1、1专题二 微生物的培养与应用注 意 事 项 ：1 答 题 前 ， 先 将 自 己 的 姓 名 、 准 考 证 号 填 写 在 试 题 卷 和 答 题 卡 上 ， 并 将准 考 证 号 条 形 码 粘 贴 在 答 题 卡 上 的 指 定 位 置 。2 选 择 题 的 作 答 ： 每 小 题 选 出 答 案 后 ， 用 2B 铅 笔 把 答 题 卡 上 对 应 题 目的 答 案 标 号 涂 黑 ， 写 在 试 题 卷 、 草 稿 纸 和 答 题 卡 上 的 非 答 题 区 域 均 无 效 。3 非 选 择 题 的 作 答 ： 用 签 字 笔 直 接 答 在 答 题 卡 上 对 应 的 答 题 区
2、域 内 。 写在 试 题 卷 、 草 稿 纸 和 答 题 卡 上 的 非 答 题 区 域 均 无 效 。4 考 试 结 束 后 ， 请 将 本 试 题 卷 和 答 题 卡 一 并 上 交 。一、选择题（本题包括 20 小题，每小题 3 分，共 60 分，每小题只有一个选项最符合题意）1关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是（ ）A将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯溶解B等培养基冷却 50左右时进行倒平板C待平板冷却凝固 510 分钟后将平板倒过来放置D操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌2现有两种固体培养基，已知其配制时所加的成分如下表：用这两种培养基分别去分离土壤中的两种微生物，
3、它们适于分离的是（ ）A甲培养基适于分离酵母菌；乙培养基适于分离真菌B甲培养基适于分离异养型自生固氮菌；乙培养基适于分离自养型自生固氮菌C甲培养基适于分离自养型自生固氮菌；乙培养基适于分离异养型自生固氮菌D甲培养基适于分离异养型共生细菌；乙培养基适于分离异养型共生固氮菌3从混杂的微生物群体中选择优良的单一纯种的方法不包括（ ）A根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基B根据微生物对特殊营养物的需求，在培养基中增减不同的特殊营养物C根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素D根据微生物耐热性的不同，利用高温、高压消灭不需要的杂菌4微生物的接种技术有很多，有关常用的两种微
4、生物接种方法的叙述不正确的是（ ）A只能应用于固体培养基接种B都可以用于微生物的计数C接种培养后均可获得单菌落D接种用具都需进行严格灭菌5无菌技术包括以下几个方面的叙述，其中错误的是（ ）A对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌B将用于微生物培养的培养皿、接种用具和培养基等进行灭菌C为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行D实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触6培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（ ）化学消毒 灼烧灭菌 干热灭菌 紫外线灭菌 高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法A B C D7下列关于微生物的培养和应用
5、的叙述正确的是（ ）A配制培养基时应先调 PH 后灭菌B在培养基中加入青霉素可抑制真菌而促进细菌生长C培养基中加入伊红美蓝试剂，长出的菌落为大肠杆菌菌落D向液体培养基中通入氧气能促进破伤风杆菌的生长8下图为实验室培养和纯化大肠杆菌过程中的部分操作步骤，下列说法正确的是（ ）2A制备步骤使用的培养基过程是先灭菌再调 pHB步骤操作时只需要在接种前和划线结束后灼烧灭菌C操作到的过程中，接种环共灼烧处理了 5 次D接种结束后，将倒置培养，皿底上标注菌种及接种日期等信息9下图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素细菌的示意图，有关叙述错误的是（ ）A在配制步骤、的培养基时，应先调 pH 值后高压蒸汽灭菌
6、B步骤采用涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入尿素C步骤挑取中不同种的菌落分别接种，比较细菌分解尿素的能力D步骤纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落10如图是微生物平板划线示意图,划线的顺序为 1、2、3、4、5。下列叙述正确的是（ ）A划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上B在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌C接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的D第 1 区和第 5 区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数11下列有关微生物培养的叙述，错误的是（ ）A获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染B平板划线法和稀释涂布平板法都可对微生物进行计数
