1、lCS 67050X 04 a雪中华人民共和国国家标准GBT 22968-2008牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定 液相色谱一串联质谱法Determination of ivermectin，abamectin，doramectin and eprinomectinresidues in milk and milk powder-LC-MS-MS method200812-31发布 20090501实施宰瞀鹳紫瓣訾糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会仅19刖 吾GBT 22968-2008本标准的附录A、附录B为资料性附录。本标准由中华人民共和国国家质量监督
2、检验检疫总局提出并归El。本标准起草单位：中华人民共和国秦皇岛出入境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局。本标准主要起草人：林峰、吴映璇、姚仰勋、欧阳少伦、林海丹、庞国芳。牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定液相色谱一串联质谱法GBT 22968-20081范围本标准规定了牛奶和奶粉中伊维菌素(ivermectin)、阿维菌素(abamecfin)、多拉菌素(doramectin)和乙酰氨基阿维菌素(eprinomectjn)残留量的液相色谱一串联质谱测定方法。本标准适用于牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定。本标准
3、的方法检出限：牛奶中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为5 pgkg，奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素均为40 pgkg。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GBT 63791 测量方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第1部分：总则与定义(GBT 637912004，ISO 5725 1：1994，IDT)GBT 63792测量
4、方法与结果的准确度(正确度与精密度) 第2部分：确定标准测量方法重复性与再现性的基本方法(GBT 637922004，IsO 57252：1994，IDT)GBT 6682分析实验室用水规格和试验方法(GBT 66822008，ISO 3696：1987。MOD)3原理牛奶中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留用乙腈二氯甲烷提取后，正己烷脱脂，液相色谱一串联质谱检测，外标峰面积法定量。奶粉中残留的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素用乙腈提取后，正己烷脱脂，样品溶液供液相色谱一串联质谱仪检测，外标峰面积法定量。4试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，水为GB
5、T 6682规定的一级水。41乙腈：色谱纯。42二氯甲烷。43甲醇。44正己烷，使用前以乙腈饱和。45氯化钠。46乙腈一二氯甲烷溶液(4+1)：分别量取80 mL乙腈(41)、20 mL二氯甲烷(42)，混合均匀。47饱和氯化钠水溶液。48标准物质：伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素，纯度99。49 100 pgmL标准储备液：准确称取适量的伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准品(精确至01 mg)，用乙腈分别配制成i00zgmL的标准贮备液，在一18储存。1GBT 22968-2008410 0500tgmL混合标准工作液：准确吸取0500 mL伊维菌素、阿维菌素、
6、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素标准储备液(49)至100 mL容量瓶中，以乙腈稀释并定容，此混合工作液的浓度为050019mL。在一20储存。411基质混合标准工作溶液：根据需要，吸取不同体积的混合标准工作液(410)，用空白样品提取液配制成不同浓度的基质混合标准工作溶液，使用前配制。412滤膜：o2 p-m。5仪器和设备51液相色谱一串联质谱仪：配有电喷雾电离源。52分析天平：感量01 mg和001 g。53离心机：转速大于或等于4 000 rrain。54超声波水浴。55涡旋混匀器。56氮吹浓缩仪。6试样的制备与保存61 牛奶取均匀样品约250 g装入洁净容器作为试样，密封置4下保存，并标明标
7、记。62奶粉取均匀样品约250 g装入洁净容器作为试样，密封，并标明标记。制样操作过程中应防止样品受到污染或残留物含量发生变化。7测定步骤71提取711牛奶准确称取2 g样品(准确至001 g)，置于25 mL离心管中，加入5 mL饱和氯化钠溶液(47)，涡旋混匀1 rain，加入75 mL乙腈一二氯甲烷混合溶液(46)涡旋混匀1 rain，4 000 rrain离心5 rain，上清液转移至50 mL氮吹管中，离心管中再加入75 mL乙腈一二氯甲烷混合溶液，涡旋混匀1 rain，4 000 rmin离心5 min，上清液合并至50 mL氮吹管中，45氮气吹干。准确加入200 mL乙腈至氮吹管
8、中，涡旋混匀1rain，加入3mL乙腈饱和正己烷(44)，涡旋混匀1rain，静置30min，取下层溶液过02 pm滤膜后，供液相色谱一串联质谱测定。712奶粉准确称取05 g样品(准确至0001 g)，置于10 mL离心管中，加入3 mL乙腈，超声振荡5 rain，4 000 rmin离心5 rain，上清液转移至15 mL带盖离心管中，残渣再用20 mL乙腈提取一次，离心后的清液合并至15 mL带盖离心管中，用乙腈定容至50 mL刻度，混匀，加入3 mL乙腈饱和正已烷(44)，涡旋混匀l rain，静置30 rain，取下层溶液过02 pm滤膜后，供液相色谱一串联质谱测定。72测定条件72
9、1液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下：a)色谱柱：Intersil C83，5 pm，150 mmX46 mm(内径)或相当者；b)柱温：40；c)进样量：25 pL；d) 流速：08 mLmin；e)流动相：甲醇+水，梯度洗脱程序见表1。2表1梯度洗脱程序GBT 22968-2008时间rain 甲醇蹦 水000 75 25300 100 01000 100 0100I 75 251500 75 25722质谱参考条件质谱参考条件如下：a)离子源：电喷雾电离源(ESI)；b)扫描方式：负离子扫描；c)检测方式：多反应监测MRM；d)雾化气、气帘气、辅助加热气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适气
