1、研究生入学考试生物化学（现代生物技术）历年真题试卷汇编 1 及答案与解析1 (复旦大学 2008 年考研试题)Southemblotting 是用来进行 RNA 杂交的方法。（A）正确（B）错误2 (中山大学 2009 年考研试题)SDS-PAGE 时，不同大小蛋白质分子的电荷质量比值趋近于相同。（A）正确（B）错误3 (中山大学 2007 年考研试题)将凝胶上的 RNA 转移到硝酸纤维膜上的技术，称为SouthernBlot。（A）正确（B）错误4 (中山大学 2007 年考研试题)测定蛋白质在 DNA 上的结合部位常用 Western 印迹的方法。（A）正确（B）错误5 (浙江工业大学 2
2、006 年考研试题)在细菌的细胞内有一类识别并水解外源 DNA 的酶，称为限制性内切酶。（A）正确（B）错误二、填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。6 (复旦大学 2008 年考研试题)PCR 的英文全称是_，是用来进行_，其原理是合理利用了 DNA 的_特性，并使用了耐高温的_来进行DNA 合成。7 (中山大学 2009 年考研试题)通过克隆杂交瘤细胞产生的单一类型抗体分子称为_。8 (中山大学 2009 年考研试题)利用一种分子可专一地结合到固定化配体上的能力，从而将其与混合物中的其他分子分离开来的过程称为_。9 (中山大学 2009 年考研试题)Western 、South
3、ern 和 Northem 印迹技术分别用于检测特定的蛋白质，DNA 和 RNA。Western 印迹使用_为探针，而 Southern和 Northern 印迹使用_为探针。10 (南开大学 2008 年考研试题)DNA 限制性内切酶与_组成细菌的_系统。限制酶可分成_类，实验室中常用的限制酶属于_型。11 (北京师范大学 2006 年考研试题)将点用技术、抗体抗原相互作用和酶促反应结合在一起的生化分析方法是_。12 (上海交通大学 2007 年考研试题)PCR 中文全名是_，其目的是_特定 DNA 序列；循环三步中所需保温温度最高的是_步骤，典型的温度为_，所以 PCR 中所用的 DNA
4、聚合酶必须是 _的。13 (上海交通大学 2007 年考研试题)基因探索五种基本工具(指实验技术方面的重大突破)是 _、_、_和_。14 (上海交通大学 2007 年考研试题)双向纸层析法分离氨基酸：样品(混合氨基酸)中包括 Pro，Ala，Phe，His，Leu，Asp；在获得的层析图谱中，你预期走得更远的是_和_，走得最近的则是_和_，理由是_。显色特殊的点对应的氨基酸是_，理由是_。15 (上海交通大学 2007 年考研试题)用分光光度计测定未知样品的浓度依据的基本原理是(在一定范围内)_和_成正比。分光光度计读数 A 指的是_。各举一个用可见光的紫外光测定样品浓度的实例：_和_(样品名
5、称)。16 (上海交通大学 2006 年考研试题)重组 DNA 技术的三大基础是_、_和_。17 (华南农业大学 2009 年考研试题)分子物质的跨膜运输可分为_运输和_。生物大分子进入细胞一般通过_方式，离开细胞则通过_方式。18 (中科大 2008 年考研试题)_是用标记的 DNA 探针检测 DNA 样品中特定核甘酸序列的实验技术。19 (天津大学 2002 年考研试题)研究 RNA 和_转移和鉴定的技术是_和 Western 印迹法。三、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。20 (南开大学 2009 年考研试题)限制图可以预测( )。