7、C培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌D倒置平板可防止培养皿盖上的冷凝水滴落，造成污染12下列检测某熟制食品中大肠杆菌是否超标的实验操作，不合理的是（ ）A待检测食品需要经过灭菌操作后取样检测B应设置未接种的培养基，作为实验的对照C用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数D接种后将培养皿倒置并在适宜温度下培养13做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是（ ）A高压蒸汽灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖B倒平板时，应将打开的皿盖放到实验操作台一边，以免培养基溅到皿盖上C为防止污染，接种环经火焰后应趁热快速挑取菌落D实验室培养硝化细菌时，培养基无需加入有机碳源14为了保持菌种
8、的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是（ ）A对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B临时保藏的菌种一般是接种到试管的固体斜面培养基上C临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D对于需要临时保存的菌种，可以采用4 低温保藏的方法15在分解尿素菌的分离和鉴定中，对先后用到的两种培养基，叙述正确的是（ ）A加入唯一氮源作为选择培养基，加入刚果红指示剂作为鉴别培养基。B加入唯一氮源作为鉴别培养基，加入酚红指示剂作为选择培养基。C加入酚红指示剂作为鉴别培养基，加入唯一氮源作为选择培养基。D加入刚果红指示剂作为选择培养基，加入唯一碳源作为鉴别培养基。16农作物秸秆等纤维质原料经加工可制成燃料乙醇
9、，从而减少了对石油资源的依赖，下图为生产燃料乙醇的简要流程，据图分析错误的是（ ）A要得到微生物 A，最好选择富含纤维素的土壤采集土样B图中过程常用的微生物 B 是酵母菌C微生物 A 和微生物 B 可利用的碳源相同D可用纤维素酶制剂代替微生物 A 起作用17下列有关“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数实验”的叙述，正确的是（ ）3A分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，可以用于制取土壤稀释液B测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围不同C测定土壤样品中的活菌数目，常用显微镜直接计数法D接种土壤微生物稀释液时，平板划线法可以采取连续划线的方法使微生物
10、均匀分布18下列关于刚果红染色法的说法中，正确的是（ ）A先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，不需用氯化钠溶液洗去浮色B倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入 lmlCR 溶液后加入 100ml 培养基C培养基中出现透明圈的原因是因为纤维素被分解为葡萄糖导致的D倒平板时就加入刚果红，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解形成透明圈19某生物兴趣小组以带有落叶的表层土壤(深 5cm 左右)为实验材料，研究土壤微生物在适宜温度下的分解作用，对土壤处理情况见下表，与此有关的叙述不正确的是（ ）A探究的问题可以是不同土壤湿度条件下，土壤微生物对落叶的分解作用B预期结果是 1、3 组的落叶不被分解，
11、2、4 组中的落叶被不同程度的分解C为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理D该实验的自变量为土壤是否灭菌处理20为了验证土壤中的微生物可以分解淀粉，取两只烧杯甲和乙，都放入等景的淀粉溶液 20mL，甲中加入 30mL 制备好的土壤浸出液，乙中放入等量的蒸馏水，在适宜的温度下放罝 7 天。然后从甲中取出等量的溶液放入 A1、A 2试管，从乙中也取出等量的溶液放入试管 B1、B 2，在 A1、B 1中加入碘液，在 A2和 B2中加入斐林试剂并加热。下列对该实验结果的预测正确的是（ ）AA 1和 B1都会有蓝色出现，而且颜色深浅一致BA 2有砖红色沉淀出现，B 2无砖红色沉淀出
