1、 ICS 65.020.30 B 40 DB14 山西省 地方标准 DB 14/ T689 2012 绒山羊人工授精操作技术规程 2012 - 12 - 20 发布 2013 - 01 - 20 实施 山西省质量技术监督局 发布 DB14/ T689 2012 I 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 采精 1 5 精液品质检查 2 6 精液的稀释、分装、贮存和运输 3 7 输精 4 附录 A（规范性附录） 输精器材的清洗与消毒 5 附录 B（规范性附录） 种公羊精液品质检查登记表 6 附录 C（资料性附录） 精液稀释液参考配方 7 附录 D（资料性
2、附录） 输精情况登记表 8 DB14/ T689 2012 II 前 言 本标准按 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业厅提出并归口。 本标准起草单位：山西省牧草工作站、山西农业大学、晋岚绒山羊育种中心。 本标准主要起草人： 姚继广、任有蛇、郑永田、赫磊、王慧生、刘旗、张建新、杜海梅。 DB14/ T689 2012 1 绒山羊人工授精操作技术规程 1 范围 本标准规定了 绒山羊 人工授精的 采 精 ，精液品质检查， 精液的 稀释、 分装、贮存 、 运输 和 输精 。 本标准适用于 山西省内 绒山羊 的人工授精 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可
3、少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 NY/T 636 猪人工授精技术规程 NY/T 1335 牛人工授精技术规程 DB14/T 522 晋岚绒山羊 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本 文件 。 3.1 适繁母羊 身体 健康 ， 繁殖机能正常，年龄在 16 岁的雌性羊 。 3.2 发情鉴定 用一定方法判断母羊是否发情及发 情所处阶段的过程。 3.3 人工授精 利用器械以人工方法采集公羊的精液，经特定处理后，再输入到发情母羊生殖道特定部位使其妊娠的动物繁殖技术。 4 采精 4.1 公羊的调教 4.1.1
4、 用于采精 的 种公羊 的 选择和鉴定 按 DB14/T 522 的规定执行 ， 公羊的调教 从 1.0 1.5 岁开始。 4.1.2 将预调教的种公羊放入发情母羊群中，让其自然交配几次，以激发性欲，建立条件反射后赶出。也可在用调教好的公羊采精时，让其旁观。然后训练其用假阴道采精，使其逐步克服胆小怕人的行为习惯，逐渐适应假阴道采精。每日早、晚按摩睾丸各 1 次，每次 10min 15min。 DB14/ T689 2012 2 4.2 采精 前准备 4.2.1 器械的准备 采集的器械包括 干燥箱、恒温箱、显微镜、盖玻片、载玻片、擦镜纸、血球计数器、 pH试纸、长柄镊子、酒精灯、滤纸、假阴道 组
5、件（ 外壳、内胎、胶塞、集精瓶 等） 、凡士林、量筒、玻璃棒、温度计、采精架、开膣器、输精器、 移液枪或注射器、手 电筒、 白瓷 盘、脸盆、毛巾、肥皂等 。器械的洗涤与消毒 按 照 NY/T 1335和附录 A的规定执行 。 4.2.2 精液稀释液配制 精液稀释液配制 方 法 可 参照附录 C。使用前置于水浴锅内预热至 37 。 4.2.3 假阴道的准备 4.2.3.1 洗涤。假阴道的主要部件如内胎和集精杯等，在使用前一天以 1% 2%的碳酸氢 钠温液彻底洗涤，也可配合使用肥皂脱去油脂，再用清水冲洗 3 4 遍，然后晾干。 4.2.3.2 安装内胎。采精的当天，将内胎的光滑面向里粗糙面向外，置
6、于外壳内拉直，再将内胎两端外翻在外壳的两端，用胶圈加以固定，防止滑脱。 4.2.3.3 消毒。以长柄镊夹取 75%酒精浸湿的纱布块，全面涂擦内胎进 行消毒。待消毒彻底后，再安装集精杯。集精杯可用蒸煮或酒精消毒。 4.2.3.4 冲洗。用灭菌的稀释液对灭菌后的内胎和集精杯冲洗 2 3 次，洗掉酒精或蒸馏水。 4.2.3.5 注水。由假阴道外壳的注水孔注入假阴道夹层腔体积 2/3 左右的热水，水温 40 45， 年轻羊可低 1 2 。 4.2.3.6 安装 集精杯。注 水后，将消毒冲洗后的 集精杯 插入假阴道一端。在 集精杯夹层中 灌入 4045 的温水，使 杯 内保持 38 左右。 4.2.3.