6、（A）限制性核酸内切酶作用后可获得核酸片断的数目和大小（B） DNA 片断编码的氨基酸序列（C）样品中质粒的数量（D）阅读框21 (南开大学 2009 年考研试题)Southemblowing( )。（A）主要用于核酸序列分析（B）需要将 RNA 从琼脂糖凝胶中转移至尼龙膜（C）可用于检测镰刀型细胞贫血基因（D）可用于制备 cDNA22 (南开大学 2008 年考研试题)HIV 病毒携带的逆转录酶具有( )。（A）蛋白酶活性（B） 35 外切活性（C）脱氢酶活性（D）RNase H 活性23 (上海交通大学 2007 年考研试题)M13 噬菌体作为 DNA 克隆的有用的载体并用来对外源 DNA
7、 测序，这是因为( )。（A）性纤行怕存在利于它进入宿主菌（B）它可能杀死宿主菌（C） (经制备改造后)它的环状 DNA 中存在一个多接头区（D）整个多接头区域存在被多种限制酶识别的识别序列各一个（E）对不同的插入 DNA 进行测序需要合成不同的测序引物24 (华南农业大学 2009 年考研试题)氯离子和碳酸氢根离子通过红细胞的机制是( )。（A）主动运输（B）简单扩散（C）通过单向运输体的易化扩散（D）通过反向运输体的易化扩散25 (天津大学 2002 年考研试题)检测 DNA 片段与蛋白质的相互作用常用的技术为( )。（A）限制性图谱分析（B） Southern 杂交（C）凝胶电泳阻抑分析
8、（D）Western 印迹分析26 (中国药科大学 2006 年考研试题)澳大利亚科学家 BarryJMarshal 和JRobinWarren 获得 2005 年诺贝尔奖是由于他们发现了( )。（A）细胞凋亡（B） RNA 干涉（C） PCR 技术（D）分子伴侣（E）幽门螺旋杆菌27 (北京师范大学 2005 年考研试题)RAPD28 (北京师范大学 2005 年考研试题)Westernblot29 (四川大学 2006、2007 年，华东理工大学 2007 年考研试题)DNA 转化(作用)30 (华南农业大学 2009 年考研试题)NorthernbloRing31 (中科大 2008 年
9、考研试题)模式生物32 (中科大 2008、2009 年考研试题)RNA 干扰33 (郑州大学 2007 年考研试题)DNA 限制性内切酶图谱34 (武汉大学 2005 年考研试题)Southernblot35 (中国药科大学 2006 年考研试题)westemblotting36 (西北大学 2004 年、浙江工业大学 2006 年考研试题)限制性内切酶37 (浙江工业大学 2006 年考研试题)核酸酶38 (中山大学 2007 年考研试题)PCR 的特异性主要由哪些因素决定?在实践中可以通过哪些措施来提高特异性?39 (浙江大学 2008 年考研试题)作为生物化学实验室的新手，进入实验室后
10、，首先你需要几周的时间刷瓶子和试管等，然后逐渐开始学习配制各种缓冲液和试剂。接下来你要开始一个蛋白质纯化实验，实验目的是分离一种参与柠檬酸循环的酶即位于线粒体间质的柠檬酸合成酶。根据上述要求请设计这个实验(包括实验的材料，主要的实验设备仪器和药品，蛋白质分离纯化的技术及原理，描述具体的实验步骤，最后对实验可能获得的结果进行分析)。40 (上海交通大学 2007 年考研试题)正确的模板。卵清蛋白(Ovalbumin)是鸡蛋白中的主要蛋白。鸡卵清蛋白基因含有八个外显子，被七个内含子所间隔。现准备用基因工程方法在大肠杆菌(E.coli) 中制备此蛋白，问应当用卵清蛋白对应的 cDNA 还是鸡基因组
11、DNA 作为模板，为什么?此 cDNA(中“c”)的中文及英语名称及其含义是什么?41 (北京师范大学 2006 年考研试题)简述 Sanger 法测定 DNA 序列的基本原理和过程。42 (华东理工大学 2007 年考研试题)已知有一 mRNA 分子，你怎样才能使它翻译出相应的蛋白质? 请简述其过程。43 (华东理工大学 2006 年考研试题)简述由癌组织和癌旁组织两种实验材料揭示肿瘤发生分子机制的研究路线。44 (华东理工大学 2006 年考研试题)在重组 DNA 技术中，外源基因融合表达的优势有哪些?45 (武汉大学 2005 年考研试题)为什么核酸外切酶和限制性内切酶都不能降解噬菌体