12、现CA 2和出都有砖红色沉淀出现D以上结果都不正确二、非选择题（本题包括 3 小题，每空 2 分，共 40 分）21（12 分）食品卫生是关系千万人健康和生命的大事，为检测某食品厂乳制品中总菌量和大肠杆菌量是否超标，常采用微生物培养的方法，请回答下列问题：(1)应配制哪种物理性质的培养基？_，在接种之前，一般对培养基采取_方法灭菌，灭菌后才能保证培养得到的菌落全部来自待测样品。培养基中是否应该加入全部五大类营养要素？为什么？_。(2)培养基制备好以后，应该将一定量的_的稀释液接种到培养基上，并将接种好的培养基在_等条件下培养。(3)待培养一定时间后，对培养基中的菌落进行计数，以得出总菌量的数据
13、，若要得到大肠杆菌量的数据，应该在配制培养基时向培养基中加入_试剂。22（14 分）幽门螺杆菌(Hp)感染是急慢性胃炎和消化道溃疡的主要致病因素，其不良预后是胃癌。据研究发现，目前我国有超过 50%人感染了 Hp 病菌。Hp是微需氧菌，环境氧要求 5%8%，在大气或绝对厌氧环境下均能生长，Hp 的尿素酶极为丰富，尿素酶催化尿素水解形成“氨云”保护细菌在高酸环境下生存。在患者体内采集样本并制成菌液后，进行分离培养。实验基本步骤如下：配制培养基灭菌、倒平板X培养观察。请回答：在配制培养基时，要加入尿素和酚红指示剂，这是因为 Hp 含有_，它能以尿素作为氮源；若有 Hp，则菌落周围会出现_色环带。步
14、骤 X 的操作如下图所示：微生物接种的方法很多，但都要注意_；上图所示方法为_。4图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是_。在培养时，需将培养皿_并放在恒温培养箱中,否则将可能导致_。23（14 分）人工瘤胃模仿了牛羊等反刍动物的胃，可用来发酵处理秸秆，提高秸秆的营养价值。为了增强发酵效果，研究人员从牛胃中筛选纤维素酶高产菌株，实验流程示意图如下图所示。请回答下列问题：（1）步骤 A 是_，可以通过此步骤增加_。（2）研究人员用_法筛选纤维素分解菌，这种方法能够通过颜色反应直接对微生物进行筛选。培养基中透明圈的大小与纤维素酶的_有关。（3）在涂布平板时，取少量菌液（不超过
15、 0.1mL）滴加到培养基表面，菌液量不宜过多的原因是_。（4）研究人员用筛选到的纤维素酶高产菌株甲和乙，在不同 pH 条件下进行发酵，测得发酵液中酶活性的结果见下表，推测菌株_更适合用于人工瘤胃发酵，理由是_。注：纤维素酶活性用 U 表示。12018-2019 学 年 高 一 下 学 期 专 题 二 训 练 卷生 物 （ 一 ） 答 案1. 【答案】D【解析】将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热，A 正确；待培养基冷却至 50左右时，在酒精灯火焰附近倒平板，B 正确；待平板冷却凝固约 510min 后，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上，C 正确；制备牛肉膏蛋白胨固体
16、培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，D 错误。2. 【答案】B【解析】根据所提供的甲、乙两种培养基的成分分析，甲培养基有葡萄糖、淀粉作为有机碳源，适于分离异养型微生物；乙培养基无有机碳源，适于分离自养型微生物。两者都不含氮源，说明这两种培养基都适于分离自生固氮菌。3. 【答案】D【解析】根据微生物对碳源需要的差别，使用含不同碳源的培养基，例如培养自养型的菌，在培养基中不需加入碳源，A 正确；不同的微生物需要不同的生长因子，根据需要的菌可以在培养基中加入相应的生长因子进行分离，B 正确；根据微生物对抗生素敏感性的差异，在培养基中加入不同的抗生素，C 正确；高温高压会将所有细菌（包括需要
17、的菌类）一起杀死，D 错误。4. 【答案】B【解析】将微生物接种到固体培养基中的方法通常为平板划线法和稀释涂布平板法，A 正确；稀释涂布平板法接种可以形成单菌落，所以常用来进行微生物的计数，平板划线法常用来筛选分离微生物，B 错误；两种接种方法在培养基中形成单个菌落，C 正确；为防止杂菌污染，接种工具需要灭菌后使用，D 正确。5. 【答案】A【解析】对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行消毒和灭菌，A 错误。为保证不被杂菌污染，应将培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌，B 正确。酒精灯火焰附近可以形成一个无菌区，为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行，C 正确。周围物品可
