1、STD-DIN DIN 10758-GERM 1777 m 277lJlJYb Ob28b11 b35 m DEUTSCHE NORM Mai 1997 Untersuchung von Honig Bestimmung des Gehaltes an den Sacchariden Fructose, Glucose, Saccharose, Turanose und Maltose HPLC-Verfahren DIN 10758 - ICs 67.180.10 Deskriptoren: Honig, HPLC, Saccharid, Gehaltsbestimmung Analysis
2、 of honey - Determination of the content of saccharides fructose, glucose, saccharose, turanose and maltose - HPLC method Analyse de miel - Dtermination de la teneur en saccharides fructose, glucose, saccharose, turanose et maltose - Mthode de HPLC v0Twot-t Diese Norm wurde vom Normenausschu Lebensm
3、ittel und landwirtschaftliche Produkte, Arbeitsausschu “Honig- untersuchung”, erarbeitet. Zu den Tabellen 1 bis 5: Die Werte fr die Wiederholgrenze und die Vergleichgrenze sind aus Ringversuchen gewonnen worden. Sie gelten mit einer Wahrscheinlichkeit von 95 %. Das bedeutet, da im Durchschni bei 20
4、Untersuchungen einmal eine berschreitung der angegebenen Werte erwartet werden kann. 1 Anwendungsbereich 3 Definitionen Diese Norm legt ein Verfahren zur Bestimmung des Gehaltes an den Sacchariden Fructose, Glucose, Saccharose, Tura- nose und Maltose in Honig fest. Die Norm kann auch zur Identifizie
5、rung weiterer Saccharide und zu deren quantita- tiver Bestimmung angewendet werden. Unter Gehalt an den Sacchariden Fructose, Glucose, Sac- charose, Turanose und Maltose ist der mit dem in dieser Norm festgelegten Verfahren bestimmte Gehalt an diesen Zuckern zu verstehen. Er wird als Massenanteil in
6、 g je 1OOg Honig angegeben. 2 Normative Verweisungen Diese Norm enthlt durch datierte oder undatierte Verwei- sungen Festlegungen aus anderen Publikationen. Diese nor- mativen Verweisungen sind an den jeweiligen Stellen im Text zitiert, und die Publikationen sind nachstehend aufgefhrt. Bei datierten
7、 Verweisungen gehren sptere nderungen oder berarbeitungen, dieser Publikationen nur zu dieser Norm, falls sie durch Anderung oder berarbeitung eingear- beitet sind. Bei undatierten Verweisungen gilt die letzte Aus- gabe der in Bezug genommenen Publikation. DIN IS0 5725 Przision von MeBverfahren - Er
8、mittlung der Wiederhol- und Vergleichprzision von festgelegten Meverfahren durch Ringversuche; Identisch mit IS0 5725, Ausgabe 1986 Khn, R.; Birett, K. Merkbltter Gefhrlicher Arbeitsstoffe - Landsberg/Lech: Ecomed Verlagsgesellschaft mbH. - Loseb1.-Ausg., 15. Erg.-Lfg. 12.1981. Blatt A 05 Aceton- ni
9、tril. - ISBN 3-609-7300-5 4 Kurzbeschreibung Aliquote Teile einer wrigen Honiglsung werden durch einen Membranfilter filtriert. Die Bestimmung der Zucker erfolgt mit Hilfe der Hochleistungs-FIssigkeitschromatogra- phie (HPLC) und anschlieender IR-Detektion. Die Identifi- zierung wird anhand der Rete
10、ntionszeiten, die Quan- tifizierung nach der Methode des externen Standards ber die Peakflchen bzw. Peakhhen vorgenommen. 5 Chemikalien und Lsungen Soweit nicht anders angegeben, sind analysenreine Chemi- kalien zu verwenden. Das Wasser mu destilliert oder min- destens von entsprechender Reinheit se
11、in. 5.1 Methanol, geeignet fur HPLC 5.2 Acetonitril, geeignet fr HPLC GEFAHR - Bei Acetonitril handelt es sich um einen gefhrlichen Arbeitsstoff, Es sind die Hinweise zur Sicherheit in “Merkbltter Gefhrliche Arbeitsstoffe” unter “Acetonitril” zu beachten. Fortsetzung Seite 2 bis 4 NormenausschuB Leb
