1、 ICS 67.180.10 B 47 DB34 安徽省地方标准 DB 34/T 15382011 蜂蜜中杀草强残留量测定 液相色谱串联质谱法 Determination of amitrole residue in the honey by liquid chromatography tandem mass spectrometry 2011 - 11 - 15 发布 2011 - 12 - 15 实施安徽省质量技术监督局 发布DB34/T 15382011 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由安徽省质量技术监督局、安徽省食品质量安全检验方法标准化技
2、术委员会提出。 本标准由安徽省食品质量安全检验方法标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：国家农副加工食品质量监督检验中心、安徽国家农业标准化与监测中心。 本标准主要起草人：何俊、程坚、蒋俊树、赵成仕、王彩霞、徐彦辉、卢业举、丁磊、刘琴芳、夏春。 DB34/T 15382011 1 蜂蜜中杀草强残留量测定 液相色谱串联质谱法 1 范围 本标准规定了蜂蜜中杀草强残留量的液相色谱串联质谱测定方法。 本标准适用于蜂蜜中杀草强残留量的测定。 本标准适用于该产品的风险预警监测及相关科学研究。 本标准方法检出限为 10 g/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用
3、文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 3 原理 蜂蜜中杀草强残留用 1乙酸 -25丙酮水溶液提取，提取液经氮吹浓缩后，经过 PCX (混合型阳离子交换柱)固相萃取柱净化，将净化液吹至近干后用流动相定容，液 相色谱串联质谱法（LC-MS/MS）定性确证和定量检测，外标法定量。 4 试剂和材料 4.1 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682 规定的一级水。 4.2 丙酮。 4.3 二氯甲烷。 4.4 甲醇：色谱纯。 4.5 氨水。 4.6 乙酸：色谱纯。 4
4、.7 乙腈：色谱纯。 4.8 甲酸：色谱纯。 4.9 0.22 m 有机系过滤膜。 4.10 PCX 固相萃取柱或相当者（规格：60 mg/3 mL，使用前依次用 3 mL 甲醇、5 mL 水预淋洗，保持柱体湿润）。 4.11 杀草强标准品（纯度97.0）。 4.12 标准储备液：称取杀草强标准品（精确至 0.1 mg），用 50乙腈溶液配制成 1000 mg/L 的储备液，于 04下避光保存，有效期 3 个月。 DB34/T 15382011 2 4.13 标准工作液：将杀草强标准储备液用空白基质样液配制成适当浓度的系列基质标准工作溶液，待用。建议基质标准工作液现配现用。 5 仪器和设备 5
5、.1 液相色谱串联质谱仪（配大气压电喷雾离子源-ESI）。 5.2 分析天平（感量 0.1 mg 和 0.01 g）。 5.3 涡旋混合器。 5.4 离心机，转速不低于 3000 r/min。 5.5 氮吹仪。 5.6 固相萃取真空装置。 5.7 移液器。 5.8 具塞玻璃离心管、刻度样品管、梨形瓶、漏斗等玻璃仪器。 6 测定步骤 6.1 试样的制备与贮藏 对无结晶的样品，将其搅拌均匀；对有结晶的样品，在密闭情况下，置于不超过 60 的水浴中温热，振荡，待样品全部融化后搅匀，迅速冷却至室温；取约 0.5 kg 作为试样。制备好的试样置于样品瓶中，密封，并做上标记。试样于常温下保存。 6.2 提
6、取 称取 10 g 试样（精确到 0.01 g）置于50 m L 具塞玻璃离心管中，加入 20 mL 1乙酸 -25丙酮水溶液混匀后于振荡器上振荡 20 min，以 3000 r/mi n 离心 5 min，上清液过滤至 125 mL 分液漏斗中，残渣再用 10 mL 1乙酸 -2 5丙酮水溶液重复提取一次，合并上清液，加入 10 mL 二氯甲烷，振荡 1 min，静置分层，弃去下层二氯甲烷层。上层液用氮吹仪于 40 水浴上吹至约 2 mL，待净化。 6.3 净化 将 PCX 固相萃取柱预处理后，注入提取液，再分别用 3 mL 水、3 mL 甲醇淋洗，弃去流出液。用 2 mL 5氨化甲醇溶液洗
