1、2011 年浙江大学（生物化学）考研真题及答案与解析1 维生素2 G 蛋白3 卡尔文循环4 必需氨基酸5 线粒体6 终止子7 互补 DNA8 HIV9 原癌基因10 农杆菌二、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。11 酶催化反应时，所产生的能量效应是( )。（A）提高底物的能量水平（B）降低反应的自由能（C）提高反应的活化自由能（D）降低反应的活化自由能12 存厌氧条件下，哪些化合物会存哺乳动物肌肉中积累?( )（A）葡萄糖（B）内酮酸（C）乙醇（D）乳酸（E）乙醛酸13 下列哪些不是三羧酸循环出的催化酶?( )（A）柠檬酸脱氢酶（B）琥珀
2、酸脱氢酶（C）苹果酸脱氢酶（D）顺乌头酸酶（E）NADH 脱氢酶14 SDSAGE 是根据( )来分离蛋白质的。（A）分子量（B）带电性（C）疏水性（D）分子的构象15 关于转录的叙述，正确的是( )。（A）转录只是指合成 mRNA 的过程（B）转录是一种酶促的核苷酸聚合过程（C）逆转录也需要 RNA 聚合酶（D）复制中合成 RNA 引物也是转录（E）逆转录也是 RNA 的合成过程16 有 5-帽子结构的核酸片段是( ) 。（A）原核生物 mRNA（B）真核生物 mRNA（C） hnRNA（D）5SrRNA17 有关 DNA 复制，下列( )说法是不正确的。（A）DNA 复制需要复制起始位点（
3、B） DNA 复制需要 RNA 聚合酶（C） DNA 复制是半保留、半连续的（D）DNA 复制时不需要连接酶18 有关转座子，以下( )说法是不正确的。（A）转座子只通过 DNA 复制或直接切除两种方式获得可移片段，重新插入基因（B）转座子标签可用于基因克隆（C）人类基因组中有 35以上的序列为转座子序列（D）有一类转座子是依赖其他转座子的，称为被动转座子19 DNA 复制对，以下哪个说法正确?( )（A）后随链按 53 方向合成（B）后随链在前导链完成合成后开始合成（C）前导链按 53方向合成（D）复制时需要单链结合蛋白20 (浙江工业大学 2006 年考研试题)自然界中常见的不饱和脂酸多具
4、有反式结构。（A）正确（B）错误21 (浙江工业大学 2006 年考研试题)膜蛋白质最难于完成的运动方式是旋转运动。（A）正确（B）错误22 QTL 指的是数量性状位点，目前还不能克隆 QTL 基因。（A）正确（B）错误23 顺式作用因子是指位于基因上游对基因的表达起到调控作用的 DNA 序列。（A）正确（B）错误24 蛋白质的相互作用可以用酵母单杂交来验证。（A）正确（B）错误25 PCR 反应中镁离子浓度是可以调节的。（A）正确（B）错误26 转基因动植物凶为植入了非自然的基因，因而是不安全的。（A）正确（B）错误27 性染色体上的基因多态性经常被用于进化研究中。（A）正确（B）错误28
5、转录因子一般带有一个 DNA 结合结构域和一个活性结构域。（A）正确（B）错误29 蛋白磷酸酶催化下游蛋白的去磷酸化，对下游蛋白的功能起调控作用。（A）正确（B）错误30 以人的胰岛素为例设计一个确定多肽链中的二硫键的位置的实验。31 设计一个可以将样品中的蛋白质、核酸、脂肪和多糖逐步分离的实验。32 测定 DNA 浓度时，分光光度计的波长一般设置为多少? 在实验中，我们取了 1微升的原始 DNA 样品(双链)，加 29 微升超纯水后制成测试样品。在分光光度计上，你得到的光密度值为 0123。请问原始样品的 DNA 浓度是多少?(10D 的双链DNA=50g mL)33 实验室现有 50 倍的