7、7 涂润滑剂。用灭菌的玻璃棒蘸取灭菌的润滑剂涂至假阴道前 1/2 处，滑润 其内腔。 4.2.3.8 调压。根据采精个体的不同，从胶塞的进气孔注入 一定量的空气以维持假阴道内腔适宜的压力，刺激阴茎产生射精反射。 4.2.3.9 测温。临采精时，用灭菌的温度计插入假阴道内测试其温度，温度以 38 40为宜。 4.2.4 台羊的准备 选择健康、体格大小与公羊相 近 的发情母羊固定在采精架上做为台羊。采精前 ， 对台羊后驱进行清洗消毒处理。 4.3 采精操作 采精要做 到定点、定时、定人。 采精时， 助手 将 种 公羊引到台羊前 。 采精者蹲在台羊右后方，右手横握假阴道 ， 胶 塞向下，前低后高，与
8、母羊骨盆的水平线 保 持 35 40 。 当公羊爬跨、伸出阴茎时，迅速用左手托住包皮，将阴茎导入假阴道内。当公羊猛力前冲，并弓腰后，则完成射精。随公羊从台羊身上滑下时，顺势将假阴道向下向后移动 ，保持 集精瓶 端向下，并立即倒转竖立，然后打开 胶 塞放气，取下集精瓶，并盖上盖子送操作室检查。 4.4 采精频率 成年种公羊每天可采精 1 2次， 连续 采 3d 5d，休息 1d。 5 精液品质检查 DB14/ T689 2012 3 5.1 采精量 采精后，用移液枪或注射器将精液 移至预热的试管，并计量采精量。绒山羊的射精量一般在 0.5ml1.5ml。 5.2 外观检查 正常颜色为乳白色，无脓
9、无腐败气味，肉眼 可见 云雾状。带有腐败臭味 ， 颜色为红色、黄色、绿色的精液 应废弃 。 5.3 精子活力 检查活力前，将载玻片和盖玻片在 37 的 恒温板上预热。 取 1滴待检查精液 ， 稀释后置于 已预热的载玻片上，上覆盖玻片， 在 光学显微镜 下 放大 200 400倍，估测精液样品中前进运动精子所占百分率。采用 0 1.0的 10级评分标准。 100%直线前进运动者为 1.0分， 90%直线前进运动者为 0.9分， 以此类推。鲜精活力不低于 0.7。 5.4 精子密度 5.4.1 常规检查时用估测法。即在显微镜 10 10 倍视野下判断精子的稠密和稀疏程度。精子密度可分为“密”、“中
10、”、“稀”三级。 密：整个视野内充满精子几乎看不到空隙，很难见到单个精子活动。 中：视野内精子之间有相当于一个精子长度的明显空隙，可见单个精子的活动。 稀：视野内精子之间的空隙很大，甚至可查清所有精子数。 5.4.2 定期检查时，用血细胞计数板准确测定每毫升精液中的精子数。即在显微镜下统计出计算室的四角及中央共 5 个中方格（ 80 个小方格）内的精子数， 再根据稀释倍数计算出每 毫升 精 液中的精子数。 5.5 填表 把检查结果填入 精液品质检查登记表 （见附录 B） 。 6 精液的稀释、分装、贮存和运输 6.1 稀释液的配制 稀释液的 配制 按 照 NY/T 636的规定 进行。稀释液配方
11、 参 见附录 C。牛 奶稀释液、卵黄稀释液在 4 的恒温箱中保存时间不应超过 24h。 6.2 精液的稀释 6.2.1 精液稀释的倍数 精液一般 稀释 2 4倍。精 子密度在 25亿以上的精液可 稀释 10 20倍。 10倍以上高倍稀释时，应分两步进行，先加入稀释液总量的 1/3 1/2进行 低倍稀释，稍等片刻后再将剩余的稀释液全部加入 稀释 。 6.2.2 精液稀释的步骤 精液稀释的 步骤 按 照 NY/T 636进行。 稀释完毕 静置 5min后，做精子 活力检查 。 稀释后活力 不低于稀释前 ， 方 可进行分装与保存 。 6.3 精液分装 DB14/ T689 2012 4 用移液枪将精
12、液分装到 1.5ml 5ml的离心管中，并标明种公羊耳号、生产日期、生产单位等信息。 6.4 精液贮存 6.4.1 常温保存 放置于操作室消毒的容器内， 15 25 条件下避光保存。可 保存 48h，最好是当天用完。 6.4.2 低温 保存 温度为 0 5 。应缓慢降温，可将分装好的精液用橡皮筋绑定在温度计上，放入盛有 37 敞口容器中，再将该容器放入到 4 冰箱内，使其在 3h 4h内温度降低到 4 ，然后再冷藏于 4 冰箱内。使用时，在 37 水浴锅中升温后检测活力在 0.5以上方可使用。 6.5 精液运输 应放置 于 保温效果良好的 避光 装置内运输。运输过程中要避免剧烈震动。 7 输精
