1、 ICS 13.100 C 75 DB12 天 津 市 地 方 标 准 DB 12/ T5342014 从业人员健康检查 血清甲肝及戊肝 IgM 抗体阳性者复查处置规范 Employees health check of serum Hepatitis IgM, Hepatitis E IgM antibody positive review disposal norms 2014 - 08 - 04 发布 2014 - 09 - 01 实施天津市市场和质量监督管理委员会 发 布 2014DB12/T 534 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和
2、定义 . 1 4 复查程序 . 2 5 结果判定 . 2 6 复查结果的判定与处置 . 2 附录 A（规范性附录） 规范性用表的样式. 3 附录 B（资料性附录） 抗-HAV IgM 检测操作规程 . 7 附录 C（资料性附录） 抗-HEV IgM 检测操作规程 . 9 附录 D（资料性附录） 抗-HAV IgG 检测操作规程 . 11 附录 E（资料性附录） 抗-HEV IgG 检测操作规程 . 13 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本标准由天津市卫生局提出并归口，由天津市疾病预防控制中心负责解释。 本标准起草单位
3、：天津市疾病预防控制中心 本标准主要起草人：庞作章、姜云、杨晓毅、陈金枝、张晗、柳光斌、朱羽。 本标准为首次发布。2014DB12/T 534 1 从业人员健康检查 血清甲肝及戊肝 IgM 抗体阳性者复查处置规范 1 范围 本标准规定了从业人员健康检查中甲肝、戊肝IgM抗体阳性者复查术语和定义、复查程序、结果判定、复查结果的判定与处置。 本标准适用于天津市具有从业人员健康检查资质的机构。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 WS 298-2008 甲型
4、病毒性肝炎诊断标准 WS 301-2008 戊型病毒性肝炎诊断标准 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 感染 Infection 病原微生物侵入宿主体内并引起病理变化。 3.2 目标疾病 Target disease 指甲型病毒性肝炎、戊型病毒性肝炎。 3.3 传染性 Infectivity 病原体从宿主排出体外，通过一定的方式到达新的易感者体内，即为传染性。 3.4 从业人员 Employees 按照法律法规要求凡从事接触直接入口食品工作的人员，直接从事供、管水的人员，直接从事化妆品生产的人员，直接从事消毒产品生产的操作人员，公共场所直接为顾客服务的人员，药品生产企业、药品
5、经营企业和医疗机构直接接触药品的工作人员，以及其他直接为顾客（他人）服务的人员。 3.5 复查程序Review procedures 从业人员在健康检查过程中单项或多项结果异常，按照主检医师处置要求进行复查的过程。 3.6 结果判定 Determination of results 主检医师依据相关法律法规要求对从业人员各项检查结果，进行综合判断的过程。 3.7 2014DB12/T 534 2 复查合格 Pass physical reexamination 初检结果异常者，按照复查程序检查后，由主检医师判定结果合格。 4 复查程序 4.1 异常结果登记：编号、姓名、性别、年龄、异常项目、O
6、D 值（附录A.1）； 4.2 留存受检者结果：检验异常结果个体报告、主检医师处置意见（附录 A.2）； 4.3 留存阳性标本：阳性结果原始记录留档、标本冷冻保存； 4.4 复查（45 天）IgM 阳性者：记录阳性结果，检测IgG、ALT（附录A.3）； 4.5 二次复查（90天）IgM阳性者：记录阳性结果，检测IgG、ALT（附录 A.3）； 4.6 保存原始记录及血清，按统计表格及统计方法整理原始记录（附录A.3）。 4.7 上述程序中所用检验操作规程参见附录B、C、D、E。 5 结果判定 5.1 抗-HAV IgM阳性者：不能排除具有传染性，建议复查；45 天、90天复查抗-HAV Ig
