1、中华人民共和国国家标准肉与肉制品脂肪酸测定川1恫寸(DB一/(UG Meat and meat products-Method for determination of fatty acids 本标准等问采用国际标准1505508-1978 (z4J植物油脂一一脂肪酸甲醋的气相色前分析和l司际标企150 5509-1978 (QJ檀物抽脂脂肪酸甲醋的制备队1 主题内容与适用范围本标准规定r对按照GB9695.1肉与肉制品游离脂肪含坠的测也得到的脂类制备脂肪酸fl附的方法以及脂肪酸甲醋混合物成分用气相色谱进行注:性在监测定的方法。;丰;标准适用于肉和肉制品中脂肪酸的测定。本标准不足用于测注:聚合
2、的脂肪酸。2 引用标准GB 9695.1肉与肉制品游离脂肪含量的测定S原理按GB9695.1从肉和肉制品中提取脂类，并在二三氟化础存在f，进行甘油脂的电化和游离脂肪酸的酣化，然后进气相色谱仪，用面积VJ-化法测其组成。4试剂所用水为蒸榴水或相当纯度的水。4. 1 氢氧化铀(GB629)甲醇(GB 683)溶液:O.5molo 将2g氢氧化铀溶于100mL含水不超过。.5%(m，m)的甲肝1+1。溶液放置一段时间后，lJ能户:吁:少国-碳酸铀白色沉淀而失放。此时重新自己制。4.2 二氟化棚(进口分装)甲醇(GB 683)溶液:12%-15% (m , m )., 4.3 庚皖(进:LJ分装):色
3、谱纯。4.4石油陆(HG31003):重蒸惰的，沸科40-60C。澳值小f.1, 残袖。或己皖(进门分装)4.5 兀水硫酸的(llG3一123)。4.6 氯化铀(CB1266):恼和溶液。4.7 氯气:完全!二蝶，纯度不小j工99.99%。4.8氧气g纯度不小子99.9%.J有机杂质。4.9 哇气或氧气:J有帜，杂质。4. 10 参照标准物与被测定的脂肪酸甲陆相同的脂肪酸甲醋标准物质的混合物。注:J丁各种试剂和溶剂在迸fT色i普分析时不得产牛r树脂肪酸甲雷日峰的信号。在英色i常分析小，特别是三氟化棚甲醉溶液，可能在色i常阁的20-22碳脂肪般以域内产尘r扰峰。因此每批新试fflJ或溶剂都应用制
4、备纯油酸甲醋，并进行色i势分析。fl:有1扰峰出现，亥试剂应奔之。豆j不存在含有20戎更多碳原f脂肪酸，己院可代替庚烧。中华人民共和国商业部1988-02-25批准1989-03-01实施3 5 装置和仪器5.1 实验室常规仪器。5.2 气相色谱仪配备FID检测器。5.3 微处理机或积分仪。6 试样按G8 9695.1的规定，得到的脂肪。7 分析步骤7.1 脂肪酸甲醋的制备GB 9695.2-88 三氟化棚有毒，下列操作请在通风橱里进行，政璃仪器用后，lj 1L即用/1.冲洗。7. 1. 1 试样称取称取脂肪约350mg。根据称取脂肪量的多少按下表j在择烧瓶及试剂。脂肪运烧瓶氢氧化铀甲醉溶掖二
5、氟化棚问1醉溶液mg mL 100-250 50 4 5 250-500 50 6 7 500-750 100 8 9 750-1000 100 10 12 7. 1. 2 皂化/J主r!i: 1 - 3 2 - 5 4 - 8 7 -10 将样品置于烧瓶中，加人适量氢氧化铀甲醇溶液及助沸剂。然后将冷凝管1J，1j二:烧并且上。水浴上回流，至没有脂肪滴下，通常需5-10min。用移液管从冷凝营上部加入适垦的兰氟化棚甲醇溶液于沸腾的溶液里。注:在含阙个以上双键的脂肪酸存在时，排掉甲醇溶液和烧瓶中的空气，可向溶液中导人氯气数分钟，也化T从冷凝管上都持续通人氯气。7. 1. 3 甲醋化7. 1. 3
6、.1 接7.1.2继续煮沸2min。7. 1. 3.2 经冷凝管上部加人适量的庚皖，继续煮沸1min。停止加热，冷却至室温后，移去冷凝管。加人少量饱和氯化铀溶液井轻摇烧瓶数次。继续加人饱和氯化铀溶液至1烧瓶颈部。7. 1. 3.3 吸取上层庚皖溶液约1mL于试管中，加适量无水硫酸铀脱水。此溶液含脂肪酸甲醋约1mg/mL，可直接取一定量注人气相色语仪测店。7.1.4脂肪酸甲醋的贮存7. 1.4.1制备样品应尽快分析。不能尽快分析时，脂肪酸甲酷的庚皖溶液短期可贮存于有惰性气体的冰箱中，不适合较长时间的贮存。7. 1. 4.2 不含溶剂的F燥甲醋应立即予以分析。不能分析时，应用惰性气体封存于冰箱内保