6、 SSC、10SDS 和 5MNaOH 的母液，请问如何用这些母液配制 250 毫升的 Southern 杂交时用到的一种洗液，该洗液含 1 倍的 SSC、025的 SDS 和 10mMNaOH?34 什么是感受态细胞? 在实验室制备感受态细胞后，需要做哪些实验检测其性能?35 什么是宏基因组，宏基因组的目的如何?简述其关键技术要点。36 什么是非编码 RNA?非编码 RNA 主要有哪些功能? 什么是核糖开关?37 描述利用埃德曼降解(EdmanDegradation)和质谱进行氨基酸测序的方法和原理。38 描述 Km 值的含义。如何测定一个酶的 Km 值?39 举例描述一条反馈抑制的生化反应
7、途径并说明其抑制的分子机制。40 指出糖酵解、三羧酸循环、氧化磷酸化、光合磷酸化的亚细胞定位及它们的生物学意义。2011 年浙江大学（生物化学）考研真题答案与解析1 【正确答案】 维生素(vitamin) 是机体维持正常功能所必需，但在体内不能合成或合成量很少，必须由食物供给的一组低分子量有机物质。维生素种类多，化学结构差异很大，主要按其溶解性分为：脂溶性维生素，包括维生素 A、维生素 D、维生素 E、维生素 K 等；水溶性维生素，包括 B 族(含维生素B1、B 2、B 4、B 6、B 12、维生素 pp、泛酸、叶酸、生物素 )和维生素 C。2 【正确答案】 受体与配体结合后即与膜上的偶联蛋白
8、结合，使其释放活性因子，再与效应器发生反应。Lj 于这些偶联蛋白的结构和功能极为类似，且都能结合并水解 GTP，所以通常称 G 蛋白(G-protein)，即鸟苷酸调节蛋白。 G 蛋白的种类已多达 40 余种，大多数存在于细胞膜上，由 、 三个不同亚单位构成，总分子量为 100kDa 左右。3 【正确答案】 卡尔文循环又称光合碳循环，是一种类似于 Kerbs cycle 的新陈代谢过程，其可使起动物质以分子的形态进入和离开这循环后发生再生。碳以二氧化碳的形态进入并以糖的形态离开卡尔文循环。卡尔文循环是光合作用中暗反应的一部分。反应场所为叶绿体内的基质。卡尔文循环可分为三个阶段：羧化、还原和二磷
9、酸核酮糖的再生。4 【正确答案】 必需氨基酸(essential amino acid)指的是动物自身不能合成或合成速度不能满足人体需要，必须从食物中摄取的氨基酸。对成人来讲必需氨基酸共有赖氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸八种，如果饮食中经常缺少上述氨基酸，可影响健康。对婴儿来说，组氨酸也是必需氨基酸。5 【正确答案】 线粒体(mitochondrion)是真核细胞中由双层高度特化的单位膜围成的细胞器，主要功能是通过氧化磷酸化作用合成 ATP，为细胞各种生理活动提供能量，有细胞“ 动力工厂”之称。线粒体由两层膜包被，外膜平滑，内膜向内折叠形成嵴，两层膜之间有腔，
10、线粒体中央是基质。基质内含有与三羧酸循环所需的全部酶类，内膜上具有呼吸链酶系及 ATP 酶复合体。另外，线粒体有自身的。 DNA 和遗传体系，但线粒体基因组的基因数量有限，因此，线粒体只是一种半自主性的细胞器。6 【正确答案】 一种位于 poly(A)位点下游，长度在数百碱基以内的结构。在原核中，发现终止信号存在于 RNA 真核中的聚合酶已经转录过的序列之中。这种提供终止信号的结构就称为终止子。终止子可分为两类。一类不依赖于蛋白质辅因子就能实现终止作用。另一类则依赖蛋白质辅因子才能实现终止作用。这种蛋白质辅因子称为释放因子，通常又称 p 因子。7 【正确答案】 互补 DNA(complemen