18、能会含有杂菌，为防止污染，实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触，D 正确。6. 【答案】A【解析】实验操作者的双手用化学药剂进行消毒，用酒精擦拭双手；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；空气可用紫外线消毒；培养基用高压蒸汽灭菌；巴氏消毒法用于牛奶及其制品的消毒，不会破坏其营养成分；综合以上分析，正确的顺序为，A 正确。7. 【答案】A【解析】配制培养基应先调 pH 再进行灭菌，否则会被再次污染，A 正确；青霉素能够干扰细菌细胞壁的合成，在培养基中加入青霉素可抑制细菌而促进真菌生长，B 错误；伊红美蓝是专一鉴定大肠杆菌的指示剂，利用伊红美蓝固
19、体培养基可以鉴定大肠杆菌是否存在，C 错误；破伤风杆菌的代谢类型属于异养厌氧型，向其培养基中通入氧气会抑制其生长，D 错误。8. 【答案】D【解析】步骤表示倒平板，在倒平板之前是先调 pH 再灭菌，A 错误；步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行，防止被杂菌污染，同时在接种前和每次划线结束后都要灼烧灭菌，B 错误；接种环在每次接种前和接种结束后都要通过灼烧来灭菌，所以完成步骤中 5 次划线操作前都要灼烧灭菌，接种结束后还需灼烧灭菌 1 次，防止造成污染，由此可见，完成步骤共需灼烧接种环 6 次，C 错误；图中操作结束后，为了防止培养皿盖上的水珠滴落到培养基造成污染，需要将培养皿倒置培养，且同时在培养
20、基皿底标注菌种及接种日期等信息，D 正确。9. 【答案】B【解析】在配制步骤、的培养基时，应先调 pH 值后再进行髙压蒸汽灭菌，A 正确；要筛选出能高效分解尿素细菌，所选用的培养基要以尿素为唯一氮源，但牛肉膏和蛋白胨中都含有氮源，因此步骤所用的培养基中不能含有牛肉膏蛋白胨，B 错误；步骤挑取中不同种的菌落分别接种，形成相互对照试验，比较细菌分解尿素的能力，C 正确；步骤纯化分解尿素的原理是将聚集的细菌分散，可以获得单细胞菌落，D 正确。10. 【答案】C【解析】划线时皿盖打开一条缝，右手于火焰近处將接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖，接种环不应划破培养基表面，A 错误；在每次划线
21、前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，但培养基2只是在接种前进行灭菌即可，B 错误；接种环不应划破培养基表面，否则不能分离得到单菌落，C 正确；划线时注意不要将最后一区 5 的划线与第一区 1 相连，D错误。11. 【答案】B【解析】微生物培养中，获得纯净培养物的关键是防止杂菌污染，A 正确；利用稀释涂布平板法接种微生物可以形成单菌落，常用来进行微生物的计数，但利用平板划线法接种微生物不易分离出单菌落，不能对微生物进行计数，常用来筛选分离微生物，B 错误；常用高压蒸汽灭菌法对培养基进行灭菌，C 正确；倒平板后，需要将培养皿倒置，以防止培养基蒸发冷凝成的水滴入培养基而造成污
22、染，D 正确。12. 【答案】A【解析】待检测食品灭菌后会将大肠杆菌杀死，则不能检测大肠杆菌是否超标，A 错误；应设置未接种的培养基，作为实验的对照，B 正确；用稀释涂布平板法接种计数大肠杆菌的活菌数，C 正确；接种后应该将培养皿倒置，并在适宜温度下培养，D 正确。13. 【答案】D【解析】高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A 错误。倒平板过程中不能将培养皿的皿盖完全打开，B 错误。接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C 错误。硝化细菌就能够制造有机物，培养基无需加入有机碳源，D 正确。14. 【答案】D【解析】对于频繁使用的
23、菌种，可以采用临时保藏的方法，在固体斜面培养基上菌落长成后，放入冰箱低温保藏，A、B 正确；临时保藏的菌种由于频繁转种，容易被污染或产生变异，C 正确；对于需要临时保存的菌种，可以采用 4 低温保藏的方法，D 错误。15. 【答案】C【解析】尿素分解菌能在以尿素为唯一氮源的培养基中生长，其合成的脲酶能够将尿素分解为氨使酚红指示剂呈红色，用加入酚红指示剂的培养基可筛选出分解尿素的细菌，C 正确。16. 【答案】C【解析】根据图解可知，微生物 A 的碳源是纤维素，故要想获得微生物 A 最好选择富含纤维素的土壤采集，A 正确；图中过程表示生产乙醇的过程，常用微生物是酵母菌，B 正确；微生物 A 所用
