1、ICS 07.080 C 04 DB33 浙江省 地方标准 DB33/T 2030 2017 人间充质干细胞库建设与管理规范 Construction and management standard of human mesenchymal stem cell bank 2017 - 05 - 10 发布 2017 - 06 - 10 实施 浙江省质量技术监督局 发布 DB33/T 2030 2017 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语与定义 . 1 4 生命伦理 . 4 5 人间充质干细胞库建设 . 5 6 机构设置 . 6 7 操作规范 .
2、 7 8 干细胞库管理 . 13 附录 A（资料性附录） 供者健康调查和采集登记表 . 20 附录 B（资料性附录） 人间充质干细胞库整体操作流程 . 21 DB33/T 2030 2017 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由 浙江省卫生和计划生育委员会 提出并归口。 本标准起草单位：杭州易文赛生物技术有限公司、浙江省易文赛细胞药物和制品研究院。 本标准主要起草人：吴晓星、潘若浪、董伟仁、杜小春、李亚洲、江彩慧、杜雯林、 陈茜 。 DB33/T 20302017 1 人间充质干细胞库建设与管理规范 1 范围 本标准规定了人间充质干细胞库、胎盘组织造
3、血干细胞库的建设、操作规范和质量管理的基本方法。 本标准适用于人间充质干细胞库、胎盘组织造血干细胞库建设与管理。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2894 安全标志及其使用导则 GB 3095 环境空气质量标准 GB/T 5458 液氮生物容器 GB 7000.2 应急照明灯具 安全要求 GB/T 12905 条码术语 GB 13690 化学品分类和危险性公示通则 GB 15258 化学品安全标签编写规定 GB/T 17172 417 条码
4、GB/T 18347 128 条码 GB/T 18883 室内空气质量标准 GB 19489 实验室生物安全通用要求 GB 19652 放电灯（荧光灯除外）安全要求 GB/T 20269 信息安全技术信息系统安全管理要求 GB/T 22278 良好实验室规范原则 GB 50016 建筑设计防火规范 GB 50034 建筑照明设计标准 GB 50052 供配电系统设计规范 GB 50140 建筑灭火器配置设计规范 GB 50346 实验室建筑技术规范 GB 50351 储罐区防火堤设计规范 GB 50591 洁净 室施工及验收规范 AQ 3013 危险化学品从业单位安全标准化通用规范 危险化学品
5、安全管理条例 （国务院令第 591 号） 药品生产质量管理规范 （卫生部令第 79 号） WHO Third Edition 实验室生物安全手册 3 术语与定义 DB33/T 2030 2017 2 下列术语与定义适用于本标准 3.1 人间充质干细胞库 human mesenchymal stem cell bank 用于储存人间充质干细胞及胎盘组织造血干细胞的专门机构。 3.2 样本 specimen 在特定时间从受试者或捐献者处获得的器官、组织、月经血等标本。 3.3 样本接收室 sample reception room 样本到达时用于初步检查、清点接收、核对信息、贴签分类或样本预处理前
6、的区域。 3.4 干细胞制备室 stem cell preparation room 用于从样本中提取、分离和培养干细胞的专门区域。 3.5 配液室 medium preparation room 用于配置在细胞采集、分离、制备与储存等全过程中所需相关试剂的专门区域。 3.6 检验 室 test room 用于检验干细胞形态、微生物、内毒素、活性、分子标志物等干细胞质量与特性的专门区域。 3.7 干细胞存储室 stem cell storage room 为干细胞提供符合低温保存条件的专门区域。 3.8 样本编码 sample coding 根据编码规则对样本进行编号的过程。 3.9 干细胞质