12、174DNA。46 (西北大学 2004 年考研试题)简述 Southern、Northem 及 Western 杂交技术的原理及应用。47 (中国药科大学 2006 年考研试题)什么是现代生物技术?主要内容有哪些? 在新药研究和开发中有哪些重要应用(请举 4 方面的例子)?48 (沈阳药科大学 2006 年考研试题)药物质量控制常用的三种生化分析法及其原理。研究生入学考试生物化学（现代生物技术）历年真题试卷汇编 1 答案与解析1 【正确答案】 B【试题解析】 Southem blotting 是用来进行 DNA 杂交的方法。Northern blotting是用来进行 RNA 杂交的方法。【
13、知识模块】 现代生物技术2 【正确答案】 A【知识模块】 现代生物技术3 【正确答案】 B【试题解析】 将凝胶上的 RNA 转移到硝酸纤维膜上的技术是 Northern Blot。Southem Blot 是将 DNA 片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物 (如硝酸纤维素膜、尼龙膜)上，使 DNA 片断固定的技术。【知识模块】 现代生物技术4 【正确答案】 B【试题解析】 测定蛋白质在 DNA 上的结合部位常用的方法是足迹法。【知识模块】 现代生物技术5 【正确答案】 A【知识模块】 现代生物技术二、填空题请完成下列各题，在各题的空处填入恰当的答案。6 【正确答案】 Polymerase cha
14、in reaction 体外扩增 DNA 序列 高温变性，低温退火，适温延伸 Taq DNA 聚合酶【知识模块】 现代生物技术7 【正确答案】 单克隆抗体【知识模块】 现代生物技术8 【正确答案】 亲和层析【知识模块】 现代生物技术9 【正确答案】 抗体蛋白 带有标记的 DNA 和 RNA【知识模块】 现代生物技术10 【正确答案】 甲基化酶 限制修饰 3 【知识模块】 现代生物技术11 【正确答案】 Western blot【知识模块】 现代生物技术12 【正确答案】 聚合酶链式反应 大量扩增 变形 94 耐高温【知识模块】 现代生物技术13 【正确答案】 PCR DNA 测序 限制酶分析
15、印迹技术 核酸固相合成【知识模块】 现代生物技术14 【正确答案】 Phe Leu Asp Lys 流动相是非极性溶剂 非极性 AA 分离度好 所以非极性 AA 远于极性 AA【知识模块】 现代生物技术15 【正确答案】 吸光值 样品浓度 吸光值 600nm 可见光测菌液浓度 260nm 紫外光测 DNA 浓度【知识模块】 现代生物技术16 【正确答案】 限制性内切酶 碱基配对语言 载体【知识模块】 现代生物技术17 【正确答案】 被动 主动运输 胞吞 胞吐【知识模块】 现代生物技术18 【正确答案】 Southem Blot(DNA 分子杂交)【知识模块】 现代生物技术19 【正确答案】 蛋
16、白质、Northem 印迹法【知识模块】 现代生物技术三、不定项选择题下列各题的备选答案中，有一个或多个是符合题意的，请选出所有符合题意的备选答案。20 【正确答案】 A【知识模块】 现代生物技术21 【正确答案】 A【知识模块】 现代生物技术22 【正确答案】 D【知识模块】 现代生物技术23 【正确答案】 A,C,D【知识模块】 现代生物技术24 【正确答案】 D【知识模块】 现代生物技术25 【正确答案】 C【知识模块】 现代生物技术26 【正确答案】 E【知识模块】 现代生物技术27 【正确答案】 RAPD 即随机扩增多态性 DNA 标记，是建立在聚合酶链式反应(PCR)基础之上的一种