12、ensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V. O DIN Deutsches Institut fur Normung e.V. . Jede Art der Vervielfaltigung, auch auszugsweise, Alleinverkauf der Normen durch Beulh Verlag GmbH. 10772 Berlin nur mit Genehmigung des DIN Deutsches Institut fr No
13、rmung eV., Berlin, gestattet. Ref. Nr. DIN 10758: 1997-05 Preisgr. 06 Ve Porenweite 0,45 pm Filterhalter fr Membranfilter mit geeigneter Spritze Hochleistungs-Flscigkeitschromatograph, beste- hend aus Pumpe, Probenaufgabevorrichtung, IR-De- tektor, temperierbar auf 3OoC, Auswertsystem, Sulenofen, te
14、mperierbar auf 3OoC Analytische Trennsule aus Stahl I), z. B. Durch- messer 4,6 mm, Lnge 250 mm, Fllung bestehend aus aminmodifiziertem Siliziumdioxid 7 Probenahme Bis zum Erscheinen einer in Vorbereitung befindlichen Norm ist die Probenahme zu vereinbaren. Fr die Untersuchung ist eine Laboratoriums
15、probe von mindestens 2009 zu vetwenden. 1) ber Bezugsquellen gibt Auskunft: Normenausschu Lebensmittel und landwirtschaftliche Produkte (NAL) im DIN Deutsches Institut fr Normung e.V., 10772 Berlin (Hausanschrift: Burggrafenstrae 6, 10787 Berlin) 8 Durchfhrung 8.1 Probenvorbereitung 8.1.1 Flssiger o
16、der kandierter Honig ohne Verunreinigungen Die Laboratoriumsprobe ist durch intensives Rhren (minde- stens 3 min) ausreichend zu homogenisieren. Dabei ist dar- auf zu achten, da - insbesondere bei Weitewerwendung der Probe zur Bestimmung von Hydroxymethylfurfural (HMF) - mglichst wenig Luft mit unte
17、rgerhrt wird. 8.1.2 Flssiger oder kandierter Honig mit Verunreinigungen Nach Entfernung grober Verunreinigungen wird der Honig bei Raumtemperatur glattgerhrt und durch ein Sieb nach 6.1 gegeben. Kandierter Honig wird mit einem Spatel durch das Sieb nach 6.1 gerhrt. 8.1.3 Wabenhonig Falls die Waben n
18、och geschlossen sind, werden sie zunchst entdeckelt. Mit Hilfe eines Siebes nach 6.1 wird der Honig ohne Erwrmung vollstndig von den Waben getrennt. 8.2 Herstellung der Probenlsung Es werden 59 Honig in ein Becherglas eingewogen und ohne Erwrmung in etwa 40mi Wasser gelst. Die Lsung wird quantitativ
19、 in einen 100-mi-Mekolben bergefhrt, in den zuvor 25 mi Methanol pipettiert wurde. Der Kolben wird mit Wasser bis zur Strichmarke aufgefllt. Der Kolbeninhalt wird ber einen Membranfilter filtriert und in Probenflaschen gefllt. ANMERKUNG: Zur Haltbarkeit siehe 5.5, letzter Absatz. 8.3 Hochleistungs-F
20、lssigkeitschromatographie Der Hochleistungs-Flssigkeitschromatograph nach 6.8 wird in Betrieb gesetzt. Bei Verwendung der Sule nach 6.9 und der Elutionslsung nach 5.3 werden die Parameter zweckentsprechend, z. B. wie folgt dargestellt, gewhlt. (HPLC) Fliegeschwindigkeit: 1,3 mi/min Mobile Phase: Ace
21、tonitrilNVasser-Mischung Sulentemperatur: (30 k 1)OC (80 : 20 Volumenanteile) Injektionsvolumen: 20 pi In Bild 1 ist als Beispiel das HPLC-Spektrum der Standard- Melsung dargestellt, das unter den in diesem Abschnitt genannten Bedingungen gewonnen wurde. ANMERKUNG: Wenn kein Sulenofen zur Verfgung s