7、量控制 stem cell quality control 为达到干细胞入库质量要求所采取的技术操作过程和相关行为活动。 3.10 DB33/T 20302017 3 干细胞分离 cell isolation 从机体器官或组织中分离出干细胞的过程。 3.11 干细胞制备 stem cell preparation 干细胞样本经过一系列规范处理达到入库标准的过程。 3.12 原代培养 primary culture 直接从机体取下器官、组织或细胞后立即进行的培养过程。 3.13 传代培养 subculture 当原代培养成功后，将细胞重新接种到新的培养器皿的培养基中进行的培养过程。 3.14 干
8、细胞冻存 stem cell cryopreservation 使干细胞暂时脱离生长状态而低温保存其细胞生物特性的方法。 3.15 干细胞复苏 stem cell thawing 使干细胞从脱离生长状态重新获得生长活力的方法。 3.16 液氮箱 liquid nitrogen container 用于储存细胞的一种深低温冷冻设备。 3.17 冻存管 tube 在细胞冻存过程中用于储存细胞的无菌小管。 3.18 压力容器 pressure vessels 指盛装气体或液体，承载一定压力的密闭设备。 3.19 生物危险 biohazard 因生物因子导致的直接或潜在的危险。 DB33/T 2030
9、 2017 4 3.20 实验室生物安全 laboratorial biosafety 实验室的生物安全条件和状态不低于容许水平，避免实验室人员、来访人员、社区及环境受到不可接受的损害，符合相关法规、标准等对实验室生物安全责任的要求。 3.21 化学安全 chemical safety 使用化学品时遵守一定的规范并有相应的紧急预案应对事故，防止危险化学品事故的发生并将事故的影响或损失降至最低。 3.22 知情同意 informed consent 具有完全民事行为能力的自然人，在充分获取信息和理解其内容后作出的自愿参与研究的决定，并签署书面知情同意书的过程。 3.23 生命伦理 bioethi
10、cs 生命科学和卫生保健领域人行为的道德规范和原则。 3.24 伦理审查委员会 ethical review committee 负责对科学研究中涉及的伦理道德问题，供者权益问题进行评估和审查的专门组织。 3.25 科学审查委员会 scientific review committee 负责对生物样本采集、干细胞制备、保存、运输与使用等方案进行科学性审查的专门组织。 3.26 生物安全委员会 institutional biosafety committee 负责指导、评估、监督细胞库的生物安全相关事宜的专门组织。 4 生命伦理 4.1 签署知情同意 人间充质干细胞库的工作人员应当对风险及收益
11、进行有效评估，确保样本提供者或其近亲属对项目信息在当时科学技术条件下充分知情、形成全面和准确的认识，自愿做出是否同意采集样本的决定，并签署知情同意书。 DB33/T 20302017 5 4.2 隐私保护措施 研究人员、医务人员、管理人员应当对样本提供者的个人信息采取保密措施，防止有意或意外泄露，若确需提供信息，需要经有关申请程序并提交伦理委员会批准同意后方可实施。 4.3 提供安全保护 研究人员或相关医务人员在获取样本的过程中尽可能控制风险，保护供者及样本安全。 5 人间充质干细胞库建设 5.1 场地要求 5.1.1 建设场地应选择周围环境较好的工业区域或其他区域，空气质量标准应符合 GB
12、3095 标准分级二级标准。 5.1.2 场 地不应建设在将要拆迁的建筑，易发生自然灾害（地震、洪水、海啸等）的地区，以及市政规划不明确区域。 5.2 建设要求 5.2.1 人间充质干细胞库功能区建设与设计应与 GB 19489、 GB 50346、 GB 50591 规定相符 5.2.2 干细胞库功能区应包括业务区与办公区。业务区包括：样本接收室、干细胞制备室、配液室、检验室、干细胞存储室、更衣室、缓冲室、物料存储室、医疗垃圾存放室和消毒清洗室等，每个区域应标识洁净和风险级别。办公区包括办公室、会议室、档案室和监控室等。 5.2.3 人间充质干细胞库洁净区、非 洁净区完全分开 。 办公区域的