13、 7.1 母羊发情 鉴定 把结扎有试情布的试情公羊放入待检母羊群中进行试情。 如果母羊站立不动接受试情公羊爬跨 ， 表明为发情 母羊 ，可用于输精 。 7.2 输精 时间 适宜 输精 的时间是母羊发情后的 20h 30h。 一般情况下，早晨发现的发情母羊下午输精 1次，第 2天 早晨再输 1次；下午发现的发情母羊第 2天 早晨输精 1次，第 2天 下午再输 1次。 7.3 精液检查 经运输或保存后的精液，应用显微镜进行活力检查，确定精子活力在 0.5以上方可使用。 7.4 输精程序 7.4.1 清洗消毒 输精 前， 输精人员清洁双手。输精 前将母羊外阴部用 消毒液（ 来苏儿溶液 等） 消毒 、
14、 水洗 、 擦干。 7.4.2 输精 输精 时， 助手两腿固定 （ 夹住 ） 母羊头颈部，双手倒提母羊后腿， 倾斜 约 40 。 输精员左手提尾 ，用 开膣器 打开阴道，找到子宫颈口。 将 装有精液的输精枪 ， 插入子宫颈口内 0.5cm 1.0cm， 输精 0.1ml0.2ml。操作时 边捻边推，交叉进行，如遇阻力应回抽， 调整 角度，重新捻推 ，防止损伤子宫 。 7.5 填写母羊输精记录表 把 母羊输精记录 填入输精情况登记表（ 参 见附录 D）。 DB14/ T689 2012 5 A A 附 录 A （规范性附录） 输 精器材的清洗与消毒 A.1 玻璃器材 采用电热鼓风干燥箱进行高温干
15、燥消毒，要求温度控制在 130 150 ，并保持 20min 30min，待温度降至 60 以下时，方可开箱取出使用。也可采用高压蒸汽消毒维持 30min。 A.2 橡胶制品 一般采用 75%的酒精棉球擦拭消毒，最好再用 95%的酒精棉球擦拭 1次，以加速挥发残留在橡胶上面的水分和酒精气味，然后用生理盐水冲洗。 A.3 金属器械 可用新洁尔灭等消毒溶液浸泡，然后用生理盐水等冲洗干净，也可以用 75%的酒精棉球擦拭或用酒精灯火焰消毒。 A.4 溶液 如润滑剂、生理盐水等，可隔水煮沸 30 min或用高压蒸汽消毒，消毒时为了避免玻璃瓶爆裂，瓶盖要取下或橡胶皮塞上插上大号注射针头，瓶口用纱布包扎。
16、DB14/ T689 2012 6 B B 附 录 B （规范性附录） 种公羊精液品质检查登记表 种公羊精液品质检查登记表见表 B.1。 表 B.1 种公羊精液品质检查登记表 采集 日期 耳号 采精员 采精量 颜色 气味 活力 精子 密度 稀释 液量 稀释后总量 检验员 备注 DB14/ T689 2012 7 C C 附 录 C （资料性附录） 精液稀释液参考配方 C.1 牛奶稀释液 把鲜奶以多层纱布过滤，煮沸消毒 10min 15min，冷至室温，除去奶皮即可，一般稀释 2 4倍。 C.2 0.89氯化钠（生理盐水）稀释液 氯化钠（ 化学纯） 0.89g， 蒸馏水 100ml。一般稀释 1
17、 2倍，即时使用。 C.3 葡萄糖卵黄稀释液 无水葡萄糖 3.0g， 柠檬酸钠 1.4g， 消毒蒸馏水 80ml，新鲜卵黄 20ml。将葡萄糖、柠檬酸钠溶于蒸馏水，过滤 3 4次。蒸煮 30 min，降至室温。再将卵黄用注射器抽出，加入后振荡溶解即可应用。稀释 23倍，可作保存和运输之用。 C.4 TCG配方 葡萄糖 1.48g， 三羟基甲基氨基甲烷 3.02g， 柠檬酸 2.38g， 定容到 100ml容量瓶中，每升稀释液中添加 青霉素、链霉素各 100万单位 ，然后用 10ml离心管分装，保存 4备用。 DB14/ T689 2012 8 D D 附 录 D （资料性附录） 输精情况登记表 输精情况登记表见表 D.1。 表 D.1 输精情况登记表 母羊 耳号 胎次 发情 日期 第 1 次输精 第 2 次输精 预产期 输精员 公羊耳号 输精量 精液倒流 公羊耳号 输精量 精液倒流 _