11、tary DNA，cDNA)特指与信使核糖核酸(mRNA)分子具有互补碱基序列的单链 DNA 分子。由 mRNA 通过逆转录产生。可用于分子克隆或在分子杂交中作为细胞 DNA 中特殊序列的分子探针。与基因组DNA 不同，互补 DNA 中不含内含子。8 【正确答案】 HIV 即为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus ，HIV)，它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病毒，属反转录病毒的一种。该病毒破坏人体的免疫能力，导致免疫系统的失去抵抗力，而导致各种疾病及癌症得以在人体内生存，发展到最后，导致艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)。9 【正确答案】 原癌基因(proto
12、-oncogene)是调控细胞生长和增殖的正常细胞基因。当原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时，使细胞过度增殖，从而形成肿瘤。10 【正确答案】 农杆菌(agrobacterium)是生活在植物根的表面，依靠由根组织渗透出来的营养物质生存的一类普遍存在于土壤中的革兰氏阴性细菌，主要有根癌农杆菌和发根农杆菌两种。二、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。11 【正确答案】 D12 【正确答案】 D13 【正确答案】 A,E14 【正确答案】 A15 【正确答案】 B16 【正确答案】 B17 【正确答案】 D18 【正确答案
13、】 A19 【正确答案】 A,C,D20 【正确答案】 B【试题解析】 自然界中常见的不饱和脂酸多具有顺式结构。【知识模块】 脂类21 【正确答案】 B【试题解析】 膜蛋白质最难于完成的运动方式是翻转运动。【知识模块】 脂类22 【正确答案】 B【试题解析】 QTL 指的是数量性状位点，目前已经能克隆 QTL 基因。23 【正确答案】 B【试题解析】 顺式作用因子是指位于基因上游对转录起到调控作用的 DNA 序列。24 【正确答案】 B【试题解析】 DNA 和蛋白质的相互作用可以用酵母单杂交来验证。25 【正确答案】 A26 【正确答案】 B【试题解析】 转基因动植物是用转基凶技术将具体特殊经
14、济价格的外源基因导入动植物体内，不但表达出人类所需要的优良性状(如抗虫，抗病，抗除草剂，抗倒伏，产肉，产蛋量高)，还可以通过蛋白质重新组合得到新的品种。其安全性还存在争议。27 【正确答案】 A28 【正确答案】 B【试题解析】 转录因子一般带有一个 DNA 结合结构域和若干个活性结构域。29 【正确答案】 A30 【正确答案】 首先，对蛋白质全部氨基酸测序；然后，用胃蛋白酶水解胰岛素，得到还连着二硫键的多肽产物。采用对角线电泳分离多肽产物确定二硫键的位置。先进行第一向电泳，将水解产物点在滤纸上，由于不同多肽段的片段大小和电荷的不同，在电泳过程中被分离开。再用甲酸蒸气使肽段的二硫键断裂。再进行