13、通风系统应与实验 区域的通风系统独立分开，以确保 两个 区域的空气质量互不影响 。不同洁净度等级房间之间应设有防污染措施，如缓冲间、气闸室和传递窗等。 5.2.4 人流通道和物流通道独立设置，避免混杂和交叉污染。 5.2.5 物料及废弃物应设专用传递窗，传递窗应具备消毒灭菌功能。 5.2.6 办公区域与实验区域应进行物理隔离，工作人员由专用通道进入实验区。 5.2.7 洁净室内的密闭门应朝空气洁净度较高的房间开启并加设闭门器，无窗洁净室的密闭门上宜设观察窗。不同等级的洁净室以及洁净区与非洁净区之间的压差，应不小于 5Pa，洁净区与室外的压差，应不小于 10Pa。 5.2.8 人干细胞库建设用材
14、 料应防渗漏、防火、耐腐蚀、防水和不起尘等，易于清洁和消毒灭菌。 5.2.9 人干细胞库内所有窗户应为密闭窗，玻璃耐撞击、防破碎。 5.2.10 洁净室内不宜安装水池和地漏。 5.3 设施与设备 5.3.1 消防设施 人干细胞库消防系统设计应符合 GB 50016要求。洁净区技术夹层、非洁净区宜安装火灾自动烟感报DB33/T 2030 2017 6 警装置、消防疏散警示标识、紧急逃生通道和安全出口（全封闭的玻璃门，并备有安全锤），安全出口设计应能够使仪器设备进出。 5.3.2 通风及空调设施 通风系统应符合 GB/T 18883的规定，气流由“ 清洁 ” 空间向 “ 污染 ” 空间流动，最大限
15、度减少室内回流与涡流。实验室 空调系统应符合 GB 19489的规定，有足够的温度和湿度控制。 100级， 10000级区域一般控制温度为 20 24，相对湿度为 45% 60%， 100000级区域一般控制温度为 18 28，相对湿度为 50%65%。 5.3.3 监控系 统 应满足实时监控、记录和存储有控制要求的参数、关键设施设备的运行状态，包括液氮系统、冰箱等冷链系统以及细胞培养设备、电力系统等；应能监控、记录和存储故障的现象、发生时间和持续时间；应可以随时查看记录。 5.3.4 门禁系统 人干细胞库入口应设置门禁，保证授权后双人双锁进入干细胞储存库。 5.3.5 照明系 统 人干细胞库
16、的照明系统设计应符合GB 50034、 GB 19652、 GB 7000.2要求。核心功能区的照度应不低于 350 lx，其他区域的照度应不低于 200 lx，宜采用吸顶式防水洁净照明灯，应避免过强的光线和光反射。 5.3.6 电力供应系统 人干细胞库供电系统设计应符合 GB 50052的规定。程控降温设备、低温冷冻设备、生物安全柜、送风机和排风机、照明、自控系统、监视和报警系统等，即断电直接影响干细胞质量的设备应配备不间断备用电源，电力供应应至少维持 30min。 5.3.7 报警系统 应能对人干细胞库安全故障进行报警，报警应区分一般报警和紧急报警，且报警信号能够实时传送至责任人。 6 机
17、构设置 6.1 伦理审查委员会 6.1.1 人间充质干细胞库应设有伦理审查委员会。伦理 审查委员会由伦理学、医学、生物学、法学等专家以及无利害关系的社区代表人员组成。 6.1.2 伦理审查委员会对人间充质干细胞库相关伦理问题进行审查和评价。伦理审查委员会负责建立干细胞库的伦理准则和相应的操作规范，并在科学的前提下对样本相关研究项目或其他使用方案进行伦理审查，对已通过审查的项目或正在进行的项目进行伦理监督与审查，以保护样本提供者的权益和安全。 6.2 科学审查委员会 DB33/T 20302017 7 6.2.1 人间充质干细胞库应设有 科学审查委员会。科学审查委员会由生物学、医学、药学等领域专
18、家组成。 6.2.2 科学审查委员会应负责对样本采集、干细胞制备、保存、运输与使用等方案进行科学性审查。 6.3 生物安全委员会 6.3.1 人间充质干细胞库应设有生物安全委员会。生物安全委员会由生物学、医学、技术人员、实验室质量管理人员等各方面的专家和工作人员组成。 6.3.2 生物安全评审委员会负责对干细胞库的生物安全制度、安全操作规范进行审查 。 7 操作规范 7.1 总则 人组织样本采集、运输、接收、分离、培养、冻存和复苏等涉及干细胞操作所有过程应制定相应标准和管理规范，符合 GB/T 22278要求 ，并严格按照标准和规范执行。干细胞样本采集由专业的医护人员完成，样本制备由经过专业培
