1、Numro de rfrence ISO 10705-2:2000(F) ISO 2000 NORME INTERNATIONALE ISO 10705-2 Premire dition 2000-04-01 Qualit de leau Dtection et dnombrement des bactriophages Partie 2: Dnombrement des coliphages somatiques Water quality Detection and enumeration of bacteriophages Part 2: Enumeration of somatic c
2、oliphagesISO 10705-2:2000(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune
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7、 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 734 10 79 E-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch I mpri menSuis se ii ISO 2000 Tous droits rservsISO 10705-2:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs iii Sommaire Page 1 Domaine dapplication.1 2 Rfrences normatives .1 3 Termes et dfinitions.2 4 Prcaut
8、ions relatives la scurit.2 5 Principe.2 6 Diluant, milieux de culture et ractifs2 6.1 Matriaux de base2 6.2 Diluant.3 7 Appareillage et verrerie.3 8 Cultures microbiologiques de rfrence.4 9 chantillonnage .4 10 Prparation des matriaux dessai 5 10.1 Mise en culture et entretien des souches-htes 5 10.
9、2 talonnage des mesurages dabsorbance pour le dnombrement des micro-organismes cultivables 6 11 Mode opratoire.7 11.1 Prparation des prcultures.7 11.2 Mode opratoire normalis.7 11.3 Mode opratoire pour les chantillons prsentant une abondante flore bactrienne .8 11.4 Mode opratoire pour les chantillo
10、ns contenant un faible nombre de phages 8 11.5 Essai de prsence/absence8 11.6 Assurance qualit9 12 Expression des rsultats 10 12.1 Modes opratoires de comptage des plages (11.2 11.4) 10 12.2 Essai de prsence/absence (11.5)10 13 Rapport dessai 10 Annexe A (normative) Milieux de culture, ractifs et di
11、luant .11 Annexe B (informative) Description gnrale des bactriophages somatiques 14 Annexe C (informative) Mise en culture du bactriophage X174 .15 Bibliographie .16ISO 10705-2:2000(F) iv ISO 2000 Tous droits rservs Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mo
12、ndiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, go
13、uvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes da
14、ns les Directives ISO/CEI, Partie 3. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que
15、 certains des lments de la prsente partie de lISO 10705 peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. La Norme internationale ISO 10705-2 a t
16、labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 4, Mthodes microbiologiques. LISO 10705 comprend les parties suivantes, prsentes sous le titre gnral Qualit de leau Dtection et dnombrement des bactriophages: Partie 1: Dnombrement des bactriophages ARN F spcifiques Partie 2: Dn
17、ombrement des coliphages somatiques Partie 3: Mthodes par concentration Partie 4: Dnombrement des bactriophages infectants des Bacteroides fragilis Lannexe A constitue un lment normatif de la prsente partie de lISO 10705. Les annexes B et C sont donnes uniquement titre dinformation.NORME INTERNATION
18、ALE ISO 10705-2:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtection et dnombrement des bactriophages Partie 2: Dnombrement des coliphages somatiques 1 Domaine dapplication La prsente partie de lISO 10705 spcifie une mthode de dtection et de dnombrement des coliphages somatiques par incubat
19、ion de lchantillon avec une souche-hte approprie. La mthode est applicable tous les types deaux, aux extraits de sdiments et de boues, si ncessaire aprs dilution. La mthode est galement applicable aux extraits de coquillages. Dans le cas dune faible population de phages, une tape de prconcentration
20、peut savrer ncessaire pour laquelle une Norme internationale distincte sera labore ultrieurement. NOTE Il est souhaitable que les Normes Internationales soient adoptes le plus largement possible. La prsente partie de lISO 10705 comporte des rfrences des procdures alternatives qui parent la ncessit d