17、可对整个未知序列的基因组进行多态性分析的分子技术，其以基因组 DNA 为模板，以单个人工合成的随机多态核苷酸序列(通常为 10 个碱基对)为引物，在热稳定的 DNA 聚合酶(Taq 酶)作用下，进行 PCR 扩增；扩增产物经琼脂糖或聚丙烯酰胺电泳分离、溴化乙锭染色后，在紫外透视仪上检测多态性；扩增产物的多态性反映了基因组的多态性。RAPD 技术现已广泛的应用于生物的品种鉴定、系谱分析及进化关系的研究上。【知识模块】 现代生物技术28 【正确答案】 Western blot 即蛋白质印迹，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生
18、物组织样品进行着色。通过分析着色的位置和着色深度，获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。【知识模块】 现代生物技术29 【正确答案】 DNA 转化(作用)是一个外源 DNA 通过某种途径导入一个宿主菌体内，引起该细菌的遗传特性改变的作用。【知识模块】 现代生物技术30 【正确答案】 Northern blouing 即 Northern 杂交，是利用 DNA 可以与 RNA 进行分子杂交来检测特异性 RNA 的技术，首先将 RNA 混合物按它们的大小和分子量通过琼脂糖凝胶电泳进行分离，分离出来的 RNA 转至尼龙膜或硝酸纤维素膜上，再与放射性标记的探针杂交，通过杂交结果可以对表
19、达量进行定性或定量。1979年，JC.Alwine 等提出将电泳凝胶中的 RNA 转移到叠氮化的或其他化学修饰的活性滤纸上，通过共价交联作用使它们结合，因其方法同 Southern 杂交十分相似，故称之为 Northern 杂交。【知识模块】 现代生物技术31 【正确答案】 模式生物通常指人们在研究生命现象过程中长期、反复作为研究材料的相对简单的物种。由于进化的原因，生命在发育的基本模式方面具有相当大的同一性，因而研究得出的规律，通常可推演到相关的生物物种中，从而加快了对其他各种生物的研究。常见的模式生物有：大肠杆菌(Escherichia coli)、酵母(Saccharomyces cer
20、eVisiae)、线虫(Caenorhabditis elegans)、果蝇(Drosophila melanogaster)、斑马鱼(zebrafish)、拟南芥(Arabidopsis)、小鼠(mouse)等。【知识模块】 现代生物技术32 【正确答案】 RNA 干扰(RNAi)是指在进化过程中高度保守的、由双链 RNA 诱发的、同源 mRNA 高效特异性降解的现象，它是基因转录后沉默的一种方式。由于 RNAi 技术可以特异性关闭或下调特定基因的表达，所以该技术已被广泛用于基因功能研究，并在疾病的基因治疗领域有广阔应用前景。【知识模块】 现代生物技术33 【正确答案】 同一 DNA 用不同
21、的限制限制酶进行切割从而获得各种限制酶的切割位点，由此建立的位点图谱称为 DNA 限制性内切酶图谱。根据单酶切、双酶切和多酶切的电泳分析结果，对照酶切片段大小的数据进行逻辑推理，然后确定各酶切片段的排列顺序和各酶切位点的相对位置。【知识模块】 现代生物技术34 【正确答案】 southern blot 是 E.Southern 建立的一种用来鉴定具特定序列的DNA 的方法。该方法是利用硝酸纤维素膜能同单股 DNA 而不是双股 DNA 强力结合的特点，在双股 DNA 凝胶电泳后，使其变性转变成单股，然后将一片浓盐溶液浸湿过的硝酸纤维索膜铺盖在凝胶上，再用多层吸水纸压在膜上，迫使凝胶中的DNA 分
