1、Numro de rfrence ISO 12890:1999(F) ISO 1999 NORME INTERNATIONALE ISO 12890 Premire dition 1999-12-15 Qualit de leau Dtermination de la toxicit vis-vis des embryons et larves de poissons deau douce Mthode semi- statique Water quality Determination of toxicity to embryos and larvae of freshwater fish
2、Semi-static methodISO 12890:1999(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnfici
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7、tale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 734 10 79 E-mail copyrightiso.ch Web www.iso.ch I mpri menSuis se ii ISO 1999 Tous droits rservsISO 12890:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs iii Sommaire Page 1 Domaine dapplication.1 2 Rfrences normatives .1 3 Termes et dfinitions.2 4 P
8、rincipe.2 5 Environnement dessai3 6 Poisson dessai3 7 Ractifs .3 8 Appareillage .4 9 Mode opratoire.5 10 Rsultats.6 11 Rapport dessai 7 Annexe A (informative) Conditions de ponte des ufs du poisson-zbre 9 Annexe B (informative) Exemples de donnes relatives la mortalit initiale et aux temps mdians po
9、ur lclosion et le taux de survie11 Bibliographie .14ISO 12890:1999(F) iv ISO 1999 Tous droits rservs Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est
10、en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troit
11、ement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 3. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont so
12、umis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. La Norme internationale ISO 12890 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Q u a l i t d el e a u , sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. Les annex
13、es A et B de la prsente Norme internationale sont donnes uniquement titre dinformation.ISO 12890:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs v Introduction Au cours de la priode de reproduction (gamtogense) et des premiers stades de leur vie (stades embryonnaire et larvaire), les poissons sont particulireme
14、nt sensibles aux effets, par exemple, des produits chimiques. Dterminer la toxicit aux premiers stades de dveloppement reprsente par consquent un indice plus prcis de la sensibilit des poissons que celui observ lors de la dtermination de la toxicit aigu vis-vis de poissons adultes. Seuls des essais
15、comprenant tous les stades de la vie des poissons pourront donner une estimation prcise de la toxicit chronique des produits chimiques vis-vis des poissons. Une exposition limite en fonction des stades de la vie peut rduire la sensibilit et conduire sous-estimer la toxicit chronique. La prsente mtho
16、de utilisant des embryons et larves est par consquent considre comme moins significative en matire de sensibilit quun essai ralis sur toute la dure de vie ainsi que par rapport un essai effectu aux premiers stades de la vie comprenant la croissance des larves pendant plusieurs semaines. La diffrence
17、 de sensibilit entre ces types dessais variera en fonction de plusieurs facteurs, y compris les produits chimiques toxiques. Il nest par consquent pas possible de gnraliser le rapport de sensibilit entre les essais sur toute la dure de vie, les essais au stade embryo- larvaire (y compris la croissan
18、ce) et les essais au stade embryolarvaire (non compris la croissance). Lexprience a cependant montr que pour de nombreux produits chimiques, la sensibilit obtenue avec les essais effectus au stade embryolarvaire correspondait celle des essais sur toute la dure de vie. De nombreux essais au stade emb
19、ryolarvaire ont t raliss en Europe avec le poisson deau douce Danio rerio (Hamilton-Buchanan) Teleostei, Cyprinidae, plus communment appel poisson-zbre. Cette espce scientifiquement appele Brachydanio rerio a t rcemment renomme Danio rerio. Lannexe A donne des informations dtailles sur la conservati
20、on des poissons-gniteurs et la ponte dufs destins aux essais raliser sur cette espce. Lannexe B fournit des rfrences relatives aux tudes prcdemment ralises sur le sujet et aux essais effectus au stade embryolarvaire. La rfrence au poisson-zbre nexclut pas lutilisation dautres espces de poissons deau
