CNS 11737-2007 Method of test for milk and milk products - Detection of vegetable fat in milk fat《乳品检验法-乳脂肪中植物油脂之检出》.pdf

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资源描述

1、1 印月961月 本標準非經本局同意得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 號 ICS 67.100 N620311737經濟部標準檢驗局印 公布日期 修訂公布日期 7510月24日 961月19日 (共6頁)乳品檢驗法乳脂肪中植物油脂之檢出 Method of test for milk and milk products Detection for vegetable fat in milkfat 1. 適用範圍:本標準規定乳脂肪中添加植物油脂之測定方法。 2. 檢驗方法:乳脂肪中植物油脂之檢出可採用氣相層析法( GC 法)或固醇醋酸鹽法。如其結果發生紛歧時,以 GC 法為準。 2.1 氣

2、相層析法 (gas chromatography, GC) 2.1.1 裝置、器具及材料 2.1.1.1 氣相層析儀 2.1.1.1.1 偵檢器:氫焰離子化偵檢器 (Flame ionization detector)。 2.1.1.1.2 層析管柱:內徑 2 4 mm,長度 100 200 cm 之玻璃管或同等級品,層析管用填充劑為 Chromosorb W. AW. DMCS (80100 mesh/ 100 120 mesh )上覆被有 Methylesilicon SE-30, 240%。 2.1.1.1.3 注入器:溫度應較層析管柱溫度高 20 40。 2.1.1.1.4 移動相氣體

3、: N2,流速 30 60 mL / min。 2.1.1.2 分析天平:精確至 0.0001 g。 2.1.1.3 三角燒瓶:容量為 500 mL,瓶口可裝上空氣冷凝管。 2.1.2 試藥 2.1.2.1 甲醯胺 (formamide)及二甲基代甲醯胺液 (N. N. dimethyl formamide):等容混合。 2.1.2.2 正戊烷或石油醚。 2.1.2.3 氫氧化鉀溶液:溶解氫氧化鉀 400 g 於水 600 mL 中。 2.1.2.4 洋地黃皂苷酒精溶液 (ethanolic digitonin):稱取洋地黃皂苷10 g 溶於95% (v/v)乙醇 1L 中。 2.1.2.5

4、硫酸銅溶液:稱取硫酸銅 (CuSO45 H2O)溶於蒸餾水 1 L 中。 2.1.2.6 乙醇: 95% (v/v)。 2.1.2.7 乙醚。 2.1.2.8 無水硫酸鈉。 2.1.3 步驟 2.1.3.1 試樣的調製 2.1.3.1.1 乳酪 (Butter):取約 50 g 乳酪在 50以下熔融,直至脂肪與水層分離為止,趁熱濾取脂肪層。 2 CNS 11737, N 6203 2.1.3.1.2 乳及乳油 (Milk and cream):試樣離心得到約含 40%脂肪之乳油,旋轉攪拌乳油後收集乳酪部分,以下步驟按第 2.1.3.1.1 節操作。 2.1.3.1.3 乾酪 (Cheese):

5、用無水硫酸鈉以磨碎 機磨碎試樣,直到生成粒狀止,移入連續式萃取裝置中以正戊烷或石油醚收集之,回收萃取液於粗脂肪瓶,並置於沸水浴上去除殘存溶劑。 2.1.3.1.4 煉乳、蒸發乳及冰淇淋 (Condensed milk, evaporated milk and ice-cream):加 2 倍試樣體積的沸水且在沸水水浴上加熱使混合液之溫度升至 75後,加混合液之 1/10 量的硫酸銅溶液,繼續加熱至沉澱物產生為止,過濾後,沉澱物以溫水洗至濾液為無色止,小心地使沉澱物之水滴乾,加無水硫酸鈉將之磨碎成粒狀,以下步驟按第 2.1.3.1.3 節操作。 2.1.3.1.5 乳粉 (Dried milk)

