1、ICS 71.100.70 Y 42 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 13302011 化妆品中尿素的测定 高效液相色谱法 Determination of Urea in Cosmetics HPLC Method 文稿版次选择2011 - 03 - 07 发布 2011 - 04 - 07 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 13302011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省产品质量监督检验研究院提出。 本标准由安徽省质量技术监督局归口。 本标准起草单位：安徽省产品质量监督检验研究院。 本标准主要起草人：储大勇、黄颖、韩
2、枫、孙志伟、祝红蕾。 DB34/T 13302011 1 化妆品中尿素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了化妆品中尿素的高效液相色谱法测定方法。 本标准适用于化妆品中尿素含量的测定。 2 原理 化妆品中的尿素用乙腈+水（1+1）溶解，以乙腈+水为流动相，使用 C 18为填料的不锈钢柱和二极管阵列检测器对试样中的尿素进行高效液相色谱分离和外标法定量。 3 试剂和溶液 乙腈：色谱纯。 水：新蒸二次蒸馏水。 尿素标样：取分析纯尿素经 95 % 乙醇重结晶后，于 100 烘箱中烘干后备用。重结晶后的尿素在 5.2 规定的条件下应无杂峰。 20.00 mg/mL 尿素标准溶液：称取尿素标样 1
3、.0 g(精确至 0.0002 g)，置于 50 mL 容量瓶中，用水溶解并稀释至刻度，摇匀备用。此溶液质量浓度为 （尿素）20.00 mg/mL。 4 仪器 高效液相色谱仪，具二极管阵列检测器和相应的色谱处理机。 色谱柱：250 mm4.6 mm（id）不锈钢柱，内装 C 18 填料粒径 5 m。 超声波清洗器。 微孔过滤器：滤膜孔径为 0.45 m。 微量注射器：50 L 5 分析步骤 5.1 试样溶液制备 称取样品 0.1 g0.5 g（精确至 0.001 g，含尿素 约 40 mg）置于 50 mL 容量瓶中，用乙腈 + 水（1+1）溶解并稀释至刻度，超声振荡 10 min 取出，冷却
4、至室温，用 0.45 m 滤膜过滤，滤液待测。 5.2 高效液相色谱操作条件 流动相：乙腈 + 水5 + 95（V+V），使用前用 0.45 m 滤膜过滤并用超声波脱气 。 流速：1.0 mL/min。 柱温：室温。 DB34/T 13302011 2 检测波长：195 nm。 进样体积: 10 L 5.3 标准曲线的制备 分别吸取 20.00 mg/mL 尿素标样溶液 1.00 mL，2.00 mL，3.00 mL，4.00 mL，5.00 mL 置于 50 mL容量瓶中,稀释至刻度， 摇匀， 此溶液分别含尿素 400.00 g/mL、 800.00 g/mL、 1200.00 g/mL、
5、1600.00 g/mL、2000.00 g/ mL，用 0.45 m 滤膜过滤，滤液待用。 在上述色谱条件下， 待仪器稳定后注入标准系列溶液 ， 记录色谱峰面积， 以尿素的质量浓度 （g/mL）为横坐标，相应的色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 5.4 试样的测定 在与测定标准系列溶液相同的条件下，注入待测溶液，根据峰的保留时间定性。记录色谱峰面积，并从标准曲线查得尿素的浓度。典型的尿素高效液相色谱图见附录 A 和附录 B。 6 结果的表示 尿素的质量分数 W（）按下式计算： 100m106=VW(1) 式中： m 样品的质量，g； V 样品定容体积，mL； 由标准曲线查出的试样溶液中尿素的浓度，g/mL。 7 重复性与再现性 7.1 重复性 平行测定结果的相对偏差小于 3。 7.2 再现性 不同试验室间测定结果的相对偏差小于 5 DB34/T 13302011 3 A A 附 录 A （资料性附录） 尿素标准溶液高效液相色谱图 图A.1 DB34/T 13302011 4 B B 附 录 B （资料性附录） 化妆品样品高效液相色谱图 图B.1 _