21、 douce pour lesquelles des essais sont disponibles.NORME INTERNATIONALE ISO 12890:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtermination de la toxicit vis-vis des embryons et larves de poissons deau douce Mthode semi- statique 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie
22、 une mthode semi-statique de dtermination de la toxicit des produits chimiques, des eaux et eaux rsiduaires aux premiers stades embryonnaires et larvaires dune espce de poisson deau douce, Danio rerio (Hamilton-Buchanan), Teleostei, Cyprinidae (plus communment appel poisson-zbre). Le cas chant, un e
23、ssai de toxicit aigu peut tre inclus en utilisant Danio rerio pour dterminer la CL 50 -9 6hd u poisson-zbre conformment lISO 7346-1, lISO 7346-2 ou lISO 7346-3. La mthode peut tre utilise avec des poissons deau douce autres que le poisson-zbre si des modifications appropries sont apportes aux condit
24、ions dessai, et notamment pour ce qui concerne la temprature et le volume par biomasse de poisson. 2 Rfrences normatives Les documents normatifs suivants contiennent des dispositions qui, par suite de la rfrence qui y est faite, constituent des dispositions valables pour la prsente Norme internation
25、ale. Pour les rfrences dates, les amendements ultrieurs ou les rvisions de ces publications ne sappliquent pas. Toutefois, les parties prenantes aux accords fonds sur la prsente Norme internationale sont invites rechercher la possibilit dappliquer les ditions les plus rcentes des documents normatifs
26、 indiqus ci-aprs. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document normatif en rfrence sapplique. Les membres de lISO et de la CEI possdent le registre des Normes internationales en vigueur. ISO 5667-16, Q u a l i t d el e a u chantillonnage Partie 16: Lignes directrices pour les essais bi
27、ologiques des chantillons. ISO 6341, Qualit de leau Dtermination de linhibition de la mobilit de Daphnia magna Straus (Cladocera, Crustacea) Essai de toxicit aigu. ISO 7346-1, Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton
28、-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae) Partie 1: Mthode statique. ISO 7346-2, Qualit de leau Dtermination de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae) Partie 2: Mthode semi-statique. ISO 7346-3, Qualit de leau Dterminati
29、on de la toxicit aigu ltale de substances vis-vis dun poisson deau douce Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan (Teleostei, Cyprinidae) Partie 2: Mthode avec renouvellement continu.ISO 12890:1999(F) 2 ISO 1999 Tous droits rservs 3 Termes et dfinitions Pour les besoins de la prsente Norme internationale
30、, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 concentration avec effet CE X (effet pour X %) concentration dduite par exprience et calcule pour affecter X % des organismes dessai NOTE La CE 50 pour le taux de survie correspond la CL 50 , concentration ltale pour 50 % des organismes dessai. 3.
31、2 concentration minimale avec effet observ LOEC la plus faible concentration de lchantillon pour essai pour laquelle lon observe un effet significatif ( pu 0,05) par rapport au tmoin NOTE Pour toute concentration suprieure la LOEC, leffet observ est gal ou suprieur celui observ pour la NOEC. 3.3 con
32、centration sans effet NEC point quivalent zro ZEP estimation de la concentration laquelle leffet est gal celui du tmoin non trait NOTE La NEC est particulirement utile lorsque lon observe une stimulation (hormsis) de faibles concentrations. 3.4 concentration sans effet observ NOEC la concentration i
33、mmdiatement infrieure la LOEC. 4P r i n c i p e Des ufs frachement fconds sont exposs une srie de concentrations de lchantillon pour essai ainsi que des tmoins (concentration 0). Pour des raisons pratiques, dans la prsente Norme internationale les ufs sont considrs comme des embryons. Le nombre dufs
34、 ou de larves clos et survivants dans toutes les solutions dessai renouveles quotidiennement (mthode semi-statique) est consign une fois par jour. Aucune nourriture nest donne. La dure normale dexposition pour cet essai est de 10 jours mais elle peut tre prolonge jusqu 14 jours si lon dsire augmente