19、训的人员完成。 7.2 样本采集场所 7.2.1 人组织样本的采集场所一般为洁净手术室，无菌采集。 7.2.2 人月经血样本和乳牙样本的采集场所无洁净级别要求，但需保持个人基本卫生。 7.2.3 新生儿脐带、胎盘、骨髓样本的采集场所应达到级洁净手术室要求。 7.2.4 脂肪组织样本的采集场所需达到级洁净手术室要求。 7.3 样本采集方法 7.3.1 新生儿脐带来源间充质干细胞 7.3.1.1 胎儿分娩后，在距胎儿脐部 5cm 至 8cm 处，用止血钳分别夹住脐带上下两端，消毒剂消毒脐带。 7.3.1.2 用消毒剪刀于两钳中间断脐，截取至少 15cm 无针孔的脐带置于无菌采集瓶中，同时 加入保存
20、液以浸没脐带组织。贴条形码作为唯一标识。 7.3.1.3 脐带的两端需要用手术线结扎。 7.3.2 新生儿胎盘来源间充质干细胞或造血干细胞 7.3.2.1 胎儿娩出后，待胎盘与母体完全分离，用生理盐水充分清洗胎盘，再用 75%医用酒精快速冲洗表面。 7.3.2.2 迅速将胎盘放入胎盘采集盒，再加入保存液予以全部浸没。 7.3.2.3 采集盒密闭包装，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.3 人脂肪来源间充质干细胞 DB33/T 2030 2017 8 7.3.3.1 脂肪组织采集过程由整形科医生实施，需制定抽脂方案和术前术后的防感染措施。 7.3.3.2 行脂肪抽吸术时应尽可能保证抽脂过程无菌，
21、采集完毕转移至采集 瓶中，确保密封，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.4 人骨髓来源间充质干细胞 7.3.4.1 骨髓组织采集前应联系负责骨髓采集医师，制定骨髓穿刺方案和术前术后的防感染措施。 7.3.4.2 行骨髓穿刺术，抽取骨髓液，即时转移至无菌采集瓶中保存，确保密封，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.5 人子宫内膜来源间充质干细胞 7.3.5.1 组织来源：手术切除成年女性子宫内膜增厚组织或子宫内膜异位组织，置于采集液中保存，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.5.2 月经血来源：成年女性月经期第二天开始采集，将月事杯消毒后置于阴道内，收集月经血。约 6h 10h 将收集满月经血后的
22、月事杯取出，将月经血转移 至采集液中保存，并贴上条形码作为唯一标识。 7.3.6 人乳牙来源间充质干细胞 7.3.6.1 收集没有牙体和牙髓病变、自然脱落的乳牙。 7.3.6.2 将乳牙置入采集液中保存，并贴上条形码作为唯一标识。 7.4 样本运输 7.4.1 运输装置在设计与用材上须防渗漏、防辐射、抗震动、耐压、耐热等，并标识清楚。 7.4.2 新生儿脐带或胎盘、人脂肪、骨髓、子宫内膜和乳牙样本的运输温度为 2 8 , 运输时间不超过 36h。 7.4.3 运输须采用平稳、安全、快速的运输途径。 7.4.4 运输人员应是经过培训合格的专门人员。 7.5 样本接收 7.5.1 样本接收应遵从安
23、全与准确的原则，做到样本与供者一一对应。 7.5.2 样本接收时，应做好 自我防护工作，接触样本之前应佩戴手套与口罩。 7.5.3 接收样本后应先观察样本容器外包装的外观，检 查有无破损并记录。 7.5.4 检查外观后，工作人员再检查样本采集信息记录表是否齐全，同时确认记录表上信息已经填写完整，检查信息记录表信息是否与样本信息一 一对应，样本及记录表上应贴有一致对应的条形码，确认无误后进行接收。 7.5.5 样本接收后，使用医用酒精消毒清理容器外表面，如不能及时对样本进行处理，需把样本保存在 2 8 条件下，最长时间不超过 12h。 7.5.6 样本量应能够满足制备方和检测方的最低要求。 DB
