1、 1 印行年月 94 年 10 月 本標準非經本局同意不得翻印 中華民國國家標準 CNS 總號 類號 ICS 65.120 N419814888經濟部標準檢驗局印行 公布日期 修訂公布日期 94 年 1 月 10 日 年月日 (共 2 頁 )飼料中雪華力新之檢驗方法 Method of test for Cephalexin in feeds 1. 適用範圍：本標準規定飼料中雪華力新 (Cephalexin)之檢驗方法。 2. 原理：飼料中雪華力新以乙腈 (acetonitrile)及 pH2 磷酸緩衝溶液（ 20:80）萃取後經C18過濾層析匣純化後，用高效液相層析法 (high perfo
2、rmance liquid chromatography, HPLC)測定。 3. 設備 3.1 裝置 3.1.1 高效液相層析儀 3.1.1.1 檢測器：具有 260 nm 波長之紫外光檢測器。 3.1.1.2 層析管： Tosh-Gel-80 TM4.6250 mm 或同級品。 3.1.2 離心機 (Centrifuge) 3.1.3 振盪器 (Shaker) 3.1.4 減壓濃縮裝置 (Rotary evaporator) 3.1.5 真空固相萃取裝置 (Solid phase extraction vacuum manifold) 及 C18過濾層析匣 3.2 器具及材料 3.2.1
3、離心瓶： 50 mL。 3.2.2 濃縮瓶： 250 mL。 3.2.3 C18過濾層析匣： 500 mg。 3.2.4 濾膜：孔徑 0.45 m， polyvinylidene difluoride 材質。 4. 試藥：乙腈及甲醇 (methanol)均採用液相層析級，雪華力新對照用標準品， 85 %磷酸（ ortho-phosphoric acid 85 %）採用試藥級。 5. 移動相溶液之製備 5.1 pH2 磷酸緩衝溶液： 1 L 的去離子水以 85 %磷酸調至 pH2。 5.2 乙腈及 pH2 磷酸緩衝溶液（ 15:85）以濾膜過濾，取濾液作為飼料檢體分析之移動相溶液。 6. 標準溶
4、液之製備：秤取 100 mg 雪華力新對照用標準品，精確秤定，以去離子水溶解並定容至 100 mL，作為標準原液，臨用時再以移動相稀釋成 0.1 1 g/mL，供作標準溶液。 6.1 檢液之製備 6.1.1 萃 取：取 3.0 g 飼料於離心管中，精確秤定，置於 50 mL 離心管中，加 30 mL乙腈及 pH2 磷酸緩衝溶液（ 20:80），振 盪 20 分鐘，再以 3500 rpm 離心 20 2 CNS 14888, N 4198 分鐘，取上清液與 10 mL 異丙醇混合置於 125 mL 濃縮瓶中，殘留物再加入 5 mL 乙腈於濾紙中過濾後置於 125 mL 濃縮瓶中，於 40 減壓濃
5、縮至乾，再以 2 mL pH6 之磷酸緩衝溶液溶洗濃縮瓶 2 次，供作淨化用。 6.1.2 淨化：取第 6.1.1 節之供淨化用溶液，注入先以 10 mL 甲醇及 10mL 去離子水潤洗之 C18過濾層析匣，調整真空固相萃取裝置，流速每秒一滴 (每滴體積約 0.04 mL)，棄流出液。再將先前收集之樣品注入管柱中，然後以 5 mL甲醇沖提，收集隨後之 5 mL 沖提液。沖提液於 40 氮氣吹乾，殘留物以移動相定容至 1 mL，經 0.45 m 濾膜過濾後，再取 50 L 注入 HPLC 中。 7. 回收率測定：取 10 ppm 雪華力新加入 3.0 g 空白飼料各 300、 600、 750、
6、 1050 L以構成 1、 2、 2.5、 3.5 ppm 四種濃度，依序進行第 6.1.1 節及第 6.1.2 節之步驟，扣除該飼料原有背景值，比對標準曲線計算飼料加藥回收率。 8. 鑑別試驗及含量測定：精確量取 10 L 之檢液及標準溶液，分別注入高效液相層析儀，參照下列條件進行液相層析，就檢液與標準溶液所得波峰之滯留時間比較鑑別之，並另取以標準曲線求出檢體中雪華力新之含量 (ppm)。 8.1 高效液相層析儀分析參考條件 層析管： Tosh-Gel-80 TM4.6250 mm 或同級品。 紫外光偵測器：波長 260 nm。 流速： 1.0 mL/min。 8.2 計算 依下列計算式求出飼料樣品中雪華力新之含量 (ppm)。 檢體中雪華力新之含量 (ppm)= ( CV)M 稀釋倍數 回收率 C：由標準曲線求得檢液中雪華力新濃度 (g/mL) V：飼料樣品經淨化後定容之體積 (mL) M：取樣分析檢體之重量 (g) 備考：本檢驗方法之最低檢出限量為 1 ppm。