35、r sa sensibilit. Lensemble de lessai, y compris les prparations et les calculs, se droule sur environ 4 semaines. Les donnes obtenues sont utilises pour calculer les temps mdians pour lclosion et le taux de survie dans les concentrations dessai et les tmoins. Les concentrations sans effet (NEC) sont
36、 dtermines partir du rapport effets- concentration pour lclosion et le taux de survie. Les concentrations avec effet sur un pourcentage dsir (CE X ) peuvent galement tre dtermines et les rsultats valus en fonction de la concentration maximale sans effet observ (NOEC) et de la concentration minimale
37、avec effet observ (LOEC) par rapport aux tmoins. Avant de procder la dtermination, il peut tre utile de dterminer la toxicit aigu de lchantillon (CL 50 -9 6h ) pour le poisson-zbre conformment lISO 7346-1, lISO 7346-2 ou lISO 7346-3.ISO 12890:1999(F) ISO 1999 Tous droits rservs 3 5 Environnement des
38、sai Le stockage des solutions et lexposition des organismes dessai comme dcrit dans la prsente Norme internationale doivent tre effectus sous un clairage normal de laboratoire avec une photopriode de lumire/obscurit de 12 h/12 h, 14 h/10 h ou 16 h/18 h. Les solutions mres peuvent tre conserves au fr
39、oid et dans lobscurit, le cas chant. Latmosphre dessai doit tre de (26 2) C et exempte de vapeurs ou de poussires toxiques pour lorganisme dessai. La conservation des poissons-gniteurs ainsi que les manipulations et essais doivent avoir lieu dans des pices dont lair est exempt de concentrations dang
40、ereuses de poussires et de vapeurs toxiques. 6 Poisson dessai Conduire lessai sur Danio rerio, plus communment appel poisson-zbre, dorigine spcifie. Lessai doit tre effectu sur des ufs frachement fconds (embryons) issus de poissons-gniteurs pralablement conditionns pendant au moins deux semaines dan
41、s des conditions environnementales spcifies (voir article 5). Leau pour lacclimatation et le frai des poissons-gniteurs doit tre de qualit reconnue pour la reproduction des poissons et doit avoir des caractristiques (pH, duret et oxygne dissous) similaires celles de leau de dilution (7.1). Prendre l
42、es ufs pondus du matin 1 h environ aprs avoir allum la lumire. Ne commencer lessai (heure 0) que 2 h 3 h plus tard. Les ufs (embryons) utiliss au dbut de lessai (heure 0) sont donc gs de 2 h 4 h. Ceci correspond aux stades de dveloppement de la blastula. NOTE Lannexe A fournit les conditions de pont
43、e des ufs. 7 Ractifs 7.1 Eau de dilution Tous les produits chimiques utiliss pour la prparation de leau de dilution doivent tre de qualit analytique et le diluant eau doit tre de puret leve. Il convient que leau distille ou dionise utilise pour la production de leau de dilution soit exempte de subst
44、ances chimiques et ait une valeur de conductivit suprieure 18 M/cm. Il convient alors dajouter les sels pour prparer leau de dilution. Leau de dilution doit tre prpare 1 j 7 j avant utilisation et doit tre conserve dans des rcipients en matriau chimiquement inerte soigneusement nettoys. Leau de dilu
45、tion doit avoir un pH de 7,5 0,2 et une duret de (100 10 )mgd eCa CO 3 par litre. Elle doit tre prpare comme suit. a) Solution de chlorure de calcium: dissoudre 11,76 g de CaCl 2 ,2H 2 O dans de leau et ajuster 1 l avec de leau. b) Solution de sulfate de magnsium: dissoudre 4,93 g de MgSO 4 ,7H 2 O
46、dans de leau et ajuster 1 l avec de leau. c) Solution de carbonate dhydrogne: dissoudre 2,59 g de NaHCO 3 dans de leau et ajuster 1 l avec de leau. d) Solution de chlorure de potassium: dissoudre 0,23 g de KCl dans de leau et ajuster 1 l avec de leau. Ajouter 100 ml de chacune des quatre solutions m
47、entionnes de a) d) ci-dessus environ 5 l deau et diluer jusqu obtenir un volume total de 10 l. Cette eau est compose partir des solutions mres utilises dans lessai de toxicit aigu Daphnia (ISO 6341) mais elle est utilise sous une forme plus dilue. Arer leau de dilution laide dun tube de verre jusqu ce que la concentration en oxygne dissous atteigne 90 % 100 % de la valeur de saturation dans lair 26 C. La valeur du pH se stabilise g