15、第二向电泳，将滤纸旋转 90，其他条件与第一向电泳相同。选取偏离对角线的产物(多肽或寡肽)，即含有二硫键的片段，将其分离出来，分别测序，对照已测的全部氨基酸序列，找出二硫键位置。31 【正确答案】 (1)使用分液法将样品中的脂肪分离出来。先用普通漏斗把要分离的液体注入分液漏斗内，加塞。然后将分液漏斗静置在漏斗架上或铁架台的铁环中。待液体分成两层后，旋开旋塞，使下层液体从漏斗管流下。当下层液体流尽时，立即关闭旋塞，然后再从漏斗上口把上层液体倾倒出来。收集到的上层液体即为脂肪。下层液体继续分离提纯。(2)使用盐析法将蛋白质分离出来。中性盐对蛋白质的溶解度有显著影响，一般在低盐浓度下随着盐浓度升高，
16、蛋白质的溶解度增加，此称盐溶；当盐浓度继续升高时，蛋白质的溶解度不同程度下降并先后析出，这种现象称盐析。将大量盐加到蛋白质溶液中，高浓度的盐离子有很强的水化力，可夺取蛋白质分子的水化层，使之“失水” ，于是蛋白质胶粒凝结并沉淀析出。故在待分离液体中加入大量的盐直至蛋白质析出。得到的上清液待用，得到的蛋白质沉淀使用透析法纯化。蛋白质在用盐析沉淀分离后，混有部分盐，可以采用透析法将蛋白质中的盐除去，即把蛋白质溶液装入透析袋内，用缓冲液进行透析，并不断的更换缓冲液，直至把蛋白中的盐除去得到纯化的蛋白。(3)上一步骤中，液体里含有大量的盐，核酸可以与盐反应生成核酸盐，核酸盐可被有机溶液沉淀。在剩余的待
17、分离液体中加入有机溶液，离心，得到的沉淀中含有核酸盐，上清液中含有多糖。用 70的乙醇洗涤核酸盐沉淀，可以除去多余的盐分，得到一定纯度的核酸。(4)使用透析法提纯上清液中的多糖，即可得到一定纯度的多糖。32 【正确答案】 测定 DNA 浓度时，分光光度计的波长一般设置为 260nm。DNA样品的浓度(g/l)=OD 260x 稀释倍数501000，所以依题意得，原始样品的 DNA浓度为： 012330501000=0 1845(g/l)33 【正确答案】 取一个烧杯，加入 5 毫升 50 倍的 SSC，625 毫升10SDS，05 毫升的 5 M NaOH，加入少量蒸馏水稀释混合液，将混合液转
18、移入250 毫升的容量瓶中，用洗瓶吹洗烧杯壁两到三次，将洗涤后的蒸馏水一并转移入容量瓶中，定容至 250 毫升即可。34 【正确答案】 细胞处于能够吸收外源 DNA 的状态称为感受态，经特殊处理后处于此状态的细胞称为感受态细胞。 为保证宿主细胞是感受态细胞，而且无污染，需作 3 个试验。 取 l 管分装的感受态细胞，不作转化 (比如不加 DNA，但和实验样品平行处理)，将等量的细菌涂布到含抗菌素和不含抗菌素的平板上。含抗菌素的平板应无菌落生长，生长有菌落就表明污染了质粒或抗菌素失效，为区别可从生长的菌落中提取质粒，以鉴别原因。不含抗菌素的平板上应生长了许多菌落，甚至菌落群，反之表明细菌无活力。
19、 第 3 个实验是确定感受态细胞的转化效率。将一定量的完整质粒转化到感受态细胞中，取一部分转化的细菌，涂布到选择培养基上，可用菌落生长单位g DNA ，按下面的方法计算感受态细胞的转化效率： 用01ng 完整的质粒DNA 转化 100l 的感受态细胞，向转化反应液中加入 900l培养液(0 1ng1ml)，让细菌恢复一小段时间(1 小时)。将转化反应用培养液作1：0 的稀释(001ngml)，取其中 100l 的稀释液来涂布 (0001ng DNA/100l) 。如能豸犬得 200 个克隆，转化效率是 2108cfu/g DNA，计算方法如下： 200cfu0001ng=210 5cfung=