7、存24h;4 GB 9695.2-88 或装在桌空密封营里，在冰箱内可保存更长时间。7.2 色谱条件7.2.1 选择色谱分离条件的原则(对硬脂酸甲醋)0(附录A)。8. 理论塔板数不少于20001b. 分辨率不小于1.25;c. 出峰时间小于15min。7.2.2 色i情肖普-柱:柱长1- 3 m叽，柱内径2- 4 mrr町m7.2.3 填充剂7.2.3.1 担体:酸洗硅皖化的硅藻土或其他合适的惰性担体，其粒度分布均匀，大约在80-100目间。7.2.3.2 1叫起相z聚酣型的极性液体付日二甘醇聚丁二酸醋、丁二醇聚丁二酸醋、乙二醇聚乙二酸醋哼)、量基硅自Ipj或其他在气相色谐巾作分离用的问:立
8、相。国定相占填充剂的5% -20%。7.2.4柱温:170 C - 220 c。7.2.5 进样口温度E比柱温高20-50C。7.2.6 恰测器温度z比柱温高20-50C。7.2.7载气流速:15-60mLimin。t:2. 8 j挂样址:0.4 -0.5L。7.3 也性分析在与试样相同的操作条件下，分析标准混合物以保留时间来确定脂肪酸的成分。7.4 走过分析b面积归一化法。8 分析结果的计算8.1 一般计算成分i含垦由下式计算:Cj (%) =一兰x1. ( 1 ) Aj 式1:Cj-成分t的质量百分比，灿Aj一一-成分i的峰面积FAj一一全部峰面积之和。一般情况下，根据面积百分比计算的结果
9、可以代表质量百分比。对于某些要求定量准确度高的测缸，见8.2。8.2 校iE因f计算法脂肪酸定量准锅度要求很高时，采用校正因f法，将面积百分比换算为质量百分比。8.2.1 校正因f校因f测定，是在与样品测定相同的操作条件下进行参照标准物的测定，由得到的色谱图计算。校正因-Kj按下式计算:K , = _! j. Aj 1 Aj. m j 式11:Kj-一组分i的校正因hmj一一参照标准混合物中成分i的质量，mj一一参照标准混合物中各种成分的质量总和，Aj一一-参照标准混合物中成分i的峰面积，Aj一一参照标准混合物中各种成分峰面积之和。8.2.2 相对校正因f (2) 5 GB 9695.2-88
10、 相对校正因FK;由下式给出:K1=云7(3式ll11fct一一相对校正因-h久cI6-一软脂酸甲醋的校正因-，Ki二-组分i的校正因f。8.2.3 含量计算样品rj1成分i的含量按下式计算:K A , Ci ( % ) - v, -, (Ki Aj) 式Iil:Ci一一枝正后成分i的质量百分比，%, Ai一一校正后成分i的峰面积32: Ai一一校正后样品中各种成分峰面积之和。8.3 计算结果保留小数点后一位。9 精密度9.1 重复性A; x 100一一，x 100 .( 4 ) -Ai 同一分析者用同一仪器在同一天对同一样品含量越过5%所进行的分析，相对误差不应届过3%, 戎绝对民差不超过1
11、%，对于含量少的成分的测泣，其绝对误差应小于0.2%。9.2 再现牲llj-样品，待测成分扭过5%，在不同实验室里测定获得的两个值的相对误差不应届过10%.绝对误差不能超过3%，对于含量少的成分的测定，其绝对误差不应扭过0.5%。6 GB 9695.2-88 附录A柱效能和分辨率的测定(补光ff:)以分析各占一-f.的硬脂酸甲附和油酸lp附的副合物为例。合理边取迸样挝、柱温及载气流速，i吏硬脂酸lfl附色i肖峰的极大值在洛刑峰出现后151T11n内就tll砚1Lrti 高刻度的34。理论塔板敬的计算:分辨率R的计算:dR、n = 16 (气:?Y . (Al) R=_2_ A =( A2) w , +2 式Ctl:n一一理论塔板数zR -一一分辨率$dR，一一保留距离，mm，进样斤始到硬脂酸q!附峰极大值IiJ的比离;l一一硬脂酸甲醋的峰宽，mm，为曲线拐，J，i.处的切线与单纯交/i，间的距离z2一一油酸甲醋峰宽，mm，为曲线拐li、处的切线与基纯金:i，(I间的距离;A一一硬脂酸甲自旨和油酸甲醋峰极大值之间的距离，mm。详hlF阁。溶剂自刷旨懒惰dR 图Al呵A GB 9695.2-88 附加说明:本标准由中华人民共和国商业部食品局提出。本标准由中国肉类食品综合研究中心归口。本标准由中国肉类食品综合研究中心负责起草。本标准主要起草人鲁红军、刘晓东。8