24、33/T 20302017 9 7.5.7 样本 接收后应及时将信息反馈给样本发送方。 7.5.8 干细胞库应制定样本拒收标准，按照样本拒收标准拒收样本，并及时通知有关部门或负责人，同时做好相应记录。 7.6 人间充质干细胞分离与原代培养方法 7.6.1 新生儿脐带间充质干细胞 新生儿脐带组织剥取华通氏胶，以组织块贴壁法或胶原酶消化法分离新生儿脐带间充质干细胞，使用贴壁法进行原代培养。 7.6.2 新生儿胎盘间充质干细胞 去除胎盘羊膜及母体面组织，剪取脐带近端的胎盘组织以酶消化法分离胎盘间充质干细胞，贴壁法进行原代培养。 7.6.3 新生儿胎盘造血干细胞 去除胎盘羊膜及母体面组织后，将剩下的胎
25、盘组织剪碎至糜状，再用胶原酶消化获取有核细胞，经分离纯化步骤后进一步获得造血干细胞。 7.6.4 人脂肪间充质干细胞 成人脂肪组织剪碎至糜状，以胶原酶消化法分离脂肪间充质干细胞，贴壁法进行原代培养。 7.6.5 人骨髓间充质干细胞 人骨髓液样本，以密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞，贴壁法进行原代培养。 7.6.6 人宫内膜间充质干细胞 宫内膜组织样本通过胶原酶消化法分离宫内膜干细胞，贴壁法进行原代培养。月经血样本以密度梯度离心法，通过人淋巴细胞分离液获取宫内膜干细胞，贴壁法进行原代培养。 7.7 干细胞换液 为了确保干细胞生长所必须的营养水平和消除代谢物毒害作用，换液需根据干细胞生长情况及培
26、养基状态进行综合判断，换液操作通常是移走培养瓶中原有的部分或全部培养液，再加入新鲜培养液。首次换液需要在镜下观察到原代细胞完全贴壁和延展后方可进行，不得超过一周。换液操作需符合 GMP要求。 7.8 干细胞传代 原代干细胞一般情况在达到 80% 90%融合度可进行传代操作，传代操作应即时、迅速、密度适宜。整个操作应符合 GMP要求，并有严格的质量控制措施，保证无外源微生物污染。 7.9 干细胞质量检验 7.9.1 存储质量检验及基本要求 7.9.1.1 人干细胞入库储存前应完成相应的质量检验，达到质量要求的方能入库存储。 7.9.1.2 人间充质干细胞存储质量基本要求如表 1。 DB33/T
27、2030 2017 10 表 1 人间充质干细胞存储质量基本要求 7.9.1.3 人胎盘造血干细胞存储质量基本要求如表 2。 表 2 人胎盘造血干细胞存储质量基本要求 质量指标 最低标准 检验方法 细胞形态 贴壁生长，伸展呈长梭形，形态均一 显微镜下观察 细胞数量 每毫升 110 6个细胞，每管 1毫升 参照全国临床检验操作规程第 3版白细胞计数方法执行 细胞活率 不得低于 90% 台盼蓝拒染法 微生物检测 细菌和真菌检测结果应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015年版四部通则 1101无菌检测法执行 支原体 结果应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015 年版四部通则 3301 支原体检查
28、法执行。 内毒素 0.5EU/ml 参照 中国药品检验标准操作规程 2010版细菌内毒素检查法执行。 病毒检测 HIV 抗体、 HBsAg、 HCV 抗体、 TP 抗体、 CMV-IgM、HTLV 抗体、 EBV 抗体检测应为阴性； HCV、 HBV、 HIV 病毒核酸检测应为阴性。 血清 ELISA 检测 核酸检测 细胞表型 CD73、 CD90 和 CD105 阳性率不低于 95； CD45、CD34、 CD14、 CD19 和 HLA-DR 阳性率不高于 2。 采用流式细胞术进行测定 染色体核型 染色体数量应为 46， XX/XY，无染色体缺失、异位和重排现象 采用 G 带分析法进行测定