20、210 8cfug DNA 转化效率 1106cfugg DNA可满足普通的亚克隆实验；110 7cfug DNA 用于作更复杂的亚克隆，有限量的DNA 的转化，T- 克隆实验；构建文库和突变要求用的转化效率110 8cfug DNA。35 【正确答案】 (1)广义宏基因组是指特定环境下所有生物遗传物质的总和，它决定了生物群体的生命现象。它是以生态环境中全部 DNA 作为研究对象，通过克隆、异源表达来筛选有用基因及其产物，研究其功能和彼此之间的关系和相互作用，并揭示其规律。狭义宏基因组学则以生态环境中全部细菌和真菌基因组 DNA 作为研究对象，它不是采用传统的培养微生物的基因组，包含了可培养和
21、不能培养的微生物的基因，通过克隆、异源表达来筛选有用基因及其产物，研究其功能和彼此之间的关系和相互作用，并揭示其规律。特定生物种基因组研究使人们的认识单元实现了从单一基因到基因集合的转变，宏基因组研究将使人们摆脱物种界限，揭示更高更复杂层次上的生命运动规律，并能有效的开发利用基因资源，更深入的了解物种多样性。(2)宏基因组学是一种以环境样品中的微生物群体基因组为研究对象，以功能基因筛选和测序分析为研究手段，以微生物多样性、种群结构、进化关系、功能活性、相互协作关系及与环境之间的关系为研究目的的新的微生物研究方法。基因组学的研究过程，一般包括从环境样品中提取基因组 DNA，克隆。DNA 到合适的
22、载体，导入宿主菌体，筛选目的克隆等 4 个步骤。在基因组学研究领域中，其研究目标通常是测定单一物种的基因组序列；而在宏基因组学中，则是要测定由多种微生物组成的复杂群体的混合基因组序列。1)样品总 DNA 的提取及基因或基因组 DNA 的富集。提取的样品 DNA 必须可以代表特定环境中微生物的种类，尽可能代表自然状态下的微生物原貌，获得高质量环境样品中的总 DNA 是宏基因组文库构建的关键之一。要采用合适的方法，既要尽可能地完全抽提出环境样品中的 DNA，又要保持较大的片段以获得完整的目的基因或基因簇。2)宏基因组文库的建立。宏基因组文库的构建策略取决于研究的整体目标。偏重于低拷贝、低丰度基因还
23、是高拷贝、高丰度基因要取决于研究的目的是单个基因或基因产物还是整个操纵子及编码不同代谢途径的基因簇。基因文库的建立过程中需要选择合适的克隆载体和宿主菌株。3)宏基因组文库的筛选。由于环境基因组的高度复杂性，需要通过高通量和高灵敏度的方法来筛选和鉴定文库中的有用基因。筛选技术大致可分为四类：基于核酸序列差异分析；基于目的克隆功能的特殊代谢活性； 基于底物诱导基因的表达；基于包括稳定性同位素和荧光原位杂交在内的其他技术。当前宏基因组学技术中最大缺陷是文库的表达问题，模式微生物并不能把所有的宏基因组 DNA 表达出来，降低了表型筛选的效率。宏基因组表型筛选的效率很低，从上万个克隆中一般只能筛选到几个
24、有用的克隆。这表明宏基因组学的提出虽然带来观念上极大的突破，但受限于技术瓶颈，还未在实际工作中产生理论上可能带来的巨大成果。但有理由相信，随着分子生物学技术的发展，宏基因组学研究必然成为今后若干年自然科学研究的一个重要领域。36 【正确答案】 (1)非编码 RNA 是指不编码蛋白质的 RNA，包括rRNA、tRNA、snRNA 、snoRNA 和 microRNA 等多种已知功能的 RNA，还包括未知功能的 RNA。这些 RNA 的共同特点是都能从基因组上转录而来，但是不翻译成蛋白，在 RNA 水平上就能行使各自的生物学功能。(2)现已发现非编码 RNA 在细胞中参与了多项重要的生命活动，其中
