs：14483-2)、磺胺甲基嘧啶(CAS：12779-7)、磺胺一6一甲氧嘧啶(CAS：1220833)、磺胺甲噻二唑(CAS：144821)、磺胺二甲嘧啶(cAs：57681)、磺胺甲氧哒嗪(cAs：80一353)、磺胺对甲氧嘧啶(cAs：】GBT 229512008651069)、磺胺氯哒嗪(CAS：80320)、磺胺甲基异曙唑(CAS：723-46-6)、磺胺邻二甲氧嘧啶(cAs：2447576)、磺胺二甲异暖唑(CAS：127695)、磺胺苯酰(CAS：127719)、磺胺氯吡嗪(CAS：102658)、磺胺苯吡唑(CAS：526089)、磺胺间二甲氧
6、嘧啶(CAS：1037509)、磺胺喹嚼啉(CAS：59405)。纯度99。412 01 mgmL标准储备溶液；准确称取适量的每种磺胺类药物标准物质(411)，用甲醇(42)分别配成01 mgmL的标准储备溶液，该溶液在4保存。413 50-gmL磺胺类药物混合标准工作溶液：分别吸取各标准储备溶液(412)05 mL移至10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成50 PgmL混合标准工作溶液。该溶液在4保存。414磺胺内标物质：磺胺甲基异嚼唑一D4、磺胺嘧啶一D4、磺胺噻唑一D4。纯度99。415 50 pgmL磺胺甲基异嗫唑一D4、磺胺嘧啶一D4、磺胺噻唑一D4内标标准储备溶液：称取适量磺胺
7、甲基异曙唑一D4，磺胺嘧啶一D4，磺胺噻唑一D4标准物质(414)，用甲醇分别配成01 mgmL。该溶液在4保存。416磺胺类药物混合内标工作溶液：分别吸取磺胺甲基异暖唑一D4，磺胺嘧啶一D4，磺胺噻唑一D4储备溶液(415)05mL移至10mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，配成浓度为5 pgmL混合内标工作溶液。该溶液在4保存。417基质标准工作溶液：吸取不同体积混合标准工作溶液(412)和4吐混合内标工作溶液(416)，用空白样品提取液配成50 ngmL、100 ngmI_、200 agmL、500 ngmL、1000 ngmL不同浓度的基质标准工作溶液。当天配制。418滤膜：02 pm。5
8、仪器51液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾离子源。52分析天平：感量01 mg，0，01 g。53离心管：50mL。54均质器。55液体混匀器。56离心机。57氮气浓缩仪。58浓缩管：10 mL。6试样的制备与保存61试样的制备从全部样品中取出有代表性样品约1 kg，充分搅碎，混匀，均分成两份，分别装入洁净容器内。密封，作为试样，标明标记。在抽样和制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。62试样保存将试样于一18(2冷冻保存。7测定步骤71样品制备称取10 g试样，精确至001 g。置于50 mL离心管(53)中，加入20 pL内标工作溶液(416)，然后加入20 g无水硫酸
9、钠(47)和25 mL乙腈(43)，均质2 rain，以3 000 rmin离心3 min。上清液转移至50 mL容量瓶中，残渣再加入20 mL乙腈，重复上述操作一次。合并提取液，用乙腈定容至刻度后，混匀。吸取10 mL至浓缩管(58)中，在45水浴中氮气吹至近干。准确加入1 mL定容液(49)2GBT 229512008和I mL正己烷(45)溶解残渣，涡旋1 rain，以3 000 rrain离心3 min，吸取上层正已烷弃去，再加入l mL正己烷，重复上述步骤，直至下层水相变成透明液体。取下层清液，过02 pm滤膜(418)后，用液相色谱一串联质谱仪测定。按上述操作步骤制各样品空白提取液
10、。72测定条件721液相色谱参考条件a) 色谱柱：Atlantis，3 pm，150 mm21 mm(内径)或相当者；b)流动相：A：乙腈，B：01甲酸溶液，C：甲醇。梯度洗脱条件见表1；c)流速：02 mLmin；d)柱温：35；e)进样量：20”L。表1流动相梯度条件时间rain A B C000 100 800 lO0300 200 700 100800 350 550 1001200 700 200 10012 01 100 80 O 10 01700 100 800 100722质谱参考条件a)离子源：电喷雾离子源；b)扫描方式：正离子扫描；c)检测方式：多反应监测；d)电喷雾电压：
11、5 500 V；e)雾化气压力：0076 MPa；f)气帘气压力：0069 MPa；g)辅助气流速：6 Lmin；h)离子源温度：350；i)定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压见表2。表2十八种磺胺类药物的定性离子对、定量离子对、碰撞气能量和去簇电压定性离子对 定量离子对化合物中文名称 化合物英文名称碰撞气能量V 去簇电压v(m=) (mz)251156 23 55磺胺嘧啶sulfadlazine 251156251185 27 50256156 22 55磺胺噻唑sulfathiazole 256156256107 32 47250156 25 50磺胺吡啶 sulfapyridi
