1、 ICS 65.020.30 B 43 DB51 备案号：30914-2011 四川省地方标准 DB51/T 13112011 山羊人工授精技术操作规程 Technical Regulations for Artificial Insemination in Goat Breeds 2011 - 06 - 27 发布 2011 - 07 - 01 实施四川省质量技术监督局 发布DB51/T 13112011 I 目 次 前 言 . II 1 范围 1 2 术语与定义 1 3 人工授精前的准备 1 4 采精 2 5 精液品质检查 3 6 精液稀释 4 7 精液保存与运输 4 8 输精 4 附录A
2、（资料性附录） 山羊人工授精所需器械、用具与药品 6 DB51/T 13112011 II 前 言 本标准附录A为规范性附录。 本标准由四川省畜牧食品局提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准发布。 本标准起草单位：西南民族大学 四川省畜禽繁育改良总站 乐至县天龙科技示范园 四川省简阳大哥大牧业有限公司 自贡市大地农业开发有限公司。 本标准主要起草人：字向东 王永 李键 傅昌秀 马力 付锡三 龚华斌 陈尚永。 DB51/T 13112011 1 山羊人工授精技术操作规程 1 范围 本标准规范了四川省丘区山羊人工授精中的采精、精液品质检查、精液稀释、输精等操作技术。 本标准适用于四川省丘区
3、山羊配种站点、种羊场、规模化自繁自养羊场（户）开展人工授精。 2 术语与定义 下列术语和定义适用于本标准。 2.1 人工授精 artifici al insemination，AI 采用器械采集公畜的精液，再用器械把经过检查和处理后的精液输入到母畜生殖道内，以代替公母畜自然交配而繁殖后代的一种繁殖技术。 2.2 精子活率 sperm motility 精液中呈直线前进运动的精子数占总精子数的百分比。 2.3 精子密度 sperm concentration 每毫升精液中所含的精子数。 3 人工授精前的准备 3.1 人工授精室建筑 人工授精室包括采精室和实验室两部分。采精室可以采用敞开棚舍，应宽
4、敞、平坦、安静、清洁、干燥、背风；实验室应为封闭建筑，包括无菌操作室、准备室、更衣消毒室和人员通道等结构。采精室和实验室之间设置传递窗，用于传递精液。 3.2 采精种公羊准备 选择健康、性欲旺盛、精液品质优良的良种成年公羊采精。 3.3 种公羊采精调教 利用假台羊采精，对初次参加采精的种公羊进行调教，调教方法如下： 将发情母羊的外阴分泌物涂擦到公羊的鼻孔周围，通过气味刺激诱导其爬跨台羊。 DB51/T 13112011 2 首先用发情母羊诱导爬跨数次，但不使其交配，等性欲增强后，将发情母羊牵走，让其爬跨假台羊。 将待调教的公羊栓系在假台羊附近，让其观看另一头已调教好的公羊爬跨假台羊采精，然后再
5、诱导其爬跨假台羊。 3.4 台羊准备 一般用健康发情母羊作为台羊，也可以用假台羊。台羊可以人为保定，也可以使用保定架。台羊保定架尺寸根据台羊体格大小而定。 3.5 器材准备 羊人工授精所需的假阴道、开张器、输精器及各种试剂、药品和其他器材按附录A 准备。 3.6 器材消毒 3.6.1 洗涤 先用洗衣粉水浸泡洗刷器械，温水反复冲净后，再用蒸馏水冲洗两遍以上，最后用消毒干净纱布擦干，即可。 3.6.2 消毒 对假阴道内胎、输精器、开张器、集精瓶、玻璃器皿等，先用70% 酒精擦拭或冲洗后，再用灭菌生理盐水冲洗2 次，即可。对毛巾、擦布、金属器械、工作服等，应用高压灭菌锅灭菌消毒。 4 采精 4.1