7、M、抗-HAV IgG及 ALT。 5.2 抗-HEV IgM阳性者：不能排除具有传染性，建议复查；45 天、90天复查抗-HEV IgM 、抗-HEV IgG及 ALT。 5.3 主检医师依据实验室检测结果及临床症状和体征进行综合判定。 6 复查结果的判定与处置 6.1 判定 6.1.1 复查后 IgM阴性通过。 6.1.2 IgM 阳性参看 IgG及 ALT结果进行综合判断。 6.2 处置意见 6.2.1 IgG 阳性、ALT无明显增高（100 U/L），且始终无肝病相关临床症状者通过。 6.2.2 IgG 阴性、ALT无明显增高（100 U/L），且始终无肝病相关临床症状者复查。 6.2
8、.3 ALT 明显增高（100 U/L）和（或）出现肝病相关临床症状者临床诊治。 2014DB12/T 534 3 A A 附 录 A （规范性附录） 规范性用表的样式 A.1 天津市从业人员健康检查实验室检验结果报告书的样式 天津市从业人员健康检查实验室检验结果报告书的样式见图A.1 A.2 天津市从业人员健康检查报告书的样式 天津市从业人员健康检查报告书的样式见图A.2 A.3 天津市从业人员健康检查复查登记表的样式 天津市从业人员健康检查复查登记表的样式见图A.3 2014DB12/T 534 4 天津市从业人员健康检查实验室检验结果报告书 样品编号： 姓名： 性别： 年龄： 样品名称
9、生物样本（血清标本） 样本性状 液体 检测部门 门诊化验室 检验目的 从业人员健康体检 受理日期 年 月 日 规格数量 0.5 ml1份 检验依据 WS298-2008 WS301-2008 检验项目 抗-HAV IgM 抗-HEV IgM 检验方法 酶联免疫法 所用试剂 试剂名称及批号 操作方法 参照产品说明书 生产企业 生产企业名称 检验结果： 检验人： 校核人： 签发人： 报告日期： 单位公章 图A.1 天津市从业人员健康检查实验室检验结果报告书的样式 2014DB12/T 534 5 天津市从业人员健康检查报告书 编号： 单位： 姓名： 性别： 年龄： 依据中华人民共和国食品安全法、公
10、共场所卫生管理条例、化妆品卫生监督条例、 生活饮用水卫生监督管理办法、消毒产品生产企业卫生规范、中华人民共和国药品管理法、全国疾病预防控制机构工作规范、预防性健康检查管理办法，进行从业人员健康检查。 检查结果： 1.胸部X线检查： 2.心、肺、肝、脾、皮肤检查： 3.血清学检查： 4.粪便检查： 复查内容： 复查项目： 注意事项： 复查单位： 复查时间： 处理意见： 主检医师： 报告日期： 单位（章）： 图A.2 天津市从业人员健康检查报告书的样式 2014DB12/T 534 6 天津市从业人员健康检查复查登记表 初检 一次复检 二次复检 初检编号 姓名 时间 项目 结果 时间 项目 结果
11、时间 项目 结果 备注 图A.3 天津市从业人员健康检查复查登记表的样式 2014DB12/T 534 7 B B 附 录 B （资料性附录） 抗-HAV IgM检测操作规程 B.1 原理 以ELISA法检测。根据固相酶联夹心法，包被在固相载体上的羊抗人链抗体与血清标本中特异性IgM抗体结合，以后加入酶标记甲肝抗原与特异性抗-HAV IgM结合。在酶底物作用下显色反应，检测血清中是否存在特异性抗-HAV IgM。 B.2 设备和材料 B.2.1 恒温水温箱。 B.2.2 酶标仪。 B.2.3 可调式微量移液器。 B.2.4 台式离心机。 B.2.5 冰箱。 B.2.6 聚苯乙烯微量板。 B.2
12、.7 试管架。 B.3 试剂 B.3.1 羊抗人IgM（链），采用多克隆或单克隆抗体，经纯化预包被在微孔板上，8*12孔。 B.3.2 抗-HAV IgM阴性对照，1 ml*1管。 B.3.3 抗-HAV IgM阳性对照，1 ml*1管。 B.3.4 抗-HAV IgM酶标试剂，6 ml*2瓶。 B.3.5 血清稀释液，0.85%生理盐水。 B.3.6 浓缩洗涤液（*20），50 ml*1瓶。 B.3.7 显色剂A液，6 ml*1瓶。 B.3.8 显色剂B液，6 ml*1瓶。 B.3.9 终止液（2 mol/L H2SO3），6 ml*1瓶。 B.3.10 自封袋，1个。 B.3.11 封板膜
13、，2张。 B.4 操作 B.4.1 加样：血清标本每孔加入100 l，并设空白对照1孔，阴性对照2孔，阳性对照2孔，37 20 min。 B.4.2 洗涤：弃去反应孔内液体，洗涤液注满各孔，洗涤5次。 B.4.3 加酶标记物：每孔加入酶标记物100 l，空白对照孔不加，37 40 min。 B.4.4 洗涤：弃去反应孔内液体，洗涤液注满各孔，洗涤5次。 2014DB12/T 534 8 B.4.5 显色：每孔加入显色反应液A，显色反应液B各50 l，37暗处 15 min。 B.4.6 终止：每孔加入终止液50 l。 B.5 结果判定 B.5.1 酶标仪测定 波长450 nm，参考波长630