25、包括转录调控、RNA 的剪切和修饰、mRNA 的稳定和翻译、蛋白质的稳定和转运、染色体的形成和结构稳定、细胞的发育等方面。1)影响染色体的结构。在昆虫和哺乳动物细胞中发现的序列很长的非编码RNA，参与了基因沉默和染色体结构的改变。2)调控转录。非编码 RNA 通过与转录因子的相互作用而调控转录。例如，在神经元分化中起重要作用的 smRNA，与转录因子 NRSFREST 相互作用，启动神经元特异基因表达。3)参与 RNA 的加工、修饰。例如，核酶主要是通过 RNA 的自我裂解、自我剪接等而实现转录后加工的。4)参与 mRNA 的稳定和翻译调控过程。例如在 RNA 干扰作用中的 siRNA 是一类
26、长度为 2125 nt 的双链 RNA，它能与靶 mRNA 互补配对，结合后导致 mRNA 降解，使基因沉默。还发现 miRNA 也有类似于 RNAi 的机制，能够剪切靶 mRNA。5)影响蛋白质的稳定和转运。tmRNA 有一个同 tRNA 样的区域和 mRNA 样的区域复杂结构，目前仅在细菌中发现，但在细菌中并不普遍存在。tmRNA 既有转运氨基酸的 tRNA 活性，也有编码多肽链的 mRNA 活性。tmRNA 可识别核糖体干扰翻译或使阅读 mRNA 停止(核糖体滑动延宕)。6)在植物适应环境胁迫中的调拉作用。植物的非编码 RNA 在对非生物胁迫的适应性反应中有重要作用，这种作用首先用 mi
27、RNA 生物信息学、靶基因预测和miRNA 克隆的方法，通过拟南芥在非生物胁迫下释放新的 miRNA 而得以证实。在拟南芥进行干旱、盐分、冷冻和 ABA 等胁迫诱导的材料中，得到了 26 种新的miRNA 和 102 种新的 sRNA，说明它们可能在应对上述不良环境中发挥作用。如生长在正常条件下的拟南芥细胞中没有 miR395，而在低硫的胁迫下被诱导；同样，miR399 是在低磷胁迫诱导下产生的。7)在细胞发育和分化中的调控作用。研究发现许多 miRNA 在生物体内有着时序性或组织特异性表达，说明它们在生物的发育和组织分化中可能有着重要的调控作用。对细胞分化的研究证实，miR-181 和 mi
28、R-146 分别能促进造血干细胞向 B 细胞与 T 细胞分化；细胞发育的研究说明，Lsy-6 miRNA 参与了调控线虫左右神经元的不对称性发育，miR-166 则调控叶的不对称性发育。用生物信息学的方法分析 miRNA 调控的靶蛋白，发现 miRNA 还可涉及到神经元的发育，信号通路的调控等方面。8)与肿瘤的发生发展的关系。非编码 RNA 由于能够调控细胞的生长与分化，因此，被认为与癌症的发生发展有关。(3)核糖开关是一类自然界中天然存在的适配子，通过结合小分子代谢物调控基L 大的表达。它位于特定的 mRNA 非编码区，可以不依赖任何蛋白质因子而直接结合代谢物并发生构象变化，在转录和翻译水平
29、上参与调控生物的基本代谢途径。37 【正确答案】 (1)埃德曼降解(Edman 降解)法。1950 年 PEdman 公布了一项新的氨基酸序列的测定技术，即运用上述苯异硫氰酸酯与氨基酸的反应(Edman 反应)。这种技术每次都只是从蛋白质的 N 端解离和鉴定一个氨基酸残基，这是一项使蛋白质序列分析革命化的技术。1967 年 Edman 和 Begg 建成了多肽氨基酸序列分析仪。Edman 降解测序主要涉及耦联、水解、萃取和转换等 4 个过程。1)耦联：使用苯异硫氰酸酯(PITC)在 pH 90 的碱性条件下对蛋白质或多肽进行处理，PITC 与肽链的 N-端的氨基酸残基反应，形成苯氨基硫甲酰 (
