1、ICS 67.120.30 B 50 DB33 浙江省 地 方 标 准 DB33/T 610 2017 代替 DB 33/T 610-2006 渔业环境中三唑磷的测定 Determination of triazophos in Fishery Environment 2017 - 12 - 18 发布 2018 - 01 - 18 实施 浙江省 质量技术监督局 发布 DB33/T 610 2017 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准 代替 DB33/T 610-2006 底泥中三
2、唑磷的测定 ， 与 DB33/T 610-2006相比， 除编辑性修改外，主要技术变化如下 ： 适用 范围 扩大 为水体和底泥中三唑磷残留量的测定 ； 增加 水体中三唑磷残留量的测定 方法 ； 净化 过程 增加固相萃取柱净化 ； 增加 气相色谱质谱法 为 第二法 。 本标准由 浙江省海洋与渔业局 提出并归口。 本 标准的起草单位：浙江省海洋水产研究所。 本标准 主要起草人：孙秀梅 、 郭远明 、 钟志 、 金衍健 、 李铁军 、 胡红美 、 尤炬炬 、 郝青。 DB33/T 610 2017 1 渔业环境中三唑磷的测定 1 范围 本标准第一法规定了水体和底泥中三唑磷残留量的气相色谱检测方法，第
3、二法规定了水体和底泥中三唑磷残留量的气相色谱质谱检测方法。 本标准 适用于 渔业 环境 水体 及底泥中三唑磷残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682-2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB 17378.3 海洋监测规范 第三部分 样品采集、贮存与运输 GB 17378.5 海洋监测规范 第五部分 沉积物分析 SC/T 9102.3 渔业生态环境监测规范 第 3部分 淡水 HJ 493 水质采样 样品的保存和管理技术规
4、定 第一法 气相色谱法 3 原理 水样采用二氯甲烷和正己烷提取，底泥样采用乙酸乙酯和正己烷提取，提取液用硅胶固相萃取柱分离净化，经浓缩定容后，毛细管气相色谱柱分离，用火焰光度检测器或氮磷检测器检测，以保 留时间定性，外标法定量。 4 试剂与材料 除非另有说明， 分析时均使用符合 国家标准的分析纯试剂，实验用水符合 GB/T 6682-2008二级水要求。 4.1 二 氯甲烷：色谱纯。 4.2 正己 烷：色谱纯。 4.3 乙酸乙 酯：色谱纯。 4.4 丙 酮：色谱纯。 4.5 盐酸 溶液（ 1+1） ： 取 50 mL 盐酸 缓慢 加入 50 mL 水中。 4.6 无水硫酸 钠 ： 650 灼
5、烧 4 h，取出放入干燥器中冷却后置于密 闭容器中备用。 4.7 铜粉 ： 粒径 0.074 mm，纯度 99.7%，用 盐酸溶液（ 4.5）浸泡 30 s，倾去酸，去离子水洗至中性，再用丙酮洗涤数次，氮气吹干，充氮气保存于具塞玻璃瓶中 。 4.8 三唑磷标准品： 纯度 99.9%， CAS 为 24017-47-8。 DB33/T 610 2017 2 4.9 三 唑磷标准储备液（ 100 g/mL）：称取三唑磷标准品 （ 4.8） 0.01 g（精确到 0.0001 g） 于 100 mL 容量 瓶中，用丙酮（ 4.4） 定容至 标线 ；或 购买相当纯度的有证标准溶液。置于 -20 冰箱中
6、保存，配制储备液 有效期 6 个月。 4.10 三 唑磷标准工作液（ 1.0 g/mL）： 准确吸取 0.10 mL 三 唑磷标准储备液（ 4.9） 至 10 mL 棕色容量 瓶中，用丙酮（ 4.4） 定容至 标线 ，混 匀，现用现配 。 5 仪器和设备 5.1 气相色谱仪： 配火焰光度检测器或氮磷 检测器。 5.2 电子 天平：感量 0.0001 g。 5.3 电子 天平：感量 0.01 g。 5.4 涡旋振荡器。 5.5 离心机 ： 0 r/min 5000 r/min。 5.6 旋转蒸发仪 ：配 100 mL 旋蒸瓶 。 5.7 氮吹仪。 5.8 固相萃取装置 。 5.9 无水硫酸钠柱：