6、假阴道安装 操作步骤如下： 将消毒好的内胎装入外壳中，光滑面朝向内腔。 将假阴道外壳夹在安装者的大腿之间，使内胎的两端翻卷于外壳两端上，注意使内胎不得扭曲，内胎的中轴应与外壳中轴重合，然后，用橡皮圈将两端夹紧。 用75酒精棉球擦拭消毒内胎壁。 在假阴道夹层注入50左右的温水150ml180ml，使内胎腔内温度保持在3840。 从阴茎进口端开始，在内胎上涂凡士林，深度为假阴道的1/21/3。 安装上气门活塞，吹入适量空气，使内胎一端的中央形成“Y”形。 装上集精杯； 4.2 采精 操作步骤如下： 准备好台羊，并固定在保定架上或由助手人工固定。 将公羊牵至台羊处，控制2min3min后再让其爬跨，
7、以提高精液品质。 采精时，采精员蹲伏在台羊的右侧后方，右手握假阴道，假阴道口部向下，与地面成35度40度角。 当公羊爬跨台羊伸出阴茎时，采精员左手轻托阴茎包皮，将阴茎导入假阴道中，并保持假阴道与阴茎呈一直线。 DB51/T 13112011 3 公羊射精后从台羊身上滑下来时，采精员顺着公羊的动态将假阴道轻轻后移取下，并迅速将集精杯口向上、放出空气、取下集精杯，盖上盖子，做好标记，送精液处理室检查。 5 精液品质检查 5.1 一般性状检查 正常精液颜色为乳白色，略带腥味、膻味。射精量为 0.5ml1.2ml。凡带有腐败臭味、红色、绿色、褐色等不正常颜色的精液不能用于输精。 5.2 精子密度评定
8、采用显微镜观察法，在 400 倍600 倍下观察。在载玻片上滴 1 滴原精液（稀释前），加盖玻片，使精液分散成均匀一薄层，观察并评定。精子密度分为密、中和稀三级，评定标准如下： 密：视野中精子数目很多，精子间的空隙不足容纳1个精子的长度，看不清楚各个精子运动的活动情况。 中：视野中精子数目也很多，但精子间的空隙有容纳1个精子长度的空隙。 稀：视野中精子稀薄，精子间的空隙超过1个精子长度以上。 用于输精的精子密度应在“中”以上。 5.3 精子活率检查 取1滴精液于载玻片上，盖上盖玻片，置于37显微镜恒温 台或保温箱内，在400倍600倍显微镜下用目测法评定精子活率。评定标准：全部精 子都做直线前
9、进运动的评定为1，90%精子的评定为0.9，依次类推，可将精子活力分为10个等级。 用于输精的精子活率应在0.6以上。 5.4 精子数量测定 采用血细胞计数板法。操作方法与步骤如下： 用红细胞吸管吸取精液至0.5刻度处。 再吸入3%氯化钠溶液至101刻度处（即将原精液稀释200倍）。 用纱布擦去吸管尖端附着的精液，将精液注入到小试管中，充分混匀。 将稀释好的精液滴于计数板与盖玻片的边缘，使其自然注入并充满计数室。注意不要使精液溢出盖玻片之外，也不可因精液不足而致计算室内有气泡或干燥之处。 将计数板置于400倍600倍显微镜下，选择5个大方格计数。 将5个大方格内的精子总数乘以1000万，即为1
10、ml原精液中的精子数。 用于输精的精液的有效精子数应大于或等于7000万个/ml。 5.5 精子畸形率测定 以细玻璃棒蘸取精液1滴，滴于载玻片一端，再加1滴2滴0.9%NaCl溶液。 以另一载玻片的顶端呈35度角，滴于精液滴上，向另一端拉去，将精液均匀涂抹于载玻片上。 用0.5%的龙胆紫酒精溶液染色3min，水洗、候干即可镜检，也可用蓝墨水染色。 镜检：在显微镜下观察精子形态，凡巨型精子、短小精子、双头或双尾精子、头部或尾部弯曲精子、顶体脱落的精子、有原生质滴的精子等均为畸形精子。查数不同视野的500个精子，计算出精子的畸形率。输精精液的畸形精子数不得超过15%。 DB51/T 1311201
11、1 4 6 精液稀释 6.1 常用精液稀释液 6.1.1 生理盐水稀释液 稀释倍数一般不超过2倍。 6.1.2 葡萄糖卵黄柠檬酸钠稀释液 在100ml蒸馏水中加入葡萄糖3g、 柠檬酸钠1.4g， 过滤灭菌， 冷却至30左右，再加入新鲜卵黄20ml，混匀后即可。一般稀释倍数为2倍3倍。 6.1.3 牛奶或羊奶稀释液 用5层8层灭菌纱布过滤鲜奶， 煮沸消毒10min15min， 冷却至30左右， 取中间奶液作为稀释液。一般稀释倍数为2倍4倍。 6.2 精液稀释操作 先在稀释液中加青、链霉素各5万10万单位，再将定容后的稀释液徐徐加入集精杯中，轻轻摇匀。稀释时，稀释液与精液的温度要基本一致。 7 精