30、PTC)衍生物，即 PTC-肽。2)水解： PTC-肽用三氟乙酸处理，N 一端氨基酸残基肽键被有选择地切断，释放出该氨基酸残基的噻唑啉酮苯胺衍生物。3)萃取：将该衍生物用有机溶剂(例如氯丁烷)从反应液中萃取出来，而去掉了一个 N 一端氨基酸残基的肽仍留在溶液中。4)转化：萃取出来的噻唑啉酮苯胺衍生物不稳定，经酸作用，再进一步环化，形成一个稳定的苯乙内酰硫脲(PTH)衍生物，即 PTH-氨基酸。Edman 降解法测序每次只能测定几十个氨基酸残基，所以要测定较大蛋白质的氨基酸序列，需要将其降解为一些肽段，经 HPLC 分离出各个肽段，然后再进行Edman 降解测序。(2)串联质谱法。串联质谱法的原
31、理是根据肽段经惰性气体碰撞诱导裂解产生的一系列有规律的碎片离子之间的质量差来推断氨基酸序列。在电喷雾质谱中最有用的是 y 和 b 系列离子，这是在肽键处断裂产生的离子，该方法使蛋白质及多肽的测序不再受翻译后修饰及纯度的限制，与常用的三级四级电喷雾串联质谱或离子阱电喷雾串联质谱相比较，四级杆飞行时间电喷雾串联质谱(Q-FOF-ESI-MSMS) 具有更高的分辨率、灵敏度和质量准确度。更适合蛋白质及多肽测序，测定结果准确可靠，测序数据不需要复杂的处理，结果容易进行解释。串联质谱测序法是 Edman 降解测序法的最好补充，具有灵敏、快速和样品用量少的优点。实验方法(以电喷雾四级杆正交加速-飞行时间串
32、联质谱仪 O-TOF 为例)：将待测肽段用 01甲酸乙腈，水(50：50)稀释成浓度为 1pmoll 溶液。采用注射泵直接进样，流速为 1lmin，雾化气为氮气，碰撞气体为氩气。Q-TOF2 配备纳升喷雾源，所有测定均在正离子方式下进行。质谱仪用 Glu-fib的串联质谱碎片校正，质量准确度小于 01。源温 80，锥孔电压 50。毛细管电压3000V，TOF 加速电压为 91Kv，MCP 检测器电压为 2200V。收集质谱图数据，用 Micromass 的专用软件 MaxEnt3、Biolynx、MasSeq 分析数据。38 【正确答案】 (1)K m 值等于酶促反应速度达到最大反应速度一半时
33、所对应的底物浓度。K m 是酶的特性常数之一，不同的酶 Km 值不同，同一种酶与不同底物反应 Km 值也不同。K m 值可近似的反映酶与底物的亲和力大小。K m 值大，表明亲和力小：K m 值小，表明亲和力大。可以用双倒数作图法测定一个酶的 Km 值。米氏方程： 其中，v 为反应初速度，微摩尔浓度变化min；V 为最大反应速度，微摩尔浓度变化min；S为底物浓度，molL;K m 为米氏常数，molL 。此方程表明，当已知 km 及 V 时，可确定酶反应速度与底物浓度之间的定量关系。将米氏方程两边同时取倒数得到： 以 1V 对 1S 作图即可得到 Km 的值，如图附录 2-1 所示。 (2)测
34、定方法。 50ml 三角瓶 4 个，每个加入甲醛 5ml 及酚酞 1 滴，用 01M 标准NaOH 滴定至微红色。该组 4 个瓶溶液颜色应当一致，编号。 150ml 反应三角瓶中加入 37 预热 10min 的硌蛋白溶液，胰蛋白酶液，立即混匀，同时计时。取出0min、2min、4min、6min 时的反应液各 10ml 加入中编号的含有甲醛的二角瓶中，加入酚酞 10 滴。用 01M 标准 NaOH 滴定至微弱而持续的微红色。接近终点时，按耗去的 NaOH 毫升数，每 1ml 加酚酞 1 滴，再继续滴定至终点，记下耗去的 01M 标准 NaOH 毫升数。 初速度 v 的测定。以滴定度 (耗去的
