1、卫 生 微 生 物 学 详 细 笔 记 第一章 绪论 第一 节 卫生 微生 物的发展史 （了解 ） 一 、 启 蒙时 期 对病 原 的认 识 包括 文明 古国 对病 原的 认识 、卫 生学 的启 蒙和 早期 对微 生物 的认 识。 二 、 微 生物 学 的初 创 和奠 基 时 期 （ 一 ） 、 微 生物 的发 现 ： 17 世 纪 ， 荷 兰人 列文 虎 克利 用自 制显 微镜 ， 第 一次 看到 微小 生 物， 开创 了用 实验 的方 法研 究微 生物 的先 河。 （ 二 ） 、 微 生物 学学 科的 形成 ： 巴 斯德 和郭 霍是 微生 物学 的奠 基人 。 巴 斯德 的成 就 : “
2、巴 氏 消毒 法 ” 应 用于 各种 食物 和饮 料消 毒 ； 发 现并 根除 一种 侵害 蚕卵 的细 菌 ， 拯 救了 丝绸 工 业 ； 意 识到 许多 疾病 由微 生物 引起 ， 建 立了 微生 物理 论 。 郭 霍的 成就 ： 创 用了 固体 培养 基 ， 从环 境和 病人 标本 中分 离纯 化培 养和 鉴定 细菌 ，为 病原 体的 发现 提供 了重 要的 实验 手段 。 三 、 近 代与 现 代微 生 物学 时 期 包括 疾病 预防 的卫 生学 起源 和卫 生学 学科 的形 成。 第二 节 卫生 微生 物学的定义 一 、 定 义（ 掌 握） 卫 生 微 生 物 学 （ sa nita
3、ry mi crob iolo gy ） ： 是 研 究 微 生 物 与 其 环 境 相 互 作 用 的 规 律 、 对 人类 健康 的影 响以 及应 对方 略的 科学 。 二 、 卫 生微 生 物学 定 义的 范 畴 （ 掌 握） 广 义 从 上 讲 ， 卫 生微 生 物 包 括 存 在 于 自 然 界 的所 有 微 生 物 ， 包 括 致 病 微 生物 （ 较 少 ） 和 非 致病 微生 物 （ 较 多 ） ； 从 狭义 上讲 ， 卫 生微 生物 不包 括引 起传 染病 流行 的病 原 微生 物 ； 卫 生 微生 物的 定义 是广 义的 。 三 、 卫 生微 生 物学 的 研究 内 容 （
4、 熟 悉） （一 ） 、研 究微 生物 在环 境中 的分 布消 长规 律 1. 空间 分布 2. 时间 分布 3. 不同 环境 的消 长规 律 4. 不同 环境 中的 种类 分布 5. 不同 环境 的生 存能 力 6. 不同 环境 的致 病能 力（二 ） 、环 境因 素在 微生 物传 播疾 病中 的作 用 （三 ） 、研 究卫 生微 生物 的检 验技 术和 方法 检验 的目 的： 对微 生物 进行 定性 、定 量、 来源 分析 检 验方 法： 浓缩 （提 高 检出 率 ） 、 免疫 学（ 增强 特异 性 ） 、 各种 标记 （增 加能 见 度 ） 、 分子 生物 学方 法（ 增加 准确 度 ）
5、 。 （四 ） 、研 究和 制定 卫生 微生 物标 准 为卫 生微 生物 监督 工作 提供 理论 依据 。 （五 ） 、研 究利 用微 生物 解决 卫生 学问 题 1 、微 生物 检测 环境 污染 ：沙 门氏 菌致 突变 试验 （ Am e te s t ）检 测污 染物 的致 突变 性； 发 光细 菌检 测污 染物 的急 性、 毒性 。 2 、微 生物 治理 污染 - 环境 生物 技术 第三 节 卫生 微生 物与相关学 科的关 系（理 解） 一 、 卫 生微 生 物学 与 医学 微 生 物 学 卫生 微生 物学 与医 学微 生物 学的 区别 （熟 悉） 二 、 卫 生微 生 物学 与 环境