29、 三 系分化能力 在体外条件培养基诱导培养下，能够分化成脂肪、成骨和软骨细胞 采用国际惯用（条件培养基）方法 质量指标 最低标准 检验方法 有核细胞数量 总数应不少于 510 8个 参照全国临床检验操作规程第 3版血细胞自动分析仪检测有核细胞数量 DB33/T 20302017 11 表 2 人胎盘造血干细胞存储质量基本要求 （续） 7.9.2 质检报告出具 质量控制人员根据检验结果，出具质量检测报告。干细胞质量应制定不合格标准，判定为合格的干细胞按照规范流程入库。判定为不合格的干细胞，需经过不合格干细胞处置流程，作医疗废物处理。 7.10 干细胞冻存 干细胞制备达到要求的细胞系可进行冻存操作
30、，冻存细胞需加入适当的冷冻保护液，遵循程序降温原则，该操作应符合 GMP 要求，并有严格的质量控制标准和要求，保证无外源微生物污染。 7.11 干细胞入库 干细胞入库前，微生物等其他检测结果滞后，此时应在不影响细胞质量的前提下对干细胞进行低温（ -80）暂时储存，待确认所有检测结果合格后，方可将细胞置于液氮箱内进行长期储存。储存时工作人员需做好低温防护措施（如佩戴抗冻手套、面罩等），将经程控降温的干细胞放入指定位置，置于液氮箱（ -196 -135）长期储存，并有严格的过程控制，记录完整，及时将信息录入、档案填写。 7.12 干细胞复苏 自液氮容器中取出冻存管，检查盖子是否旋紧。将冻存管立即投
31、入 37 42水浴锅中，轻摇冻存管使其在 1min内全部融化，以 75%酒精擦拭冻存管外部，移入无菌操作台内。转 移干细胞悬液至含有培养基（生理平衡缓冲液）的离心管内，离心洗涤后加入新鲜培养基重悬干细胞，将细胞转移至培养瓶，放入 CO2培养箱培养。冻存管内复苏的细胞活率应不低于 75%。 质量指标 最低标准 检验方法 细胞活率 应不低于 90% 采用台盼兰拒染法检测 微生物检测 细菌和真菌检测结果应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015年版四部通则 1101无菌检测法执行 支原体 结果应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015 年版四部通则 3301 支原体检查法执行。 CD34阳性细胞数
32、不得小于 0.2% 采用流式细胞术进行测定 内毒素 0.5EU/ml 参照中国药品检验标准操作规程 2010版细菌内毒素检查法执行。 病毒检测 HIV 抗体、 HBsAg、 HCV 抗体、 TP 抗体、 CMV-IgM、HTLV 抗体、 EBV 抗体检测应为阴性； HCV、 HBV、 HIV 病毒核酸检测应为阴性。 血清 ELISA 检测 核酸检测 集落形成 应检测到 CFU-GM 造血细胞集落生成 采用甲基纤维素半固体培养法进行验证 DB33/T 2030 2017 12 7.13 干细胞出库 7.13.1 使用出库 7.13.1.1 临床研究或其他需要使用干细胞时，应由伦理审查委员会、科学
33、审查委员会以及生物安全委员会就干细胞使用的伦理道德、供者权益、使用方案安全性与科学性等的问题，进行全面评估与审核。通过审核方能出库使用。同时应保证细胞供者对细胞出库情况完全知情并签订同意书的条件下，完成出库流程。 7.13.1.2 干细胞出库时，由出库操作人员严格按照出库标 准操作出库。出库流程符合 GMP 管理要求，质控人员需监督出库过程，填写细胞出库记录，样本数据管理系统中录入出库信息。 7.13.1.3 储存的 干细胞需要定期检查出库的情况，由出库操作人员严格按照出库标准操作出库，质控人员监督出库过程，填写细胞出库记录，更新样本数据，样本数据管理系统中录入出库信息。 7.13.1.4 干
34、细胞出库应制定出库质量基本要求 ，具体见 表 3。 满足出库要求的干细胞方能使用，不满足出库要求的干细胞不能使用，作医疗废弃物处理。 表 3 人间充质干细胞出库质量基本要求 质量指标 最低标准 检验方法 细胞形态 悬浮情况下，细胞大小均一 ，形态规则，胞膜完整，透光度好 显微镜下观察 细胞活率 不得低于 90% 台盼蓝拒染法 微生物检测 细菌和真菌应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015 年版四部通则无菌检查 法进行 支原体 结果应为阴性 参照中华人民共和国药典 2015 年版四部通则 3301 支原体检查法执行。 内毒素 0.5EU/ml 参照中国药品检验标准操作规程 2010版细菌内毒素