24、碳源为纤维素，微生物 B 所用碳源为纤维素降解物，C 错误；微生物 A 之所以能利用纤维质原料是因为其含有纤维素酶，故可用纤维素酶制剂代替微生物 A 起作用，D 正确。17. 【答案】B【解析】分离土壤中的尿素分解菌实验中，采集的土样经高温灭菌后，其中的微生物全部死亡，不能得到尿素分解菌，A 错误；土壤中各类微生物的数量不同，为了获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，可见，测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释度范围也不同，B 正确；测定土壤样品中的活菌数目，常用菌落计数法，一般不常用显微镜直接计数法，C 错误；接种土壤微生物稀释液时，可借助平板划线法
25、，通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，但并不是使微生物均匀分布，D 错误。18. 【答案】D【解析】常用的刚果红染色法有两种：一是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应，此种方法需用氯化钠溶液洗去浮色，二是在倒平板时就加入刚果红，此种方法则不需要用氯化钠溶液洗去浮色，A 错误；倒平板时就加入刚果红，可在培养皿中先加入 10mg/mLCR 溶液，灭菌后，按照每 200mL 培养基加入 1ml 的比例加入 CR 溶液，B 错误；在含有纤维素的培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中的纤维素形成红色复合物，当纤维素被纤维素酶分解后，刚果红-纤维素的复
26、合物就无法形成，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心的透明圈，C 错误；倒平板时就加入刚果红，由于有些微生物能降解色素，长期培养刚果红有可能被其他微生物分解而形成透明圈，D 正确。 19. 【答案】D【解析】实验组 2 组合 4 组可以形成对照，变量是土壤的湿润程度，来研究土壤微生物对落叶的分解作用，A 正确；1 组和 3 组由于没有微生物，落叶不被分解，2 组和 4 组由于有微生物，落叶不同程度的被分解，B 正确；为了控制实验中的无关变量，作为实验材料的落叶也应进行灭菌处理，消除微生物的影响，C 正确；该实验的变量有两个，一个是灭菌、不灭菌，一个是湿润、不湿润自变量3是灭菌、不灭菌，在湿润条件
27、下 1、2 形成对照，在干燥条件下 3、4 形成对照，所以 1、3 分别是两组对照实验的对照组，D 错误。20. 【答案】B【解析】斐林试剂是鉴定还原糖的，土壤中会含有些微生物能产生分解淀粉的淀粉酶，淀粉水解后是还原糖，所以 A2会出现砖红色，其它的都没有砖红色沉淀出现，B 正确。碘液是鉴定淀粉的，A 1和 B1都会有蓝色出现，但 B1的蓝色应比较深，A 错误。B 2没有砖红色沉淀出现，C 错误，D 错误。21. 【答案】(1)固体 高压蒸汽灭菌 是，培养基应该能保证各种微生物都能生活，才能使实验数据准确 (2)待测样品(乳制品) 无菌、适宜的温度 (3)伊红和美蓝【解析】 (1)微生物的培养
28、应该用固体培养基进行培养；在接种之前，一般对固体培养基采取高压蒸汽灭菌的方法灭菌。培养基中应该加入全部五大类营养要素，即水、无机盐、碳源、氮源和生长因子。因为只有这样，才能保证各种微生物都能生活，才能使实验数据准确。(2) 培养基制备好以后，应该将一定量的乳制品的稀释液接种到培养基上，并将接种好的培养基在无菌、适宜的温度等条件下培养，使杂菌和大肠杆菌正常生活、繁殖。(3) 培养一定时间后，对培养基中的菌落进行计数，以得出总菌量的数据。而要得到大肠杆菌量的数据，应该在配制培养基时向培养基中加入伊红和美蓝试剂进行鉴定。22. 【答案】（1）尿素酶 红 （2）防止杂菌的污染 稀释涂布平板法 使微生物
29、和无菌水混合均匀 （3）倒置 无法形成单一菌落 【解析】（1）由于尿素分解细菌能合成脲酶，脲酶能将尿素分解成氨，而氨会使培养基碱性增强，即 pH 升高，导致酚红指示剂变红。（2）微生物接种的方法很多，但都要注意防止杂菌的污染；接种微生物常用平板划线法和稀释涂布平板法，图示所示为稀释涂布平板法。图示每次取样前需用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，目的是使微生物和无菌水混合均匀。（3）培养时需将培养皿倒置并放在恒温箱中培养，倒置培养的目的也是为了获得单一菌落。23. 【答案】（1）选择培养 纤维素分解菌的浓度（2）刚果红染色 量与活性（3）培养基表面的菌液会出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果（4）乙 瘤胃是酸性环境，菌株乙在酸性环境下酶的活性更高【解析】（1）步骤 A 是选择培养，该步骤可增加纤维素分解菌的浓度。（2）筛选纤维素分解菌常用刚果红染色法；培养基中透明圈的大小与纤维素酶的量和活性有关。（3）在涂布平板时，菌液量不宜过多的原因是菌液过多会使培养基表面的菌液出现积液，导致菌体堆积，影响分离效果 。（4）根据表中数据显示，甲菌株在 pH=8 时酶活性最高，乙菌株在 pH=5 时酶活性最高，因为瘤胃是酸性环境，因此乙菌株更适合用于人工瘤胃发酵。