6、:加少量水磨碎使成凝結狀,靜置約 15 分鐘後,加無水硫酸鈉,再磨碎直到生成粒狀,以下步驟按第2.1.3.1.3 節操作。 2.1.3.2 洋地黃皂苷固醇 (Sterol digitonides)的製備:精確稱取試樣 15 g 於三角燒瓶中,加氫氧化鉀溶液 10 mL 及 95 %乙醇 (v/v)20 mL 後裝上空氣冷凝管上,放置於沸水浴上加熱,直到溶 液變為澄清,再繼續加熱沸騰30 分鐘,注入水 60 mL,再加 95%(v/v)乙醇 180 mL,加熱使溫度達40左右,加洋地黃皂苷酒精溶液 30 mL,冷卻後,放入 5冰箱中經12 小時,以中速之濾紙過濾,收集洋地黃皂苷固醇沉澱物,再以

7、5冷水洗沉澱物直到濾液不生泡沫後,再以 95%(v/v)乙醇 25 50 m L 及乙醚 25 50 mL 洗之,將濾紙及沉澱物置於錶玻皿上,以 (102 2)烘箱中乾燥 10 15 分鐘,將濾紙折成 2 折,將薄片狀之沉澱物移入稱量瓶中。 備考:固醇含量,可由沉澱物秤重後,再依下列公式計算 0101mm25100mm25.0= 式內, m0:試樣重 (g), m1:固醇沉澱物重 (g) 2.1.3.3 固醇的調製:在小試管中溶解洋地黃皂苷固醇 10 mg 於甲醯胺與二甲基甲醯胺混合液 0.5 mL 中,如有需要稍微加熱,放冷後加正戊烷 2.5 mL,加蓋搖勻後,使之分層且取含有游離固醇之上層

8、透明之正戊烷層,供作氣相層析分析之用,此溶液含有約 1 mg / mL 的固醇。 2.1.3.4 靈敏度試驗液 (Sensitivity test solution)調製:現調製之乳脂肪固醇於 1 mg 溶於的正戊烷 1 mL 中 (參照第 2.1.3.2 節與第 2.1.3.3 節 ) 2.1.3.5 波峰解析試驗液 (Peak resolution test solution)調製:將現調製之菜籽油固醇 0.9 mg 及乳脂固醇 0.1 mg 溶於正戊烷 1 mL 中 (參照第 2.1.3.2 節3 CNS 11737, N 6203 與第 2.1.3.3 節 ) 2.1.3.6 參考試驗

9、液 (Reference test solution)調製:現調製之黃豆油固醇 1 mg於正戊烷 1 mL 中 (參照第 2.1.3.2 節與第 2.1.3.3 節 ) 2.1.3.7 判定 2.1.3.7.1 靈敏度試驗:注入 3 5 L 之靈敏度試驗液,在氣相層析圖譜上僅出現一個 Cholesterol 之波峰。 2.1.3.7.2 波峰解析試驗 ):注入 3 5 L 之波峰解析試驗液,在氣相層析圖譜上有 Cholesterol, Brassicasterol, Campesterol 及-Sitoesterol 之波峰,量測各滯留距離及波峰寬 度且其波峰解析值至少為 1。 2.1.3.7

10、.3 參考試驗:注入 3 5 L 參考試驗 液在氣相層析圖譜上有Campesterol, Stigmesterol 及 -Sitoesterol 之波峰,量測各滯留距離並計算出其相關之滯留時間,其數據大致如下: 膽固醇 1.00(滯留時間約 15 分鐘 ) Brassicasterol 1.13 至 1.15 Campesterol 1.32 至 1.34 Stigmesterol 1.44 至 1.46 -Sitoesterol 1.66 至 1.68 2.1.3.7.4 定性:將檢液 3 5 L 注入氣相層析儀,並記錄其氣相層析圖譜。當圖譜在 -Sitoesterol 相關之滯留時間有波峰