7、砂芯玻璃层析柱 （内径 1.0 cm） 中装无水硫酸钠 （ 4.6） 10 g。 5.10 硅胶固相萃取柱： 500 mg， 3 mL。 5.11 滤膜： 0.22 m 有机滤膜。 6 试样采集和保存 6.1 样品采集、贮存和运输按照 GB 17378.3、 SC/T 9102.3、 HJ 493 执行。 6.2 水体样品采集 以 棕色磨口玻璃瓶封装后保存于 4， 48 h 内提取，冷藏 保存 ， 提取液在 5 d 内完成分析测定。 6.3 底泥样品采集后于棕色玻璃瓶中 4 冷藏保存， 48 h 内 以湿样提取 ，冷藏 保存 ，提取液在 5 d 内完成分析测定 。 7 测定步骤 7.1 水体中
8、三唑磷提取和净化 7.1.1 提取 摇匀并准确量取 500 mL水样于 1 L分液漏斗中，加入 20 mL二氯甲烷（ 4.1），震荡摇匀 2 min，静置分层后收集二氯甲烷相 ， 过无水硫酸钠柱（ 5.9） ，收集 于 100 mL旋蒸瓶中。 使用 20 mL正己烷（ 4.2）重复提取 样品 一次， 静置分层后收集正己烷相过无水硫酸钠柱（ 5.9）与二氯甲烷相合并。 用 10 mL正己烷 （ 4.2） 淋洗无水硫酸钠柱（ 5.9）， 收集淋洗液于同一旋蒸瓶 。 提 取过程 静置分层时 若出现乳化现象，采用 加入 10g无水硫酸钠 （ 4.6） 、搅动、离心 和用 玻璃棉过滤 方法破乳 ，破乳分
9、层后收集有机相 过无水硫酸钠柱（ 5.9），收集淋洗液于旋蒸瓶 。 7.1.2 净化 提取液旋转蒸发近干，加入 3 mL正己烷（ 4.2）溶出提取物。使用硅胶固相萃取柱（ 5.10）对提取液进行净化：依次用 6 mL二氯甲烷（ 4.1）和 6 mL正己烷（ 4.2） 活化萃取柱 ， 待正己烷液面与萃取柱填DB33/T 610 2017 3 料相平时， 将 提取液 全部转移至净化柱上，再用 2 mL正己烷（ 4.2）洗涤 旋蒸瓶，洗涤液一并上柱 。 用 5 mL二氯甲烷（ 4.1）洗脱 净化 柱，收集洗脱液于 15 mL离心管内，氮吹 近 干，加入 1 mL丙酮 （ 4.4） 定容，充分涡旋后
10、过 0.22 m有机滤膜转移至进样小瓶中，供气相色谱分析。 7.2 底泥中三唑磷提取和净化 7.2.1 提取 7.2.1.1 称取 10 g（ 精确到 0.01 g）底泥 样品于 50 mL 具塞 聚四氟乙烯 离心管中，加入 10 mL 水 ， 再加入 15 mL 乙酸乙酯（ 4.3），涡旋震荡 2 min，于离心机 5000 r/min 离心 5 min， 取 上层有机相过无水硫酸钠柱（ 5.9） ， 收集于 100 mL 旋蒸瓶 中， 向底泥中 加入 10 mL 正己烷 按上述方法再次 提取 ，合并提取液 。用 10 mL 乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱（ 5.9）， 收集淋洗液于同一旋蒸瓶 。
11、 7.2.1.2 另 称取 10 g（ 精确到 0.01 g） 样品，按照 GB 17378.5进行含水率测定。 7.2.2 净化 向提取液中加入适量活化铜粉（ 4.7）脱硫，充分涡旋后，按照本标准 7.1.2步骤进行后续净化。 7.3 测定 7.3.1 色谱条件 7.3.1.1 气相色谱氮磷检测器（ NPD） : a) 进样量： 1 L； b) 色谱柱：毛细管 气相色谱 柱， HP-5，规格： 30 m 0.32 mm 0.25 m， 或 性能 相当者 ； c) 进样方式：不分流进样 ； d) 载气： 高纯氮 ， 柱流量 1.0 mL/min； e) 燃气：氢气，流速 3 mL/min； f
