1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 67.220.10 N637414836經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 93 年 7 月 6 日 年月日 (共 3 頁 )食品中茄紅素含量檢驗法 Method of test for Lycopene in food 1. 適用範圍：本標準規定食品中茄紅素之測定。 2. 檢驗方法：高效液相層析法 (High performance liquid chromatography, HPLC) 2.1 裝置 2.1.1 高效液相層析儀 2.1.1.1 偵檢器：具有 472 nm
2、 波長紫外光之偵檢器。 2.1.1.2 層析管柱： Luna 5 m, C18(4.6mm 250mm)或同級品。 2.1.2 振盪器 (Shaker)。 2.1.3 高速離心機 (Centrifuge)。 2.1.4 減壓濃縮裝置。 2.2 試藥 2.2.1 四氫 喃 (Tetrahydrofuran, THF)層析級或同等級之溶劑。 2.2.2 乙腈 (Acetonitrile)層析級。 2.2.3 甲醇 (Methanol)層析級。 2.2.4 2,6-二第三丁基對甲酚 (Butylated hydroxytoluene, BHT)試藥級。 2.2.5 茄紅素對照用標準品 (All tr
3、ans-Lycopene from tomato) (1)。 2.2.6 萃取液：將 BHT 溶於 THF 中，濃度 1%(w/w)。 2.3 器具及材料 2.3.1 離心管：玻璃材質， 50 mL 含蓋。 2.3.2 濃縮瓶：褐色， 150mL。 2.3.3 玻璃漏斗。 2.3.4 濾紙： Whatman No. 1。 2.3.5 濾膜：孔徑 0.2 m， Polyvinylidene difluoride 材質。 2.4 標準溶液之配製 2.4.1 稱取茄紅素對照用標準品 1mg 至 10 mL 定量瓶，精確稱定，以萃取液溶解並定容，分裝於褐色瓶，填充氮氣，貯存於 -20冰箱。 2.4.2
4、 取用時再以萃取液稀釋至 2.5、 2.0、 1.0、 0.5、 0.1 ppm，作為 HPLC 分析的標準迴歸曲線。 2.5 檢液之調製 2.5.1 樣品經適當均質後，精稱適量樣品 (2)至小數後兩位於 50mL 的玻璃離心管中。 2.5.2 加入 30mL 之萃取液，再以振盪器萃取 20 分鐘。 2 CNS 14836, N 6374 2.5.4 沉澱物再以 30mL 之萃取液萃取 5 分鐘，如此重複至少 2 次，直到上層澄清液澄清無色為止。 2.5.5 混合萃取液以減壓濃縮 (35 )至乾，再以萃取液洗出，定容至 10mL。 2.5.6 以濾膜過濾得試樣溶液，或使用離心機，以 9000
5、rpm(4260 g 以上 )離心 5分鐘。 2.5.7 取部分濾液或離心液於褐色 HPLC 上機瓶加蓋並立刻上機。 2.6 計算 茄紅素 (3) (以反式茄紅素計， mg/100 g) = 101Wv.F.DCC：茄紅素相對濃度，由標準曲線經線性迴歸內插計算而得 (ppm or g/mL) D.F.：樣品萃取液之稀釋倍數 v：樣品萃取液定量體積 (mL) W：樣品重量 (g) 高效液相層析測定參考條件，其餘條件應依所使用儀器之不同自行調整。 層析管柱： Luna 5 m, C18(4.6mm 250mm) 紫外光偵檢器：波長 472 nm 移動相：乙腈：四氫 喃：甲醇 = 70： 20： 1
6、0。 移動相溶液流速： 1.5 mL/min。 注射量： 10 L。 偵測範圍： 0.01 AUFS(Absorbance unit full scale)。 偵測時間： 10 分鐘，茄紅素吸收峰約出現在 7 分鐘處。 註 (1) 因標準品會有劣化的情形，所以建議以吸光濃度檢量線求出標準品濃度。 %純度 = %10010000%1472CEAbsnmAbs：分光光度計吸收值 %1472nmE ： 3450 C：茄紅素對照用標準品濃度 (2 g/mL) (2) 樣品量應隨樣品中茄紅素含量有所調整，如：番茄汁： 2.0 克、番茄糊：0.5 克、番茄醬： 1.0 克 (3) 順式與反式茄紅素的個別定
7、量需針對實驗條件另作檢討。 (4) 實驗應在避光之暗室中進行，若無暗室應選用褐色避光玻璃器皿或包覆鋁箔，以達隔絕光線之效果。 3 CNS 14836, N 6374 參考文獻： 1.Bushway, R. J. (1986) Determination of - and -carotene in some raw fruits and vegetables by high-performance liquid chromatography, J. Agric. Food Chem., 34, 409412 2.Taungbodhitham, A. K.; Jones, G. P.; Wahlq
8、vist, M. L.; Briggs, D. R. (1998) Evaluation of extraction method for the analysis of carotenoids in fruits and vegetables, Food Chemistry, 63, 577-584 3.Holden, J. M.; Eldrige, A. L.; Beecher, G. R.; Buzzard, I. M.; Bhagwat, S.; Davis, C. S.; Douglass, L. W.; Gebhardt, S.; Haytowitz, D.; Schakel, S. (1999) Carotenoids content of U.S. Foods: an update of the database, J. Food Composit. Anal., 12, 169196 4.Anguelova, T.; Warthesen, J. (2000) Degradation of lycopene, -carotene and -carotene, J. Food Sci., 65, 7175