11、出現,且其高度為全圖高的 2 %以上時,判定含有植物脂肪。若 GC 圖譜上出現其他植物固醇,如 Campesterol, Stigmesterol,可支持含有植物脂肪之判定。 2.1.3.7.5 靈敏度:本方法 -Sitoesterol 之偵測極限為 0.5 %,但是乳脂肪中的植物脂肪含量則會受添加脂肪中 -Sitoesterol 含量影響,而無法得到其偵測極限。 2.2 固醇醋酸鹽法 2.2.1 裝置、器具及材料 2.2.1.1 分析天平:精確至 0.0001 g。 2.2.1.2 三角燒瓶:容量為 500 mL,瓶口可裝上空氣冷凝管。 2.2.1.3 玻璃微濾器裝置 (Micro-filt

12、ering device)。 2.2.1.4 熔點測定裝置 (Melting point apparatus)。 2.2.1.5 熔點測定管 (Melting point tubes)。 2.2.1.6 一般或偏光顯微鏡 (Ordinary or polarizing microscope):放大倍數 200 倍。 2.2.1.7 乾燥烘箱:可控制溫度於 (1022)。 2.2.1.8 甘油浴:可控制溫度於 130 145。 2.2.2 試藥 2.2.2.1 正戊烷或石油醚。 4 CNS 11737, N 6203 2.2.2.2 氫氧化鉀溶液:溶解氫氧化鉀 400 g 於水 600 mL 中

13、。 2.2.2.3 洋地黃皂苷酒精溶液:取洋地黃皂苷10 g 溶於 95% (v/v)乙醇 1 L 中。 2.2.2.4 乙醇: 95% (v/v)。 2.2.2.5 乙醇: 80% (v/v)。 2.2.2.6 乙醚。 2.2.2.7 醋酸酐。 2.2.2.8 正戊烷或石油醚。 2.2.2.9 硫酸銅溶液:取硫酸銅 70 g 溶於蒸餾水 1 L 中。 2.2.2.10 無水硫酸鈉。 2.2.3 步驟 2.2.3.1 試樣的調製及洋地黃皂苷固醇的製備依第 2.1.3.2 節及第 2.1.3.3 節步驟。 2.2.3.2 製備固醇醋酸鹽 (steryl acetate)及測定熔點 2.2.3.2

14、.1 將洋地黃皂苷固醇 (0.10.005)g 移入試管中,加入醋酸酐 1 mL並以甘油浴加熱試管 130 145直到沉澱物溶解。不可以直接加熱,因為可能會濺出來。持續加熱 2 分鐘,再冷卻至約 80。 2.2.3.2.2 加入乙醇 4 mL,稍微混合並加熱以溶解可能結晶出的固醇醋酸鹽。 2.2.3.2.3 經由已浸有乙醇的小型中速濾紙趁熱過濾,將濾液收集至另一根試管。 2.2.3.2.4 將試管中的濾液小心的加熱直至溫和沸騰。 2.2.3.2.5 劇烈搖晃試管,讓溶液保持沸騰,慢慢由吸管一滴一滴加入 1 1.5 mL 水,直到固醇醋酸鹽幾乎要由溶液中沉澱出。 2.2.3.2.6 再加入數滴乙

15、醇溶解任何沉澱出的固醇醋酸鹽。 2.2.3.2.7 放在室溫 2 小時後,在放入冰水中 30 分鐘。 2.2.3.2.8 使用硬質快速濾纸以微濾器抽氣過濾固醇醋酸鹽結晶,並以乙醇 1 mL 沖洗結晶。 2.2.3.2.9 將結晶塊放入試管中加乙醇 1 mL,以微火加熱溶解。 2.2.3.2.10 起先 15 分鐘先於室溫冷卻,再放入冰水 5 分鐘。如第 2.2.3.2.8節過濾固醇醋酸鹽結晶。 2.2.3.2.11 重複步驟第 2.2.3.2.9 節至第 2.2.3.2.10 節。假如需要重複這些步驟至少 2 次。 2.2.3.2.12 先以約 30烘乾濾纸上的結晶塊,再放入乾燥烘箱中,以溫度