12、) 助燃气：空气，流速 60 mL/min； g) 进样口温度： 260； h) 检测器温度： 320 ； i) 柱温：起始温度 80 ，以 30 /min 升温至 200 ，以 15 / min 升温至 260 ，保持 4 min，以 30 / min 升温至 290 ，保持 2 min。 7.3.1.2 气相色谱火焰光度检测器（ FPD） : a) 进样量： 1 L； b) 色谱柱：毛细管 气相色谱 柱， HP-5，规格： 30 m 0.32 mm0.25 m，或 性能 相当者 ； c) 进样方式：不分流进样 ； d) 载气： 高纯氮 ， 柱流量 1.0 mL/min； e) 燃气：氢气，
13、流速 75 mL/min； f) 助燃气：空气，流速 100 mL/min； g) 进样口温度： 260； h) 检测器温度： 260； i) 柱温：起始温度 100 ， 保持 1 min 后， 以 20 /min 升温至 240 ，保持 5 min。 7.3.2 定性分析 DB33/T 610 2017 4 以保留时间进行定性分析，相同仪器条件下，以样品中目标峰的保留时间（ RT）与标样中三唑磷保留时间（ RT）相比较，三唑磷标准溶液的气相色谱图参见 附录 A中的图 A.1。 样品中 目标物的保留时间与标样中三唑磷的保留时间相差在 0.05 min 内。 7.3.3 定量分析 吸取适量的三唑
14、磷标准 工作液 （ 4.10） ，用丙酮稀释成 0.010 g/mL、 0.050 g/ mL、 0.10 g/mL、0.20 g/mL、 0.50 g/mL， 1.0 g/mL系列的三唑磷标准 曲线溶 液，以峰面积为纵坐标，以对应浓度为横坐标绘制工作曲线 ，对样品中的三唑磷进行定量分析。所检测的三唑磷色谱峰信噪比 S/N 10。 7.4 空白试验 除不加试样外，均按照上述步骤进行。 7.5 空白加标试验 7.5.1 水体空白加标 量取实验室用水 500 mL，加入三唑磷标准 工作液 （ 4.10） 50 L， 按照本标准 7.1、 7.3步骤进行提取、净化和测定，其色谱图参见附录 A中的 图
15、 A.2。 7.5.2 底泥空白加标 称取阴性底泥样品 10 g（精确到 0.01 g），加入三唑磷标准 工作液 （ 4.10） 50 L，按照本标准 7.2、7.3步骤进行提取、净化和测定，其色谱图参见附 录 A中的 图 A.3。 8 计算结果 8.1 水体中三唑磷的含量按公式（ 1）计算，结果保留三位有效数字。 SS VVCC . (1) 式中： CS 样品中三唑磷含量， mg/L； C 从标准曲线查得对应的三唑磷浓度， mg/L； V 样品定容体积， L； VS 样品取样体积， L。 8.2 底泥中三唑磷的含量按公式（ 2）计算，结果保留三位有效数字。 Wm VCCS 100 100.
16、(2) 式中： CS 底泥干样中三唑磷含量 ， mg/kg； C 从标准曲线查得对应的三唑磷浓度， mg/L； V 样品定容体积， mL； m 样品质量， g； W 含水率， %。 DB33/T 610 2017 5 9 方法灵敏度、准确度和精密度 9.1 方法灵 敏度 本方法水体中三唑磷 定量限 为 0.02 g /L，底泥中三唑磷 定量限 为 1.0 g/kg。 9.2 方法准确度 本方法水体中添加浓度 0.02 g/L 1 g/L时 加标回收率为 70% 120%，底泥中添加浓度 1.0 g/kg 50 g/kg时 加标回收率为 70% 120%。 9.3 精密度 在重复性条件下获得的两
17、次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的 15 %。 第二法 气相色谱质谱法 10 原理 水样采用二氯甲烷和正己烷提取，底泥样采用乙酸乙酯和正己烷提取，萃取液用硅胶固相萃取柱分离净化，经浓缩定容后， 毛细管柱气相色谱 柱 分离， 气相色谱 -质谱联用仪 检测 ， 以选择离子监测模式进行分析， 外标法定量。 11 试剂和材料 除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水符合 GB/T 6682-2008二级水要求。 11.1 二 氯甲烷：色谱纯。 11.2 正己 烷：色谱纯。 11.3 乙酸乙 酯：色谱纯。 11.4 丙 酮：色谱纯。 11.5 盐酸溶液（ 1+1）：取 50