12、ne 250156250184 25 60265156 25 50磺胺甲基嘧啶 sulfamethoxypytidazine 265156265172 24 60281156 25 65磺胺6甲氧嘧啶 sulfamonomethoxine 281156281215 25 503GBT 229512008表2(续)定性离子对 定量离子对化合物中文名称 化合物英文名称 碰撞气能量V 去簇电压v(mz) (mz)271156 20 50磺胺甲噻二唑 sulfamethik 271156271107 32 50279156 22 55磺胺二甲嘧啶sulfamethazine 279156279204
13、20 6028l156 25 65磺胺甲氧哒嗪 sulfamethoxypyridazine 28l156281215 25 50281156 25 65磺胺对甲氧嘧啶 sulfameter 281156281Z15 25 50285156 23 50磺胺氯哒嗪 sulfachl。ropydazine 285156285108 35 50254156 23 50磺胺甲基异嗫唑sufamethoxazole 254156254147 22 45311156 31 70磺胺邻二甲氧嘧啶 sulfadoxine 311156311108 35 55268156 20 45磺胺二甲异唾唑sulfiso
14、xazoIe 288186268113 23 45277156 20 85磺胺苯酰 sulfabenzamide 277156277108 35 85285156 24 53磺胺氯吡嚷sulfachloropyrazine 285156285108 37 53315156 32 55磺胺苯吡唑 sulfaohenazole 31 5166315160 35 55811156 31 70磺胺问二甲氧嘧啶 sufadimethoxine 311156311218 87 70301156 25 42磺胺喹嚼啉 sutfaquinoxaline 301156301208 28 4273液相色谱一串联质
15、谱测定731定性测定将各被测组分分别选择1个母离子，2个以上子离子，在相同的试验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在士25之内；且样品中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相对丰度进行比较，若偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 以表示相对离子丰度K I K50 20K50 10K20 K10允许最大偏差 I 土20 土25 土30 士50732定量测定用基质混合标准工作溶液(417)分别进样，以各标准峰面积与内标峰面积的比值为纵坐标，以各标准工作溶液浓度与内标溶液浓度的比值为横
16、坐标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中十八种磺胺类药物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。在上述色谱条件和质谱条件下，十八种磺胺类药物的参考保留时间见表4。十八种磺胺类药物的标准多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1。4GBT 229512008本方法中十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B1。表4十八种磺胺类药物参考保留时间化合物名称 保留时间min 化合物名称 保留时间min磺胺嘧啶 445 磺胺氯哒嗪 89l磺胺噻唑 477 磺胺甲基异蟋唑 929磺胺吡啶 539 磺胺邻二甲氧嘧啶 929磺胺甲基嘧啶 620 磺胺二甲异晤唑
17、972磺胺一6一甲氧嘧啶 775 磺胺苯酰 1050磺胺甲噻二唑 776 磺胺氯吡嚓 1085磺胺=甲嘧啶 783 磺胺苯吡唑 1111磺胺甲氧哒嗪 8 01 磺胺间二甲氧嘧啶 1112磺胺对甲氧嘧啶 875 磺胺睦嘿啉 112274平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。75空白试验除不称取样品外，均按上述步骤进行。8结果计算河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物残留量的测定结果按式(1)计算x一五A毒百A,i筹器式中：x试样中被测物残留量，单位为微克每千克(btgkg)；基质标准工作溶液中被测物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；A试样溶液中被测物的色谱峰面积；A，基质标准工作溶液中被测
18、物的色谱峰面积；Ci试样溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；“基质标准工作溶液中内标物的浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；A。基质标准工作溶液中内标物的色谱峰面积；A试样溶液中内标物的色谱峰面积；y样液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m试样溶液所代表试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值是以95的可信度来计算。92重复性在重复性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物添加浓度范围及重复性方程见表5。