22、子随液体吸附到膜上(用电转移法亦可达到同样的目的 )，于是单股 DNA 结合到硝酸纤维素膜上。经适当处理后，用少量的含 32P(或其他标记物) 的、能与靶DNA 序列互补的单股 DNA 或 RNA 探针杂交，x 光片进行放射性自显影，能与探针互补的靶 DNA 分子的位置即可在冲洗后的胶片上显示出来。【知识模块】 现代生物技术35 【正确答案】 蛋白质印迹，是利用抗体作探针来检测已转移到固相支持物上的靶蛋白。一般先用待测蛋白免疫动物 A，获得多克隆或单克隆抗体作为第一抗体与靶蛋白反应，再用另一种动物的抗动物 A 的免疫球蛋白抗体 (放射性标记或酶标记)作为第二抗体。通过放射自显影或特异性酶促反应
23、对固相支持物上的靶蛋白进行检测。【知识模块】 现代生物技术36 【正确答案】 这类酶能在特定核苷酸序列处切开磷酸二酯键，使双链 DNA 产生裂口。是细菌水解外源 DNA，防止外源 DNA 对细菌基因组干扰的重要酶。II 类限制性内切酶由于其水解部位有高度的特异性，在分子生物学中被广泛用作工具酶。【知识模块】 现代生物技术37 【正确答案】 核酸酶是指作用于核酸分子中的磷酸二酯键的酶，分解产物为寡核苷酸或核苷酸，根据作用位置不同可分为核酸外切酶和核酸内切酶。【知识模块】 现代生物技术38 【正确答案】 PCR 特异性的主要决定因素包括：引物与模板 DNA 特异正确的结合。引物与模板的结合及引物链
24、的延伸是遵循碱基配对原则的，是特异性的关键因素；碱基配对原则； Taq DNA 聚合酶合成反应的忠实性：聚合酶合成反应的忠实性及 Taq DNA 聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行，结合的特异性大大增加，被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度；基因的特异性与保守性：通过选择特异性和保守性高的靶基因区，其特异性程度就更高。 在实践中可以通过如下措施来提高特异性：升高退火温度可增加引物与模板结合的特异性；缩短退火和延伸时间，可减少错误引发及多余的 DNA 聚合酶分子参与酶促延伸的机会；降低引物和酶的浓度也可以减少错误引发，尤其能减少引物聚体的引发；改变 Mg2
25、+的浓度可进一步提高扩增的特异性，其机制可能是通过提高反应的严谨性，直接影响聚合酶的活性；引物设计的特异性；减少循环次数，太多的循环数将会增加非特异性产物的产量；改进方法以提高特异性：热启动，这能使引物在较高温度下与模板退火，提高了反应的严谨性，使扩增更特异；采用两对引物即外引物和为引物进行扩增以提高其特异性。【知识模块】 现代生物技术39 【正确答案】 步骤如下：(1)取 20kg 新鲜牛的心脏，置于冰上，使用含有 02M 蔗糖，pH 为 72 的缓冲液，匀浆(均质化) 。因为心脏的心肌细胞相对于其他组织线粒体含量较高，而柠檬酸合成酶在组织中的相对含量很低。低温是为了防治酶变性。维持 72
26、左右的pH 有利于溶液偏离酶的等电点，增强酶自身的缓冲能力，保持酶溶液的稳定性。(2)通过超速离心、膜分离或者超滤等方法获得较纯的组织细胞中的线粒体组分(3)沉淀经溶解和透析后，进行分子量排阻层析分离。通过 280nm 紫外吸收收集各个分离的组分。(4)将上一步收集的组分进行离子交换层析分离。根据蛋白质分子所带电荷的差异和分子极性的不同进行离子交换吸附。(5)为了获得能够测序 (氨基酸) 的高纯度的蛋白质并且进一步特征分析，需要使用双向电泳进行纯化。双向电泳双结合了等电聚焦及 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，其原理是第一向进行等电聚焦，利用两性电解质在聚丙烯酰胺凝胶上形成 pH 梯度，根据蛋白质的