35、01M 标准NaOH 毫升数 )对时间作图，得一直线，其斜率即为初速度 v。 以40gL、30gL、20gL、10gL 的硌蛋白溶液为底物，进行操作，分别测出 V40、V 30、V 20、V 10. 以 1v 对 1S作图，求出 Km。39 【正确答案】 大肠杆菌中嘌呤核苷酸生物合成的反馈控制机制如图附录 22 所示。 嘌呤核苷酸生物合成受两个终产物的反馈控制，这两个终产物分别为腺苷酸和鸟苷酸。主要有 3 个控制点。第一个控制点在合成途径的第一步反应，即氨基被转移到 5磷酸核糖焦磷酸上，以形成5 一磷酸核糖胺。此反应是由一种变构酶，即磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶所催化，它可被终产物 IMP(inos
36、ine monophosphate，次黄苷酸，也称肌苷酸)、AMP 和 GMP所抑制。因此，无论是 IMP、AMP 或是 GMP 的过量积累均会导致由PRPP(phosphoribosyl pyrophosphate，磷酸核糖焦磷酸)开始的合成途径中第一步反应受到抑制。另两个控制点分别位于次黄苷酸后分支途径中的第一步反应，当GMP 过量时，GMP 可使催化该步的酶，即次黄嘌呤核苷酸脱氢酶发生变构效应，但仅抑制 GMP 的形成，而不影响 AMP 的形成。反之， AMP 的积累抑制腺苷酸琥珀酸合成酶，从而抑制其自身的形成，而不影响 GMP 的生物合成。40 【正确答案】 (1)糖酵解发生在细胞质中
37、，其意义：紧急供能，如剧烈运动(缺氧)时；生理供能，红细胞、视网膜、睾丸和骨髓； 病理供能，严重贫血、呼吸功能障碍和循环功能障碍。 (2)三羧酸循环发生在线粒体中，其意义： 三羧酸循环是机体获取能量的主要方式。1 个分子葡萄糖经无氧酵解仅净生成 2 个分子ATP，而有氧氧化可净生成 32 个 ATP，其中三羧酸循环生成 20 个 ATP，在一般生理条件下，许多组织细胞皆从糖的有氧氧化获得能量。糖的有氧氧化不但释能效率高，而且逐步释能，并逐步储存于 ATP 分子中，因此能的利用率也很高。 三羧酸循环是糖、脂肪和蛋白质三种主要有机物在体内彻底氧化的共同代谢途径，三羧酸循环的起始物乙酰 CoA，不但
38、是糖氧化分解产物，它也可来自脂肪的甘油、脂肪酸和来自蛋白质的某些氨基酸代谢，因此三羧酸循环实际上是三种主要有机物在体内氧化供能的共同通路，估计人体内 23 的有机物是通过三羧酸循环而被分解的。 三羧酸循环是体内三种主要有机物互变的联结机构，因糖和甘油在体内代谢可生成 -酮戊二酸及草酰乙酸等三羧酸循环的中间产物，这些中间产物可以转变成为某些氨基酸；而有些氨基酸又可通过不同途径变成 -酮戊二酸和草酰乙酸，再经糖异生的途径生成糖或转变成甘油，因此三羧酸循环不仅是三种主要的有机物分解代谢的最终共同途径，而且也是它们互变的联络机构。 (3)氧化磷酸化。原核细胞中氧化磷酸化发生在质膜上，真核细胞则位于线粒
39、体内膜上。氧化磷酸化是指伴随着放能的氧化作用而进行的磷酸化。根据氧化的方式可分为，底物水平磷酸化和电子传递体系磷酸化。氧化磷酸化驱动电子传递，生成 ATP，为生命活动提供能量。 (4)光合磷酸化。光合磷酸化发生在植物细胞叶绿体类囊体膜上。光合作用的实质是光合磷酸化将光能转变成化学能，以用于从 CO2 合成细胞物质。它的意义：把无机物转变成有机物； 将光能转变成化学能，绿色植物在同化二氧化碳的过程中，把太阳光能转变为化学能，并蓄积在形成的有机化合物中；维持大气 O2 和 CO2 的相对平衡。在地球上，由于生物呼吸和燃烧，每年约消耗31510 11 吨 O2，以这样的速度计算，大气层中所含的 O2 将在 3000 年左右耗尽。然而，绿色植物在吸收 CO2 的同时每年也释放出 535x10 11 吨 O2，所以大气中的O2 含量仍然维持在 21。