18、mL 盐酸慢慢加入 50 mL 水中。 11.6 无水硫酸 钠 ： 650 灼 烧 4 h，取出放入干燥器中冷却后置于密 闭容器中备用。 11.7 铜粉：粒径 0.074 mm，纯度 99.7%，用盐酸溶液（ 4.5）浸泡 30s，倾去酸，去离子水洗至中性，再用 丙酮洗涤数次，氮气吹干，充氮气保存于具塞玻璃瓶中。 11.8 三唑磷标准品：纯度 99.9%， CAS 为 24017-47-8。 11.9 三 唑磷标准储备液（ 100 g/mL）：称取三唑磷标准品（ 4.9） 0.01 g（精确到 0.0001 g） 于 100 mL 容量 瓶中，用丙酮（ 4.4） 定容至 标线 ；或 购买相当纯
19、度的有证标准溶液。置于 -20 冰箱中保存，配制储备液 有效期 6 个月。 11.10 三 唑磷标准工作液（ 1.0 g/mL）： 准确吸取 0.10 mL 三 唑磷标准储备液（ 4.6） 至 10 mL 棕色容量 瓶中，用丙酮（ 4.4） 定容至 标线 ，混 匀，现用现配。 12 仪器和设备 DB33/T 610 2017 6 12.1 气相色谱质谱仪：配有电子轰击（ EI）源 。 12.2 电子 天平：感量 0.0001 g。 12.3 电子 天平：感量 0.01 g。 12.4 涡旋振荡器。 12.5 离心机 ： 0 r/min 5000 r/min。 12.6 旋转蒸发仪 ：配 100
20、 mL 旋蒸瓶 。 12.7 氮吹仪。 12.8 固相萃取装置 。 12.9 无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱 （内径 1.0 cm） 中装无水硫酸钠 （ 4.6） 10 g。 12.10 硅胶固相萃取柱： 500 mg， 3 mL。 12.11 滤膜： 0.22 m 有机滤膜。 13 试样制备与保存 13.1 样品采集、贮存和运输按照 GB 17378.3、 SC/T 9102.3、 HJ 493 执行。 13.2 水体样 品采集 以 棕色磨口玻璃瓶封装后保存于 4， 48 h 内提取，冷藏保存，提取液在 5 d 内完成分析测定。 13.3 底泥样品采集后于棕色玻璃瓶中 4 冷藏保存， 48 h
21、 内 以湿样提取 ，冷藏 保存 ，提取液在 5 d内完成分析测定。 14 测定步骤 14.1 水体中三唑磷提取和净化 14.1.1 提取 摇匀并准确量取 500 mL水样于 1 L分液漏斗中，加入 20 mL二氯甲烷（ 11.1），震荡摇匀 2 min，静置分层后收集二氯甲烷相 ， 过无水硫酸钠柱（ 12.9） ，收集 于 100 mL旋蒸瓶中。 使用 20 mL正己烷（ 11.2）重复提取 样品 一次， 静置分层后收集正己烷相过无水硫 酸钠柱（ 12.9）与二氯甲烷相合并。 用 10 mL正己烷（ 11.2）淋洗无水硫酸钠柱（ 12.9）， 收集淋洗液于同一旋蒸瓶 。 提 取过程 静置分层时
22、 若出现乳化现象， 采用加入 10 g无水硫酸钠 （ 11.6） 、搅动、离心 和用 玻璃棉过滤方法破乳 ，破乳分层后收集有机相过无水硫酸钠柱（ 5.9），收集淋洗液于旋蒸瓶 。 14.1.2 净化 提取液旋转蒸发近干，加入 3 mL正己烷（ 11.2）溶出提取物。使用硅胶固相萃取柱（ 12.10）对提取液进行净化：依次用 6 mL二氯甲烷（ 11.1）和 6 mL正己烷（ 11.2） 活化萃取柱 ， 待正己烷液面与萃取柱填料 相平时， 将 提取液 全部转移至净化柱上，再用 2 mL正己烷（ 11.2）洗涤旋蒸瓶，洗涤液一并上柱 。用 5 mL二氯甲烷（ 11.1）洗脱 净化 柱，收集洗脱液于