35、检查法执行。 病毒检测 HIV 抗体、 HBsAg、 HCV 抗体、 TP 抗体、 CMV-IgM、HTLV 抗体、 EBV 抗体检测应为阴性； HCV、 HBV、 HIV 病 毒核酸检测应为阴性。 血清 ELISA 检测法 核酸检测 细胞表型 CD73、 CD90 和 CD105 阳性率不低于 95%； CD45、 CD34、 CD14、 CD19 和 HLA-DR 阳性率不高于 2%。 采用流式细胞术进行测定 DB33/T 20302017 13 表 3 人间充质干细胞出库质量基本要求 （续） 7.13.2 废弃出库 7.13.2.1 储存时限超过 20 年且客户要求重新签订新的储存协议的
36、细胞，应经过评估后继续给予储存服务。 7.13.2.2 当供者提出反悔意见，撤销知情同意书，要求销毁所提供的样本时，应遵从样本提供 者的意见将样本废弃，并将样本提供者相关信息和数据从信息系统中清除。 7.13.2.3 样本的废弃应首先提出废弃申请，通过伦理审查委员会和科学审查委员会的审核后方可进行。 7.13.2.4 样本废弃过程应详细记录，包括细胞编码、废弃原因、废弃处理方式、批准和执行废弃的日期、废弃操作时间等信息。废弃处理方 式应按照医疗废弃物有关规定执行。 7.13.3 转移出库 7.13.3.1 干细胞库因结构调整等情况需要进行干细胞转移的，应按照干细胞转移操作规范进行转移操作。 7
37、.13.3.2 干细胞转移操作所用的时间应在规定时限内，确保干细胞及其冻存容器的温度在 -135以下。 7.13.3.3 转移过程要做好相应记录。 8 干细胞库管理 8.1 人员要求与管理 8.1.1 人员要求 8.1.1.1 负责新生儿脐带、胎盘样本采集人员为经过严格专业培训的护士或助产士职称以上卫生专业技术人员并经过考核合格者。 8.1.1.2 干细胞库应设质量授权人一职，由法人授权，任职资质应符合药品生产质量管理规范（ GMP）要求，主要承担细胞产品放行的职责 ，确保每批已放行产品的生产、检验和储存均符合质量标准。 8.1.1.3 干细胞库应设细胞库主任一职，由法定代表人担任或授权，保证
38、干细胞库日常工作按规范运行，库主任应具有生物学或医学相关专业硕士以上学历，三年以上行业质量管理工作经验。干细胞库主质量指标 最低标准 检验方法 染色体核型 染色体数量应为 46， XX/XY，无染色体缺失、异位和重排现象 采用 G 带分析法进行测定 三系分化能力 在体外条件培养基诱导培 养下，能够分化成脂肪、成骨和软骨细胞 采用国际惯用（条件培养基）方法 DB33/T 2030 2017 14 任下设技术主管和质控主管，其中质控主管应具备药学、医学或生物学本科以上学历，在质量管理方面有丰富的经验。技术主管应具备具有生物学或医学相关专业本科以上学历，在生产管理方面有丰富经验。 8.1.1.4 负
39、责干细胞制备、深低温冻存及复苏的技术人员应具有制剂基本知识、生物安全知识、 GMP理论基础和至少 1 年以 上细胞培养工作经历，同时应具有生物学或相关专业大专以上学历。 8.1.1.5 负责干细胞质量控制人员应具有制剂基本知识、质量管理和 GMP 理论基础，有医学检验或药企质量相关工作经验，同时应具有生物学或医学检验相关专业本科以上学历。 8.1.2 人员培训与考核 8.1.2.1 干细胞库工作人员上岗前应经过专业培训，培训形式应包含内部培训与外部培训。内容包括但不限于干细胞理论与实践、生命伦理、干细胞法律法规、 GMP 管理、制剂基本知识、细胞培养基础、生物安全、仪器设备使用与维护方法、物料
40、管理与清洁卫生、干细胞库管理、岗位职责、操作规范等内容，外部培训经由相关行政部门组织，所有培训需经考试合格并取得相关资质后由干细胞库主任批准方可上岗。 8.1.2.2 干细胞库工作人员每年应按计划接受培训并参与考核。考核未通过者，应重新接受培训，考核合格后由干细胞库主任批准后方可再次上岗。 8.1.2.3 干细胞库工作人员培训及考核结果应有相关档 案记录。 8.1.3 人员出入制度 8.1.3.1 人干细胞库工作区域应建立实验室人员及外来人员准入制度，并建立相应人员准入登记记录制度。细胞库设立门禁系统，非实验室工作人员须经干细胞库主任审批后，由指定工作人员陪同进入实验室，未经许可不得随意触碰仪