19、5GBT 229512008表5 添加浓度范围及重复性和再限性方程 单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R磺胺嘧啶 5o50o lg r=O913 4lg，”一1248 6 lgR一0757 6lgm一0664 7磺胺噻唑 50500 lg r一0498 7lgmO791 6 lgR=0760 4lg0 541 5磺胺吡啶 50500 lg r一1080 1 lg m一1464 1 lgR=1023 7 lgm一0918 1磺胺甲基嘧啶 50500 lg r一0733 7lgm一1178 6 lgR=0722 3lgm一0366 4磺胺一6一甲氧嘧啶 50500 lg
20、 r一0878 5 lg m一0998 6 lgR=0 600 6 lgmO377 9磺胺甲噻二唑 50500 lg r=1059 8lg，l一1341 1 lgR=0851 6 lgm一0596 6磺胺二甲嘧啶 50500 lg r=0824 7lgm一1190 6 IgR一1077 8lgm一1110 2磺胺甲氧哒嗪 5O500 lg r一1244 1 lgm一1781 6 lgR=0755 8lgmO521 5磺胺对甲氧嘧啶 5O500 lg r=0835 6 lgm一1151 1 lgR一0 947 3lgm一1011 2磺胺氯哒嗪 50500 lg r=0495 2lgm一0754
21、0 lgR一0698 0lgmO574 0磺胺甲基异嚼唑 50500 lg r=0898 6 lgm 0889 1 lgR一0993 1 lgmO902 2磺胺邻二甲氧嘧啶 50500 lg r=0816 7lgm一1207 6 lgR一0850 0lgmO767 9磺胺二甲异嘿唑 50500 lgRl 060 7lgml-344 8 lg R一1028 3lgm一1039 5磺胺苯酰 50500 lgR0 738 9 lgm一1055 1 lgR一0770 2lg0 641 0磺胺氯吡嗪 50500 lg r=0981 1 lgm1136 1 lg R一1045 6 lgmO916 3磺胺苯
22、吡唑 50500 lg r=0941 2 lgm一1 166 2 lgR一0 681 2lgm O549 6磺胺问二甲氧嘧啶 50500 lg r一0792 0 lgm一0966 8 lgR一1 119 2lg1 205 6磺胺喹嘿啉 50500 lg r一1076 0igm一1493 5 lgR一0827 1 lg0 802 8注：m为两次测定值的平均值。如果差值超过重复性限r，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性试验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限R，河豚鱼、鳗鱼中十八种磺胺类药物的添加浓度范围及再现性方程见表5。附录A(资料性附录)标准物质
23、多反应监测(MRM)色谱图十八种磺胺类药物标准物质多反应监测(MRM)色谱图见图A1。鬻妊譬鬻比薹8 000鬻比篁：l磺胺氯哒嗪l“” i|；iij 磺胺氯哒嗪 l 。ii鬻乩i鬻毁：i l ：z o。j I ：尝。；。j磺胺二甲异唔唑l i：m“j I 出o o o。rrrrlrlr弋丽n o o篙M4攀0如i l 鞋!z州j 磺胺苯吡唑 l “6蚓 l燕o- dO 0 L=_1zJLI一 O磺胺甲基异唔唑磺胺苯酰磺胺问二甲氧瞎啶GBT 229512008磺胺吡啶Ls 10 12 14 drr7 76磺胺甲噻二唑磺胺对甲氧嘧啶磺胺邻二甲氧嘧啶12 14tm10 85磺胺氯毗嗪磺胺喹嘿啉图A1
24、 十八种磺胺类药物标准物质多反应监测(MRM)色谱图GBT 229512008附录B(资料性附录)回收率本方法中十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据见表B1。表B1 十八种磺胺类药物添加浓度及其平均回收率的试验数据化合物名称 添加浓度(pgkg) 平均回收率5o 922loo 88o磺胺嘧睫20，o 93S50o 8625o 91910o 879磺胺噻唑20 o 91750o 9275o 91410 o 94o磺胺毗啶2P,o 97150 o 9085o 88 510o 949磺胺甲基唼啶20o 97o50o 9025，o 88310o 913磺胺一6一甲氧嘧啶20o 86450o
25、 9185o 89110o 959磺胺甲噻二唑20o 84550o 8895 o 95 610O 15磺胺二甲嘧啶20o 92 350o 9365 o 93 110o 934磺胺甲氧哒嗪20o 93o50o 9345，o 93110o 911磺胺对甲氧嘧啶20o 93250o 95o5o 873loo 939磺胺氯哒嚷200 87950o 8848表B1(续)GBT 229512008化合物名称 添加浓度(tgkg) 平均回收率跖5o 96oloo 924磺胺甲基异暖唑20o 90o50o 8705o 868lOo 883磺胺邻二甲氧嘧啶20o 89450o 9085o 883lOo 913磺胺二甲异唔唑20O 86450o 9185o 945lOo 876磺胺苯酰20o 89150o 90o5 o 88 OIoo 89 o磺胺氯吡嗪20o 88 350 0 9085o 93 1lO o 891磺胺苯毗唑20o 95850o 9715o 87 o10o 873磺胺间二甲氧嚼啶20o 94 150o 94 75o 89 7loo 955磺胺喹嚼啉20o 91350o 9059