10、体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；e)定性离子对、定量离子对、采集时间、去簇电压和碰撞能量见表2。表2伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素参考质谱参数化合物名称 定性离子对(rez) 定量离子对(mz) 采集时间ms 去簇电压V 碰撞能量v87375678 37伊维菌素 87372292 100 一75873 72292 5087175552 一40阿维菌素 8717s652 100 808717229 3 548976914 38多拉菌素 89765912 100 一708976 2290 5l912S2700 49乙酰氨基阿维菌素 91255654 100 8
11、291255654 37723液相色谱一串联质谱测定7231定性测定每种被测组分选择1个母离子，2个以上子离子，在相同实验条件下，样品中待测物质的保留时间与标准溶液中对应的保留时间偏差在土25之内；且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，偏差不超过表3规定的范围，则可判定为样品中存在对应的待测物。表3定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度K K50 20K50 10K20 K10允许最大偏差 土20 土25 土30 土507232定量测定外标法定量：在仪器最佳工作条件下，对基质混合标准工作溶液(411)进样，以峰面积为纵坐标，
12、基质混合标准工作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线。用标准工作曲线对样品进行定量，样品溶液中待测物的响应值均应在仪器测定的线性范围内。伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素的标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图参见附录A中的图A1图A4。伊维菌素、阿维菌素、多拉菌3GBT 22968-2008素和乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据参见附录B中的表B1。73平行试验按以上步骤，对同一试样进行平行试验测定。74空白试验除不称取试样外，均按上述步骤进行。8结果计算牛奶和奶粉中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素和乙酰氨基阿维菌素残留量的测定按式(1)计算：xc筹恶 (1)式中：x试样中
13、被测组分残留量，单位为微克每千克(vgkg)；c从标准工作曲线得到的被测组分溶液浓度，单位为纳克每毫升(ngmL)；y样品溶液最终定容体积，单位为毫升(mL)；m样品溶液所代表最终试样的质量，单位为克(g)。计算结果应扣除空白值。9精密度91一般规定本标准的精密度数据是按照GBT 63791和GBT 63792的规定确定的，其重复性和再现性的值以95的可信度来计算。92重复性在重复性实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过重复性限r，被测物的添加浓度范围及重复性方程见表4、表5。表4添加浓度范围及重复性和再现性方程(基质为牛奶) 单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r
14、再现性限R伊维菌素 550 剐o 332m一0971 R一0346m+0182阿维菌素 550 r一02710 318 R一0 272m+0 323多拉菌素 550 剐0 259m一0015 R一0308m+0599乙酰氨基阿维菌素 550 剐0 230m+0085 R一0408m一124注：仇为两次测定结果的算术平均值。表5添加浓度范围及重复性和再现性方程(基质为奶粉) 单位为微克每千克化合物名称 添加浓度范围 重复性限r 再现性限R伊维菌素 40400 剐0 215m0662 R一0188m一0262阿维菌素 40400 ，一0220m+0113 R一0266m+0333多拉菌素 4040
15、0 r一0229m一0122 R一0196m+0026乙酰氨基阿维菌素 40400 r一0111m+0437 R一0147m+0179注：m为两次测定结果的算术平均值。如果差值超过重复性限，应舍弃试验结果并重新完成两次单个试验的测定。93再现性在再现性实验条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不超过再现性限(R)，被测物的添加浓度范围及再现性方程见表4、表5。4附录A(资料性附录)标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图GBT 22968-2008伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图见图A1图A4。I 图A1 阿维菌素标准溶液的多反应监测(MRM)色
16、谱图6 ll图A2伊维菌素标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图图A3 多拉菌素标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图4400ee5O000ll05o如撕柚目GBT 22968-20086 0图A4 乙酰氨基阿维菌素标准溶液的多反应监测(MRM)色谱图蚪泓叭o。蛐附录B(资料性附录)回收率GBT 22968-2008本方法中伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据，见表B1。表B1 伊维菌素、阿维菌素、多拉菌素、乙酰氨基阿维菌素的添加浓度及其平均回收率的试验数据样品基质 化合物名称 添加浓度(pgkg) 平均回收率5 1006lO 972伊维菌素20 103050 9015 82410 97 2阿维菌素20 87 750 883牛奶5 87 610 93 7多拉菌素20 98 350 95 35 845lO 960乙酰氨基阿维菌素20 90250 90140 96 780 1050伊维菌素160 860400 86640 81880 833阿维菌素160 849400 80 6奶粉40 88980 891多拉菌素160 897400 87340 86680 867乙酰氨基阿维菌素160 890400 855