14、nm，以空白对照孔校零，测定样品及阴、阳性对照孔 OD值。 B.5.2 临界值=阴性对照孔A值均值2.1 阴性判定：样本A值临界值； 阳性判定：样本A值临界值； 阴性对照孔A值均值 值小于0.05按0.05计算。 B.6 附注 B.6.1 要求使用有卫生部批准生产文号试剂盒。 B.6.2 具体操作方法详见试剂盒说明。 B.7 技术依据 卫生部标准WS 298-2008。 2014DB12/T 534 9 C C 附 录 C （资料性附录） 抗-HEV IgM检测操作规程 C.1 原理 以ELISA法检测。根据固相酶联夹心法，包被在固相载体上的羊抗人链抗体与血清标本中特异性IgM抗体结合，以后加
15、入酶标记戊肝抗原与特异性抗-HEV IgM结合。在酶底物作用下显色反应，检测血清中是否存在特异性抗-HEV IgM。 C.2 设备和材料 C.2.1 恒温水温箱。 C.2.2 酶标仪。 C.2.3 可调式微量移液器。 C.2.4 台式离心机。 C.2.5 冰箱。 C.2.6 聚苯乙烯微量板。 C.2.7 试管架。 C.3 试剂 C.3.1 HEV-IgM酶标板，8*12孔*5。 C.3.2 HEV-IgM阴性对照，0.5 ml*5。 C.3.3 HEV-IgM阳性对照，0.5 ml*5。 C.3.4 HEV-IgM酶标试剂，12 ml*5。 C.3.5 HEV-IgM样品稀释液，12 ml*5
16、。 C.3.6 浓缩洗涤液（20* ），50 ml*5。 C.3.7 显色剂A液，6 ml*5。 C.3.8 显色剂B液，6 ml*5。 C.3.9 终止液，6 ml*5。 C.3.10 自封袋，5个。 C.3.11 封板膜，10张。 C.4 操作 C.4.1 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 C.4.2 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔。用双波长检测，可不设空白对照孔。 C.4.3 加稀释液：每孔加入样品稀释液100 l，空白孔除外。 C.4.4 加样：分别在相应孔中加入待测样品或阴、阳对照10 l，轻轻振荡混匀。 2014DB
17、12/T 534 10 C.4.5 温育：用封板膜封板后，置37温育30 min。 C.4.6 洗板：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 C.4.7 加酶：每孔加入酶标记物100 l，空白孔除外。 C.4.8 温育：操作同4.5。 C.4.9 洗板：操作同4.6。 C.4.10 显色：每孔加入显色剂A、B液各50 l ，轻轻振荡混匀，37避光显色15 min。 C.4.11 测定：每孔加入终止液50 l ，轻轻振荡混匀，10 min内测定结果，设定酶标仪波长于450 nm 处（建议用双波长450 nm/650 nm检测），用空白孔调零点后测定各孔A值。 C.5 结果判定 C.
18、5.1 临界值计算，临界值=0.26+阴性对照孔A均值。 C.5.2 阳性判定：样品A值临界值者为抗-HEV IgM阳性。 C.5.3 阴性判定：样品A值临界值者为抗-HEV IgM阴性。 C.5.4 阴性对照的正常范围：正常情况下，阴性对照孔A值0.1（若有1孔阴性对照A值大于0.1应舍弃，若两孔或两孔以上阴性对照A值大于0.1，应重复实验）。 C.5.5 阳性对照的正常范围，正常情况下，阳性对照孔A值0.8。 C.6 附注 C.6.1 要求使用有卫生部批准生产文号试剂盒。 C.6.2 具体操作方法详见试剂盒说明。 C.7 技术依据 卫生部标准WS 301-2008。 2014DB12/T
19、534 11 D D 附 录 D （资料性附录） 抗-HAV IgG检测操作规程 D.1 原理 以ELISA法检测。根据固相酶联夹心法，包被在固相载体上的羊抗人链抗体与血清标本中特异性IgG抗体结合，以后加入酶标记甲肝抗原与特异性抗-HAV IgG结合。在酶底物作用下显色反应，检测血清中是否存在特异性抗-HAV IgG。 D.2 设备和材料 D.2.1 恒温水温箱。 D.2.2 酶标仪。 D.2.3 可调式微量移液器。 D.2.4 台式离心机。 D.2.5 冰箱。 D.2.6 聚苯乙烯微量板。 D.2.7 试管架。 D.3 试剂 D.3.1 酶标板，8*12孔。 D.3.2 空白对照，1 ml