21、utiliser du matriel ou des quipements coteux qui peuvent ne pas tre aisment disponibles dans les pays en dveloppement. Lutilisation de ces procdures alternatives naffecte pas les performances de la prsente mthode. 2 Rfrences normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qu
22、i, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente partie de lISO 10705. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvisions de ces publications ne sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente partie
23、de lISO 10705 sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document normatif en rfrence sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationa
24、les en vigueur. ISO 31-0:1992, Grandeurs et units Partie 0: Principes gnraux. ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai. ISO 5667-1:1980, Qualit de leau chantillonnage Partie 1: Guide gnral pour ltablissement des programmes dchantillonnage. ISO 5667-2:1991,
25、Qualit de leau chantillonnage Partie 2: Guide gnral sur les techniques dchantillonnage. ISO 5667-3:1994, Qualit de leau chantillonnage Partie 3: Guide gnral pour la conservation et la manipulation des chantillons. ISO 6887:1983, Microbiologie Directives gnrales pour la prparation des dilutions en vu
26、e de lexamen microbiologique. ISO 8199:1988, Qualit de leau Guide gnral pour le dnombrement des micro-organismes sur milieu de culture.ISO 10705-2:2000(F) 2 ISO 2000 Tous droits rservs Guide ISO/CEI 2, Normalisation et activits connexes Vocabulaire gnral. 3 Termes et dfinitions Pour les besoins de l
27、a prsente partie de lISO 10705, les termes et dfinitions donns dans le Guide ISO/CEI 2 ainsi que la dfinition suivante sappliquent. 3.1 coliphage somatique virus des bactries capable dinfecter certaines souches-htes dEscherichia coli (et des souches apparentes) en se fixant sur la paroi bactrienne a
28、u dbut du processus dinfection NOTE Les coliphages somatiques provoquent lapparition de plages visibles (zones de lyse) sur un tapis confluent de bactries-htes cultives dans des conditions appropries. 4 Prcautions relatives la scurit La souche-hte utilise pour les besoins de la prsente partie de lIS
29、O 10705 est une souche non pathogne pour lhomme et lanimal. Il convient de la manipuler conformment aux procdures normales (nationales et internationales) de scurit des laboratoires danalyses bactriologiques. Les coliphages somatiques ne sont pathognes ni pour lhomme ni pour lanimal, mais certains d
30、entre eux sont trs rsistants la dessiccation. Il convient donc de prendre les prcautions appropries pour viter les contaminations croises des chantillons, plus particulirement lors de la manipulation ou de lexamen de cultures de concentration leve ou lors de lensemencement de cultures de souches-hte
31、s. Ces oprations doivent tre ralises dans une enceinte pour risque biologique ou dans une zone spare du laboratoire. Le chloroforme est une substance cancrigne. Prendre les prcautions de scurit qui simposent ou utiliser une autre mthode dgale efficacit. 5P r i n c i p e Lchantillon est mlang un faib
32、le volume de milieu de culture nutritif semi-solide. Une culture de la souche-hte y est ajoute et le mlange est coul dans une bote contenant du milieu de culture nutritif solide. Aprs cela, les botes sont incubes et examines pour y reprer lapparition de plages. Les rsultats sont exprims en nombre de
33、 particules formant des plages, pfp (galement identifies par units formant des plages, ufp), par unit de volume dchantillon. 6 Diluant, milieux de culture et ractifs 6.1 Matriaux de base Pour la prparation des milieux de culture et des ractifs, utiliser des produits de qualit constante ainsi que des
34、 ractifs de qualit analytique, et suivre les instructions indiques dans lannexe A. Pour toute information relative la conservation, se reporter lISO 8199, sauf si une indication est prcise dans la prsente partie de lISO 10705. Des milieux de culture complets dshydrats peuvent galement tre utiliss. D