7、脱，收集洗脱液，于 40 下氮吹至近干，残留物用流动相定容后，过 0.22 m 滤膜，供液相色谱-串联质谱仪测定。 6.4 测定条件 6.4.1 液相色谱条件 a) 色谱柱：Atlantis dC18，3 m，150 mm2.1 mm（内径）或相当者； b) 流动相：乙腈+0.1甲酸水溶液（30+70）； c) 流速：200 L/min； d) 柱温：30； e) 进样量：10 L。 6.4.2 质谱条件 a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； DB34/T 15382011 3 b) 扫描方式：正离子扫描； c) 检测方式：多反应监测（MRM）； d) 干燥气温度：350 ； e) 干燥气流
8、速：10 L/min； f) 雾化器压力；40 psi； g) 毛细管电压：4000V； h) 最佳的碰撞电压及定性离子对、定量离子对、保留时间及碰撞能量见下表 1。 表1 多反应监测模式（MRM）参数 名称 母离子（m/z） 子离子（m/z） 驻留时间（ms） 碰撞电压（V） 碰撞能量（eV）杀草强 85 43（定量） 200 100 25 57（定性） 200 100 15 6.5 液相色谱-质谱/质谱测定 6.5.1 定性测定 按照上述条件测定样品和混合基质标准溶液， 如果样品检出的色谱峰保留时间与混合基质标准溶液相一致，并且在扣除背景后的样品质谱图中，所选择的离子均出现，而且所选择的离
9、子丰度比与浓度相当的混合基质标准溶液的离子丰度比相一致，相对离子丰 度的最大允许偏差不超过表 2 的规定，则可判断样品中存在被测物。 表2 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度（） 50 2050 1020 10 允许的相对偏差（） 20 25 30 50 6.5.2 定量测定 本方法采用外标校准曲线法单离子定量测定。为了减少基质对定量测定的影响，需用空白样液来制备所使用的一系列基质标准工作溶液，用基质标准工作溶液按浓度由小到大的顺序，分别进样来绘制标准曲线。并且保证所测样品中化合物的响应值均在仪器的线性范围内。混合基质标准溶液的液相色谱-质谱/质谱多反应监测（MRM）色谱图参见
10、附录 A。 6.6 空白实验 取不含杀草强的空白试样，按上述步骤测定。 6.7 平行试验 按以上步骤，对同一试样进行平行测定。 7 结果计算 7.1 标准曲线 使用基质标准工作溶液进样，绘制基质标准工作曲线。待测物残留的响应值应在检测方法的线性范围之内。 DB34/T 15382011 4 7.2 结果计算和表述 试样中杀草强残留量按式（1）计算： mVCX= . (1) 式中： X试样中杀草强残留量，单位为微克每千克（ g/kg）； C从标准曲线上得到的杀草强溶液浓度，单位为纳克每毫升（ng/mL）； V样品定容体积，单位为毫升（mL）； m试样的重量，单位为克（g）。 注： 报告测定结果至
11、小数点后二位。 8 方法准确度和精密度 8.1 准确度 本方法在 5 g/kg50.0 g/kg 间添加浓度的回收率在 75110之间。 8.2 精密度 在重复条件下获得的两次独立测定结果的的绝对差值不得超过算术平均值的 20。 DB34/T 15382011 5 A A 附 录 A （资料性附录） 空白基质标准样品多反应监测（MRM）色谱图 A.1 空白基质标准样品多反应监测（MRM）色谱图 空白基质标准样品多反应监测（MRM）色谱图见图 A.1。 0123450.05.0x1021.0x1031.5x1032.0x1032.5x1033.0x103TIC MRM (*)C o u n ts
12、 v s A cq u isitio n T im e (m in )B0123450.02.0x1024.0x1026.0x1028.0x1021.0x1031.2x1031.4x1031.6x1031.8x103M R M (85.000043.0000)BC o u n ts v s A c q u is itio n T im e (m in )0123450.02.0x1024.0x1026.0x1028.0x1021.0x1031.2x103MRM (85.000057.0000)Counts vs Acquisition Time(min)B图 A.1 空白基质标准样品多反应监测（ MRM）色谱图（添加浓度为 20 g/kg） _