16、(1022)烘 10 15 分鐘。 2.2.3.2.13 將結晶塊在表玻璃上弄破、混合,並填充至熔點測定管中約 3 mm 高。以熔點裝置測定熔點,在熔解後期以 0.5 /min之速率升高溫度。當最後的結晶都已熔解時,記錄此時溫度計上之熔點溫度至 0.1。 2.2.3.3 顯微鏡鏡檢:僅在固醇醋酸鹽之熔點大於等於 115.5,但小於 117時需實施。 5 CNS 11737, N 6203 2.2.3.3.1 在小試管中以乙醇 1 mL 溶解固醇醋酸鹽約 0.01 g 並加入氫氧化鉀溶液 1 2 滴。 2.2.3.3.2 在沸水浴上加熱直至沸騰及固醇醋酸鹽溶解。 2.2.3.3.3 加入水 10

17、 mL,並移入分液漏斗中,以乙醚 25 mL 萃取。 2.2.3.3.4 當分層時,排掉及丟棄水層。 2.2.3.3.5 以水 5 mL 洗三次乙醚層。 2.2.3.3.6 將乙醚層移入 50 mL 燒杯中,並蒸發至乾。 2.2.3.3.7 將殘渣以 80%乙醇 10 mL 溶解。放一滴澄清液至顯微鏡蓋玻片(Cover slip),讓溶液佈滿片上。直至蓋玻片的邊緣開始有結晶產生,翻轉蓋玻片放置於載玻片上。 2.2.3.3.8 當有更多結晶產生後,以 200 倍的顯微鏡觀察。 2.2.3.4 結果判定 2.2.3.4.1 如果固醇醋酸鹽熔點是介於 114.0 115.5之間,則實驗室試樣將被認為

18、不含植物脂肪。 2.2.3.4.2 如果固醇醋酸鹽熔點是大於等於 117.0,則此試樣將被認為含有植物脂肪。 2.2.3.4.3 固醇醋酸鹽之熔點大於等於 115.5,但小於 117時,重複溶解、再結晶及過濾等步驟至少兩次 (見第 2.2.3.2.11 節 ),乾燥結晶塊和重覆第 2.2.3.2.12 節及第 2.2.3.2.13 節步驟測定熔點。 (1) 如果此時固醇醋酸鹽熔點是大於等於 117.0,則此試樣將被認為含有植物脂肪。 (2) 如果此時固醇醋酸鹽之熔點依然大於等於 115.5,但小於117。則試樣需依步驟第 2.2.3.3 節進行顯微鏡檢。 (3) 如果顯微鏡鏡檢顯示,固醇晶體僅

19、有鈍角為 100之平行四邊形的形式存在 (如圖 1),則實驗室試樣將被認為不含植物脂肪。 (4) 如果顯微鏡鏡檢顯示,有一些固醇晶體為拉長的六邊形,其頂點角度為 108,此為植物固醇的 特徵,或者有一些固醇晶體含有凹角 (燕尾 ),此為含有植物固醇與膽固醇混合物的特徵 (如圖 1),則此試樣將被認為含有植物脂肪。 6 CNS 11737, N 6203 圖 1 植物固醇與膽固醇混合物的特徵 2.2.3.5 靈敏度與加入植物脂肪的性質有關,例 如植物脂肪中的植物固醇混合物的量及種類。 2.2.3.6 測試報告:測試報告將含有熔點、再結晶的次數 ,假如有顯微鏡鏡檢應將使用方法及觀察固醇結晶的狀況描 述於報告,本方法的操作細節及任何會影響測試結果的事件皆須提及 。測試結果應包含完整證明辨別試樣所需的資訊。 相對應國際標準: ISO 3594-1976(E), Milk fat Detection of vegetable fat by gas-liquid chromatography of sterols( Reference method) ISO 3595-1976(E), Milk fat Detection of vegetable fat by the phytosteryl acetate test

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