35、ans ce cas, suivre scrupuleusement les instructions du fabricant. Pour la prparation des milieux de culture, utiliser de leau distille dans des rcipients en verre ou de leau dionise, exempte de substances susceptibles dinhiber la croissance des bactries dans les conditions de lessai et conforme lISO
36、 3696. NOTE Lutilisation de produits chimiques dautres qualits est permise, sous rserve de dmontrer quils ont une performance gale pour lessai.ISO 10705-2:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 3 6.2 Diluant Pour diluer lchantillon, utiliser une solution peptone saline (A.7) ou tout autre diluant confo
37、rme lISO 6887. 7 Appareillage et verrerie Matriel courant de laboratoire danalyses microbiologiques, et 7.1 tuve air chaud pour strilisation en chaleur sche et autoclave. lexception des appareillages fournis sous forme strile, la verrerie et les autres matriels doivent tre striliss conformment aux i
38、nstructions indiques dans lISO 8199. 7.2 Incubateur ou bain deau, contrl thermostatiquement (36 2) C. 7.3 Incubateur ou bain deau, contrl thermostatiquement (36 2) C et quip dun dispositif dagitation, par exemple un plateau tournant (100 10) tr/min. 7.4 Bain deau ou bloc chauffant, contrl thermostat
39、iquement (45 1) C. 7.5 Bain deau ou dispositif quivalent, permettant de faire fondre la glose. 7.6 pH-mtre. 7.7 Appareil de comptage, quip dune source de lumire indirecte, oblique. 7.8 Conglateur, contrl thermostatiquement (20 5) C. 7.9 Conglateur, contrl thermostatiquement (70 10) C ou rservoir de
40、stockage azote liquide. 7.10 Spectrophotomtre, capable de contenir des cuves de 1 cm de trajet optique ou le tube latral dune fiole nphlomtrique (7.17), et muni dun filtre de longueur donde allant de 500 nm 650 nm avec une largeur de bande maximale de 10 nm. Verrerie de laboratoire strile dusage cou
41、rant en microbiologie ou matriel usage unique strile en plastique, conforme lISO 8199, et 7.11 Botes de Petri, ventiles, de 9 cm ou 14 cm 15 cm de diamtre. 7.12 Pipettes gradues, de 0,1 ml, 1 ml, 5 ml et 10 ml de capacit et pipettes Pasteur. 7.13 Flacons en verre, de volume appropri. 7.14 Tubes de c
42、ulture, avec bouchons ou dispositifs quivalents. 7.15 prouvettes gradues, de capacit approprie. 7.16 Fioles coniques, de 250 ml 300 ml de capacit, munies de bouchons en ouate ou de tout autre matriau appropri. 7.17 Cuves optiques,de1 0mmd et ra je to pt i qu eo ufioles coniques nphlomtriques, de 250
43、 ml 300 ml de capacit, munies de tubes latraux pouvant tre adapts sur un spectrophotomtre (7.10) (voir la Figure 1) et de bouchons en ouate ou de tout autre matriau appropri. 7.18 Units de filtration sur membrane, pour la dcontamination, de 0,2 m de porosit. 7.19 Tubes en plastique, bouchs, de 1,5 m
44、l 3 ml de capacit.ISO 10705-2:2000(F) 4 ISO 2000 Tous droits rservs 7.20 Rfrigrateur, rgl une temprature de (5 3) C. Figure 1 Fiole conique nphlomtrique pour la mise en culture des souches-htes 8 Cultures microbiologiques de rfrence Pour les chantillons contenant une faible flore bactrienne (eau pot
45、able, eaux naturelles non pollues), utiliser la souche Escherichia coli C, ATCC 13706. Pour les chantillons contenant une abondante flore bactrienne (eaux naturelles pollues, eaux uses), il convient dutiliser le mutant rsistant lacide nalidixique, souche Escherichia coli CN (ATCC 700078 1), galement
46、 connue sous le nom de souche WG5 2. Utiliser le bactriophage X174 (ATCC 13706-B1) pour la prparation du tmoin de rfrence (11.6.1). NOTE Les souches ATCC sont disponibles lAmerican Type Culture Collection, 10801 University Boulevard, Manassas, VA 20110. 9 chantillonnage Prlever des chantillons et le
47、s transporter au laboratoire conformment lISO 8199, lISO 5667-1, lISO 5667-2 et lISO 5667-3.ISO 10705-2:2000(F) ISO 2000 Tous droits rservs 5 10 Prparation des matriaux dessai 10.1 Mise en culture et entretien des souches-htes 10.1.1 Gnralits La mise en culture et lentretien des souches-htes impliquent diffrentes tapes rsumes la Figure 2. Figure 2 Schma de la mise en culture et d