27、等电点不同对蛋白质进行分离。将所得的凝胶条取出，用含有 SDS的缓冲液进行处理，然后放在 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶上，使其固定并与浓缩胶连接。进行第二向 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳，根据蛋白质分子大小进行分离。这样各个蛋白质根据等电点和分子大小的不同而被分离，分布在二维图谱上。根据大小和等电点即可分离得到柠檬酸合成酶。【知识模块】 现代生物技术40 【正确答案】 (1)应用 cDNA。因为鸡卵清蛋白基因含有八个外显子，被七个内含子所间隔，而大肠杆菌中不含有能够正确剪切鸡基因组 DNA 的酶类，所以如果使用鸡基因组 DNA 作为模板，将无法获得正确翻译的卵清蛋白。而 cDNA 是经过正确
28、剪切凭借的 DNA 链，不含有内含子，将其作为模板转入大肠杆菌中能够正确表达出卵清蛋白。(2)中文名称为互补 DNA，英语名称为 complementary。DNA，是一种利用逆转录酶，以 RNA(通常是 mRNA)为模板做成的复制品，经常用来将真核生物的基因(以 mRNA 形式)复制到原核生物细胞中。若一个 cDNA 含有许多来自不同基因的mRNA，称为 cDNA 基因库(cDNA library) 。另外也可制成只含单一 mRNA 的cDNA。【知识模块】 现代生物技术41 【正确答案】 1977 年 Sanger 对：DNA 酶法测序技术作了重要改进，提出了“终止法”，其原理是利用 2，
29、 3-双脱氧三磷酸苷(2，3-ddNTP)来终止 DNA 的复制反应。大肠杆菌 DNA 聚合酶在复制过程中催化多核苷酸链的延伸，单核苷酸是接在延伸链的 3一 OH 上，所以，如果掺入的底物中有 2，3-ddNTP，延伸反应即终止。 过程：设计四组反应，每组反应中都含有正常的四种脱氧核糖核苷酸dNTP(其中一种为 32p-标记)、单链 DNA 模板( 即待测的 DNA)、引物、DNA 聚合酶I。另外，各组反应加入一种 2，3-ddNTP。反应结果，在加入 2，3-ddNTP 的反应中，凡碰到需要 dNTP 的时候，如果掺入的不是 dNTP，而是 2，3-ddNTP 时，链延伸反应即终止。其他各组
30、反应结果同理，用凝胶电泳分析这四组反应的产物，即可从放射自显影上读出 DNA 的序列。 1975 年，Sanger 提出 DNA 测序的新策略，即设法获得一系列多核苷酸片段，使其末端固定在一种核苷酸，然后通过测序片段的长度来推测核苷酸的序列。 Sanger 于 1975 年设计的 DNA 快速测序法称为“加减法”。过程是：以单链 DNA 为模板，加入适当的引物，四种脱氧核糖核苷酸 dNTP和。DNA 聚合酶使合成反应尽可能随机进行，合成各种长度的产物片段，然后从反应体系中除去 4 种 dNTP，并将反应物分成 8 组， 4 组用于加法系统，4 组用于减法系统。加法系统每组只加 A、G、C、T
31、和一种 dNTP，减法系统每组加 3 种dNTP(分别减去 A、G、C、T，一种 dNTP)。在加法系统中，DNA 聚合酶的 35外切酶将除该核苷酸外所用 3末端核苷酸都水解掉，于是 3末端核苷酸都变成了该核苷酸。在减法系统中，DNA 聚合酶能够把片段继续合成下去，直到遇上所缺的核苷酸才停止，这就得到了都在所缺核苷酸前一个核苷酸结尾的片段。最后，将各组样品都进行凝胶电泳，从放射自显影的图谱上可以推测出 DNA 的核苷酸序列。【知识模块】 现代生物技术42 【正确答案】 以该 mRNA 分子为模板，进行反转录，在逆转录酶的催化下按照碱基互补配对原则合成互补 DNA(cDNA)，再合成双链 eDN
32、A，将 eDNA 扩增后与载体连接形成重组载体，将重组载体转入受体细胞进行转化，筛选克隆，进行基因表达。【知识模块】 现代生物技术43 【正确答案】 由于癌组织和癌旁组织的主要区别在于原癌基因与癌基因的序列差异及表达差异，因此可以采用差示法进行对比研究。大致过程包括：分别从两种组织中提取 mRNA，RT-PCR 扩增，将癌组织来源的 cDNA 挂在层析介质上，癌旁组织来源的 cDNA 进柱分离，将癌旁组织来源的 cDNA 挂在层析介质上，癌组织来源的 cDNA 进柱分离，两种分离流分 DNA 序列分析。【知识模块】 现代生物技术44 【正确答案】 在 DNA 重组技术中，外源基因采取融合表达的