22、teht, ist bei Versuchsdurchfhrung bei Raumtem- peratur eine hufige Eichung mit dem externen Stan- dard vorzunehmen. 8.4 Qualitativer Nachweis und quantitative 8.4.1 Qualitativer Nachweis Der qualitative Nachweis der zu bestimmenden Saccharide erfolgt durch Vergleich der absoluten Retentionszeiten in
23、 der Probe mit denjenigen der Standardsubstanz. 8.4.2 Quantitative Bestimmung Die quantitative Bestimmung erfolgt nach der Methode des externen Standards durch Integration der Peakflchen bzw. durch Ermittlung der Peakhhen, bezogen auf den entspre- chenden Wert der Standardsubstanzen. ANMERKUNG: Die
24、Melsungen von Probe und Standard sind in gleichen Volumina zu injizieren. Bestimmung Seite 3 DIN 10758 : 1997-05 Wald honig Akazienhonig Lavendelhonig I I IFruc tose Glucose 31,20 0,82 k 0,29 1,60 f 0,57 42,39 0,88 k 0,31 2,34 f0,83 37,88 1 ,O3 f 0,36 1,57 f 0,56 Saccharose Tur anose Mal tose Trehal
25、ose 7- Isomaltose Wald honig Akazienhonig Lavendelhonig t 23,04 0,88 f 0,31 2,09 f 0,74 28,54 0,80 f. 0,28 1,78 f0,63 32,03 1 ,O7 I0,38 1,42 It 0,50 Er i ose Melezitose P Bild 1 : HPLC-Spektrum der Standard-Melsung 9 Auswertung V, Gesamtvolumen der Probenlsung, in Milliliter; 9.1 Berechnung V2 Gesam
26、tvolumen der Standard-Melsung, in Der Massenanteil an den zu bestimmenden Sacchariden Milliliter: Fructose, Glucose, Saccharose, Turanose und Maltose o ml Masse des in V, (Gesamtvolumen der Standard- in g je 1009 Honig wird nach folgender Gleichung berechnet Melsung) enthaltenen Zuckers, in Gramm; (
27、Verfahren des externen Standards): nz, Probeneinwaage, in Gramm. Al V, ,1111 . 100 A1 . V2. no o= Das Ergebnis wird auf eine Stelle nach dem Komma gerun- det angegeben. Hierin bedeuten: A, Peakflche bzw. Peakhhe des jeweiligen Zuckerstoffes in der Probenlsung, in Flchen-, Lngen- oder Integrationsein
28、heiten; 9.2 Przision des Verfahrens A2 Peakflche bzw. Peakhhe des jeweiligen Die in einem Ringversuch nach DIN IS0 5725 ermittelten Zuckerstoffes in der Standard-Melsung, in Werte fr die Wiederholgrenze r und die Vergleichgrenze R Flchen-, Lngen- oder Integrationseinheiten; sind in den Tabellen 1 bi
29、s 5 wiedergegeben. Tabelle 1 : Fructose Proben i I I sr I R IsR Alle Angaben in g je 1 O0 g Honig Tabelle 2: Glucose 1 Proben I r I sr I R I sR Alle Angaben in g je 1 O0 g Honig STD*DIN DIN 10758-GERM 1777 277444b Ob28bL4 344 X - Seite 4 DIN 10758 : 1997-05 r sr R SR Akazienhonig Lavendelhonig Waldh
30、onig I-I-I-I-I- - - - - - 2,83 0,43 I0,15 0,93 f 0,33 - X r sr R SR Akazienhonig I 1,66 I 0,27 I f0,lO I 0,51 I +0,18 Proben Waldhonig Lavendelhonig I 1,26 I 0,28 I f0,10 I 0,84 I f0,30 Alle Angaben in g je 1OOg Honig 2,12 0,42 f 0,15 0,84 f 0,30 - X Waldhonig I 4,77 I 0,55 I f0,19 I 2,54 I f0,90 I
31、r Sr R SR Akazienhonig I 2,02 I 0,62 I f0,22 I 1,31 1 f0,46 I Lavendelhonig 2,34 0,50 f 0,18 0,74 I0,26 In den Tabellen 1 bis 5 bedeuten: X Gesamtmittelwert r Wiederholgrenze s, Wiederholstandardabweichung R Vergleichgrenze sR Vergleichstandardabweichung 10 Untersuchungsbericht Im Untersuchungsbericht sind unter Hinweis auf diese Norm anzugeben: a) Art, Herkunft und Bezeichnung der Probe; b) Art und Datum der Probenahme; c) Eingangs- und Untersuchungsdatum; d) Untersuchungsergebnis; e) Begrndung, falls von dieser Norm abgewichen worden ist.