23、 15 mL离心管内，氮吹 近 干，加入 1 mL丙酮 （ 11.4）定容， 充分涡旋后 过滤膜 （ 12.11） 转移至进样小瓶中，供气相色谱分析 。 14.2 底泥中三唑磷提取和净化 14.2.1 提取 DB33/T 610 2017 7 14.2.1.1 称取 10 g（ 精确到 0.01 g）底泥 样品于 50 mL 具塞 聚四氟乙烯 离心管中，加入 10 mL 水 ，再加入 15 mL 乙酸乙酯（ 11.3），涡旋震荡 2 min，于离心机 5000 r/min 离 心 5 min， 取 上层有机相过无水硫酸钠柱（ 12.9） ， 收集于 100 mL 旋蒸瓶中， 向底泥中 加入 1
24、0 mL 正己烷 按上述方法再次 提取 ，合并 提取液 。用 10 mL 乙酸乙酯淋洗无水硫酸钠柱（ 12.9）， 收集淋洗液于同一旋蒸瓶 。 14.2.1.2 另 称取 10 g（ 精确到 0.01 g） 样品，按照 GB 17378.5 进行含水率测定。 14.2.2 净化 向提取液中加入适量活化铜粉（ 11.7）脱硫，充分涡旋后，按照本标准 14.1.2步骤进行后续净化 。 14.3 测定 14.3.1 气相色谱条件 a) 进样量： 1 L； b) 色谱柱：毛细管气相色谱柱， DB-35MS，规格： 30 m 0. 25 mm 0.25 m，或性能相当者 ； c) 进样方式：不分流进样
25、； d) 载气：高纯氮气，纯度 99.999%， 柱流量 1.0 mL/min； e) 进样口温度： 260 ； f) 柱温：起始温度 80 ，以 30 /min 升温至 200 ，以 15 /min 升温至 260 ，保持 4 min，以 30 /min 升温至 290 ，保持 2 min。 14.3.2 质谱条件 a) 离子源： EI 源 ； b) 电子能量： 70 eV； c) 离子源温度： 230 ； d) 四级杆温度： 150 ； e) 接口温度： 260 ； f) 溶剂延迟： 3.5 min； g) 监测模式：用 SCAN 模式时 ，质量扫描范围为 50 m/z 400 m/z，溶
26、剂延迟 3.5 min。 SIM 模式扫描时，三唑磷定量离子 m/z 161、定性离子 m/z 172 和 m/z 257。 14.3.3 定性分析 以保留时间和特征离子的丰度比进行定性。样品中目标物保留时间与标准溶液中三唑磷的保留时间相差在 0.5 min内，且特征离子的相对丰度偏差不超过表 1的规定范围，则判定样品中存在三唑磷残留。三唑磷标准溶液在气相色谱质谱仪 图 参见 附 录 B中的图 B.1，三唑磷 质谱 图参见 附录 B中的图 B.2。 表 1 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 /% 50 20 50 10 20 10 允许的相对偏差 /% 20 25 30 50 1
27、5 结果计算 15.1 水体中三唑磷的含量按公式（ 3）计算，结果保留三位有效数字。 DB33/T 610 2017 8 SS VVCC . (3) 式中： CS 样品中三唑磷含量， mg/L； C 从标准曲线查得对应的三唑磷浓度， mg/L； V 样品定容体积， L； VS 样品取样体积， L。 15.2 底泥中三唑磷的含量按公式（ 4）计算，结果保留三位有效数字。 Wm VCCS 100 100. (4) 式中： CS 底泥干样中三唑磷含量 ， mg/kg； C 从标准曲线查得对应的三唑磷浓度， mg/L； V 样品定容体积， mL； m 样品质量， g； W 含水率， %。 16 方法灵敏度、准确度和精密度 16.1 方法灵敏度 本方法水体中三唑磷定量限为 0.05 g /L，底泥中三唑磷定量限为 2.5 g/kg。 16.2 方法准确度 本方法水体中添加浓度 0.05 g/L 1 g/L时， 回收率为 70% 120%， 底泥中添加浓度 2.5g/kg 50 g/kg 时， 回收率为 70% 120%。 16.3 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果绝对差值不得超过算术平均值的 15%。