20、*1瓶。 D.3.3 标准品（2 400 IU/ml），1 ml*1瓶。 D.3.4 酶标试剂，12 ml*1瓶。 D.3.5 标准品稀释液，8 ml*1瓶。 D.3.6 浓缩洗涤液，20 ml*1瓶(50倍)。 D.3.7 显色剂A液， 6 ml*1瓶。 D.3.8 显色剂B液， 6 ml*1瓶。 D.3.9 终止液（2 mol/L H2SO4）， 6 ml*1瓶。 D.3.10 自封袋，1个。 D.3.11 封板膜，2张。 D.4 操作 D.4.1 加样：空白对照、标准品、血清标本每孔加入50 l，37 45 min。 D.4.2 洗涤：弃去反应孔内液体，洗涤液注满各孔，洗涤5次。 D.4
21、.3 加酶标记物：每孔加入酶标记物100 l，空白对照孔不加，37 30 min。 D.4.4 洗涤：弃去反应孔内液体，洗涤液注满各孔，洗涤5次。 D.4.5 显色：每孔加入显色反应液A，显色反应液B各50 l，37暗处 5 min。 2014DB12/T 534 12 D.4.6 终止：每孔加入终止液50 l。 D.5 结果判定 D.5.1 酶标仪测定 波长450 nm，参考波长630 nm以空白对照孔校零，测定样品及标准品对照孔OD值。 D.5.2 临界值=标准品（300 IU/ml）对照孔OD值均值 样本OD值临界值为阳性； 样本OD值临界值为阴性。 D.6 附注 D.6.1 要求使用有
22、卫生部批准生产文号试剂盒。 D.6.2 具体操作方法详见试剂盒说明。 D.7 技术依据 卫生部标准WS 298-2008。 2014DB12/T 534 13 E E 附 录 E （资料性附录） 抗-HEV IgG检测操作规程 E.1 原理 以ELISA法检测。在微孔条上预包被高纯度基因重组HEV ORF-2/ORF-3抗原，可与样品中抗-HEV IgG反应，再加入HRP标记的抗-HEV IgG与之结合，然后用TMB底物作用显色。在酶底物作用下显色反应，检测血清中是否存在特异性抗-HEV IgG。 E.2 设备和材料 E.2.1 恒温水温箱。 E.2.2 酶标仪。 E.2.3 可调式微量移液器
23、。 E.2.4 台式离心机。 E.2.5 冰箱。 E.2.6 聚苯乙烯微量板。 E.2.7 试管架。 E.3 试剂 E.3.1 HEV-IgG酶标微孔板，8*12孔。 E.3.2 HEV-IgG阴性对照，0.5 ml*1管。 E.3.3 HEV-IgG阳性对照，0.5 ml*1管。 E.3.4 HEV-IgG酶标试剂，12 ml*1瓶。 E.3.5 HEV-IgG样品稀释液，12 ml*1瓶。 E.3.6 浓缩洗涤液（20*），50 ml*1瓶。 E.3.7 显色剂A液，6 ml*1瓶。 E.3.8 显色剂B液，6 ml*1瓶。 E.3.9 终止液（2 mol/L H2SO4），6 ml*1瓶
24、。 E.3.10 自封袋，1个。 E.3.11 封板膜，2张。 E.4 操作 E.4.1 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔、阳性对照2孔和空白对照1孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步相同）。 E.4.2 稀释：每孔加入样品稀释液100 l。 E.4.3 加样：血清标本、阴阳性对照相应每孔加入10 l，振荡混匀。 E.4.4 温育：置37温育30 min。 2014DB12/T 534 14 E.4.5 洗涤：弃去反应孔内液体，将稀释洗涤液注满各孔，洗涤5次，尽量拍干。 E.4.6 加酶：酶标记物每孔加入100l，空白对照孔不加，振荡混匀。 E.4.7 温育：置37温育
25、30 min。 E.4.8 洗涤：弃去反应孔内液体，洗涤液注满各孔，洗涤5次，尽量拍干。 E.4.9 显色：每孔加入显色反应液A，显色反应液B各50 l，轻拍混匀，37暗处 15 min。 E.4.10 终止：每孔加入终止液50l，振荡混匀。 E.5 结果判定 E.5.1 酶标仪测定 波长450 nm， 参考波长630 nm以空白对照孔校零，测定样品及阴、阳性对照孔 OD值。 E.5.2 界限值= 平均OD值0.16 如所有NC OD值大于0.08，应重复试验：正常下PC OD值0.5， （如 OD值大于0.08，舍去；如 OD值小于0.03，按0.03计算）； 标本OD值界限值判为阳性， （初试OD值2倍界限值的弱阳性样本应进行双孔复试，复试阳性者方为阳性）； 标本OD值界限值判为阴性。 E.6 附注 具体操作方法详见试剂盒说明。 E.7 技术依据 卫生部标准WS 301-2008。 _ 2014DB12/T 534