41、器设备、翻阅文件记录、拍照或携带物品进出。 8.1.3.2 有 严重免疫系统疾病，或正在服用免疫耐受药物者；有呼吸道感染或发热症状者；身体有开放式损伤者和有传染性疾病或病毒携带者不宜进入干细胞库。 8.1.4 人员健康管理 干细胞库实验室工作人员（包括管理人员、技术员和质控员）应具备的健康要求：抗 -HAV、 HBsAg、 抗 -HCV、抗 -HIV、梅毒抗体检测应为阴性；技术员与质控人员除无以上传染病史外，需（矫正）视力正常，无色盲、色弱。干细胞库工作人员应每年接受体检一次。 8.1.5 供者健康管理 对干细胞供者的基本信息与健康信息应进行详细采集与记录，同时做好对供者的隐私保护。干细胞供者
42、应无血液系统疾病、内分泌系统疾病、恶性肿瘤史、性病及高危人群史、吸毒史、一般传染性疾病或其他遗传疾病； HIV、HBV 、 HCV、 HTLV、 EBV 与 CMV 抗体与核酸检测应为阴性。 供者健康调查和采集登记表 参见附录 A。 8.2 实验室安全管理 8.2.1 消防安全 8.2.1.1 人干细胞库需设置消防给水系统，其设计应根据生产的火灾危险性建筑物耐火等级以及建筑物的体积等因素确定。保证消防装置时刻处于可用状态，此外还应确保安全通道畅通且有明确指示。 DB33/T 20302017 15 8.2.1.2 制定消防安全检查计划。 8.2.1.3 每年至少组织消防演习一次。 8.2.1.
43、4 人干细胞库的防火系统建设应符合 GB 19489 的规定。 8.2.1.5 人 干细胞库灭火器的配置应符合 GB 50140 的规定。 8.2.1.6 人干细胞库储存区防火设计应符合 GB 50351 的规定。 8.2.2 压力容器安全 8.2.2.1 压力容器的管理应严格执行国家质量监督检验检疫总局颁布的固定式压力容器安全技术监察规程及国家有关的压力容器安全技术规定条例和制度。 8.2.2.2 压力容器的使用部门要加强对压力容器的管理，压力容器的操作与维护应有专人负责，操作各种压力容器时必须严格遵守操作规程，操作人员应经过安全教育和干细胞库培训。 8.2.3 液氮安全 8.2.3.1 人
44、干细胞储存库区域应保证通风良好，应安装氧浓度检测器。 8.2.3.2 人干细胞库工作人员在执行细胞出入库操作时必须做好防护措施（如使用防护面罩和防冻手套等）。 8.2.3.3 干细胞储存库应定期巡查，保证液氮供应不出现短缺。所有液氮储存箱（罐）最好设置为自动充液模式，以确保液位恒定。 8.2.3.4 人干细胞库的液氮安全，应符合 GB/T 5458 的规定。 8.2.3.5 每年至少组织生物安全事故应急预演一次。 8.2.4 生物安全 8.2.4.1 人干细胞库应制定切实有效的生物安全管理制度；编制安全管理体系文件（涵盖安全管理目标、安全管理手册和操作规程等）；应制定生物危害评估方案、生物安全
45、事故应急预案等安全管理措施。 8.2.4.2 人干细胞库应建立生物安全自查工作制度，详列生物安全控制环节清单，定 期检查。 8.2.4.3 人干细胞库制定的各项安全管理制度和体系文件需由生物安全委员会审议批准后方可生效。 8.2.4.4 人干细胞库的生物安全制度应符合 WHO 生物安全手册和 GB 19489 的规定。 8.2.5 化学用品安全 8.2.5.1 人干细胞库涉及到的有毒有害物质，应根据 GB 13690 设立相应的安全储存制度，应有明确的管理与使用制度，并有相应的记录登记储存与使用。 8.2.5.2 人干细胞库涉及有毒有害物质的工作区，设计应符合 AQ 3013 规范。 8.2.5.3 干细胞库实验室危险化学品安全管理应符合 危险化学品安全管理条例（国务院令第 591号）的相关要求 。 8.2.6 安全标识 DB33/T 2030 2017 16 8.2.6.1 人干细胞库相 关区域及相关设施应具有安全标识，标识内容如医疗垃圾、危险品、消防设施、液氮容器、洁净区等应清晰明确。 8.2.6.2 人干细胞库中相关安