33、优势包括： 表达产物稳定性高：特别是分子量较小的多肽；表达产物易于分离：利用受体蛋白成熟的抗体、配体、底物进行亲和层析，可以快速获得纯度较高的产物；表达产物的表达产率高；表达产物溶解性好：表达产物能在胞内形成良好的空间构象，且大多具有水溶性；表达产物需要回收：表达产物需要裂解和进一步分离才能获得目的产物。【知识模块】 现代生物技术45 【正确答案】 因为噬菌体 174174 DNA 是单股环状结构，没有游离的末端。核酸外切酶是从游离的 3一端或 5-端开始降解核苷酸链，而限制性内切酶识别与降解的部位位于双联内，且呈双重旋转对称的回文结构。【知识模块】 现代生物技术46 【正确答案】 South
34、em 杂交首先用合适的限制性核酸内切酶将：DNA 切割，进行电泳分离后，利用干燥的吸水纸产生毛细管作用，使液体经过凝胶，从而使DNA 片段由液流携带从凝胶转移并结合在固体支持物上(近年常用转移电泳将DNA 片段从凝胶转移到固体支持物上)，然后用合适的探针在固体支持物上进行分子杂交，再从凝胶的相应位置确定目标 DNA 片段的大小，或回收目标 DNA 用于进一步的研究工作。Northern 印迹的原理同 Southern 印迹相比有两点不同：转移的对象不同。Northern 印迹是将 RNA 变性及电泳分离后，将其转移到固相支持物上的过程；RNA 电泳前不需像 DNA 那样进行酶切，也不能用碱变性
35、，因为碱变性会导致RNA 的降解。Southem 和 Northem 印迹杂交都属于核酸分子杂交。核酸分子杂交技术可应用于基因克隆的筛选和酶切图谱制作，基因组中特定基因序列的定量和定性检测、基因突变分析以及疾病的诊断等方面。Western 印迹是将经电泳分离的蛋白质从凝胶转移到一定的支持膜上，再用该蛋白质的标记抗体检测，从膜上的区带确定目标蛋白质在凝胶上的位置。在基因表达研究中，若能找到目标蛋白的抗体或抗血清，可以用这种办法确定目标基因是否表达，并大致确定其表达量。还可以在目标基因的上游或下游插入一段市场上已有相应抗体供应的短肽的基因，表达的蛋白质 N 端或 C 端有短肽存在，经 Wester
36、n 印迹，可以分析目标蛋白的表达状况。【知识模块】 现代生物技术47 【正确答案】 现代生物技术通常被称为生物工程，是指对生物有机体在分子、细胞或个体水平上通过一定的技术手段进行设计操作，以改良物种质量和生命大分子特性或生产特殊用途的生命大分子物质等。一般包括基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程，其核心内容主要包括重组 DNA 技术和单克隆抗体技术。现代生物技术在新药研发中已发挥出不可忽视的重要作用。如重组多肽类激素药物的研制(重组胰岛素、重组人生长激素等)；重组细胞因子干扰素类药物(rhIFN-2a、rhIFN-2b 等)；反义药物的研发(福米韦森是全球获准上市的第一个反义药物)；基因工程疫
37、苗的研制(治疗性乙肝疫苗、治疗性肿瘤疫苗等)。【知识模块】 现代生物技术48 【正确答案】 (1)免疫分析法。抗原和抗体的沉淀反应可在体外进行，借此可用于鉴定相应的抗原性物质。基于抗原、抗体特异结合反应发展起来的分析方法，常见的有免疫扩散法、免疫电泳法、放射免疫法与酶联免疫测定法。(2)电泳分析法。电泳是指带电质点在电场中向电荷相反的方向移动的现象。各种物质由于所带净电荷的种类和数量不同，因而在电场中的迁移方向和速度不同。利用物质的这种性质可以对物质进行分离和鉴定。(3)酶法分析。酶法分析的原理是借助酶促反应(包括单酶或多酶偶联反应)对酶或酶所作用的底物或参与酶促反应的辅酶、激动剂等进行定性、定量分析。【知识模块】 现代生物技术