12、液保存与运输 7.1 常温保存 将稀释好的精液分装在贮藏瓶内，置于室内水中或1525的保温瓶内保存。有效保存时间1d2d。 7.2 低温保存 将稀释后的精液分装密封，缓慢降温至05。隔水置于 05的低温环境或冰箱内保存。有效保存时间2d3d。 7.3 精液运输 7.3.1 封装 将稀释好的精液注入经过消毒干燥的小试管中，上面覆盖0.5cm的液体石蜡，用橡皮塞塞严管口，再在试管外裹一层棉花并用纱布包好，贴好标签，注明公羊号、采精时间等。 7.3.2 运输 将装好精液的试管放入加有冰块或冰袋的广口保温瓶中运输。防止运输途中剧烈震荡和碰撞。 8 输精 8.1 输精时间 母羊发情后，可以采用一次输精或
13、两次输精，其输精时间为： DB51/T 13112011 5 8.1.1 一次输精 适宜的输精时间应在母羊的发情中期或后半期（发情后12h18h）。 8.1.2 两次输精 发情后8h18h输精1次，8h10h后再输精1次。 8.2 输精母羊的保定 对输精母羊应进行保定。体格中、小的母羊可采用单人倒提保定，即：由一名助手两腿夹住羊颈部，两手分别抓住母羊后腿提起，输精员靠羊腹部站立。对体格较大的母羊可采用保定架或双人保定。 8.3 输精剂量 采用子宫内输精或阴道内输精，两种方法输精剂量为： 8.3.1 子宫颈内输精量 原精液0.05ml0.1ml或稀释精液0.1ml0.2ml。 8.3.2 阴道内
14、输精量 采用阴道输精时，则输精量至少为0.2ml0.3 ml原精液。 8.4 输精操作 输精器中吸入精液，排出空气。 洗净并用消毒过的纱布或灭菌纸擦干母羊外阴部。 将消毒过的开张器均匀涂好润滑剂，再慢慢插入母羊阴道，旋转45度角后打开开张器，借助额灯或手电筒作为光源，寻找到子宫颈外口。子宫颈口的位置在阴道内，呈一小凸起，附近黏膜充血、颜色较深。 将输精器插入子宫颈内0.5cm1.0cm，徐徐注入精液。 母羊输精后应在保定位置停留3min5min，以防精液倒流。 DB51/T 13112011 6 AA 附 录 A （资料性附录） 山羊人工授精所需器械、用具与药品 1、 消毒用具及主要设备 手提
15、式高压蒸汽灭菌器，1 台； 煮沸消毒器，1 台； 酒精灯，1 盏2 盏； 紫外线灯，1 个2 个； 400 倍600 倍生物显微镜 1 台、显微镜恒温盘或显微镜保温箱 1 个； 0.1g100g 天平,1 台； 小型恒温培养箱，1 台；小型鼓风干燥箱，1 台。 2、 主要试剂与药品 葡萄糖、柠檬酸钠、氯化钠、碳酸氢钠等化学试剂，分析纯，各 500g；青霉素、链霉素，粉针剂，若干瓶；5%新洁尔灭溶液，500ml/瓶，若干瓶；无水乙醇、95%医用酒精，各 2 瓶；0.5%龙胆紫溶液。 3、 采精用具 羊用假阴道外壳、内胎、塞子（带气嘴）、集精杯，按 1323 的比例配置 2 套3 套； 温度计、玻
16、璃棒、润滑剂、长柄钳等；热水瓶。 4、 精液品质检查用具 1ml5ml 吸管、5ml 量杯、50ml100ml 玻璃量杯、500ml1000ml 量筒，各 1 套； 蒸馏水瓶、烧杯、三角烧瓶、玻璃皿、漏斗、洗瓶、搪瓷杯等，各若干； 载玻片、盖玻片，各 1 盒； 长柄镊子、剪刀、玻璃棒、酒精灯，各 1 个2 个； 红细胞吸管、血细胞计数板，各 1 个2 个； 滤纸，1 盒； 擦镜纸，1 本； 试管刷、纱布等洗刷用具、用品，若干。 5、 配制稀释液用具及运输、保存精液容器 量筒、0.1g100g 天平、药匙、漏斗架、滤纸、冰箱、广口瓶、广口保温瓶、贮精瓶等。 6、 输精用具 玻璃输精器（1ml）或金属输精器，若干； 金属开张器，2 个。 酒精灯、额灯或手电筒，各 1 个。 5、羊编号、记录等用品用具 耳标，若干；耳标钳，1 把；记号笔，1 支；各种专用纪录表格或记录本，若干。 6、工作用品用具 卫生洁具，若干；工作服、鞋、帽、手套等，若干； 水桶、面盆、毛巾、肥皂等，若干。 _