6、微 生 物 学 （有 交 叉 ） 环境 微生 物学 ：研 究自 然环 境微 生物 以预 防， 控制 ，治 理环 境污 染为 目的 卫生 微生 物学 ：研 究人 体外 环境 中（ 包括 体腔 环境 ）微 生物 ，预 防和 控制 人群 疾病 三 、 卫 生微 生 物学 与 其他 预 防 医 学 学科 包括 环境 卫生 学、 食品 卫生 学、 流行 病学 相关 知识 并为 这些 学科 打下 了基 础。 第四 节 卫生 微生 物学的应用 及其研 究前景 （了 解） 1. 在感 染性 疾病 控制 和治 疗中 的应 用； 2. 在感 染性 疾病 预防 中的 应用 ；3. 在生 物病 原性 突发 事件 中的
7、 应用 ； 4. 在制 定国 家标 准和 行业 规范 服务 中的 应用 ； 5. 在应 对生 物危 害和 恐怖 中的 应用 ； 6. 在科 学发 展和 科学 研究 中的 应用 。 第二章 微生物生态 第一 节 基本 概念 与研究范畴 一 、 基 本概 念 、 生 态 学 （ ec olog y ； 掌 握 ） ： 生 态 学 是 一 门 研 究 生 命 系 统 与环 境 系 统 间 相 互 作 用 规 律 的 科 学。 从宏 观到 微观 一般 可分 为 10 个层 次。 （一 ） 、生 态系 统（ 了解 ） 生 态 系 统 是 指 在 一定 空 间 内 存 在 的 各 种 生 物 体所 组 成
8、 的 生 物 群 落 与 非 生 物的 环 境 因 子 之 间相 互依 存、 相互 制约 ，具 有一 定功 能和 独立 性的 动态 复合 体系 。 生 物 圈 是 地 球 表 面全 部 生 物 以 及 与 之 相 关 的 自然 环 境 的 总 称 ， 包 括 水 生 物圈 、 地 上 岩 石 生物 圈和 大气 生物 圈。 （二 ） 、微 生物 生态 学 微 生 物 生 态学 （ mi c r o bi a l ec o l og y ； 掌 握 ） ： 是 在 微 生 物 学 和 生 态 学 发 展 过 程 中 形 成 的 交 叉 学 科 ， 为 生 态 学 的 一 个 分 支 学 科 ， 是
9、 研 究 微 生 物 与 其 生 态 环 境 、 微 生 物 群 体 之 间 相互 关 系、 相互 作用 的学 科。 生境 （了 解 ） ：是 指微 生物 能够 在其 中生 存并 执行 其特 定功 能的 微小 环境 ，又 称微 环境 。 可理 解为 微生 物的 “ 住址 ” 龛 （ 了 解 ） ： 不 但包 含了 生物 生存 的空 间概 念 ， 还 蕴含 着功 能作 用以 及在 不同 温度 、 湿 度 等环 境变 化中 的位 置。 可理 解为 微生 物的 “ 职业 ” 第二 节 微生 物生 态学的基本 概念 一 、 微 生 物 与环 境 相 互 作 用的 基本 规 律 （熟 悉 ） （一 ）
10、、限 制因 子定 律 限制 因子 定律 （ la w of re s t ri ctio n fa c t or ）又 称最 小因 子定 律， 适用 于 “ 稳定 状态 ” 的 环 境 ， 其 核 心 是 ： 任 何 生 物 的 总 产 量 或 生 物 量 决 定 于 所 存 环 境 中 该 生 物 生 长 所 需 的 数量 最 少 或 浓 度 最 低 营 养 因 子 。 数 量 最 少 或 浓 度 最 低 是 指 其 含 量 与 微 生 物 需 要 量 之 比 所 占 的 百分 比 最 低 。 当 其 中 某 物 质 可 利 用 的 量 最 接 近 于 所 需 的 临 界 最 小 量 时 ，
11、 这 种 物 质 就 成 为 限 制 因子 。 在 考 虑 限 制 因 子 时 ， 不 仅 要 注 意 其 在 微 生 物 环 境 中 的 浓 度 ， 还 应 关 注 这 种 因 子 是 否 能 被微 生物获 取。 （二 ） 、耐 受性 定律 耐 受 性 定 律 （ la w of to l e r an c e ） 是 指 在一 个 生 态 环 境 中 ， 微 生 物 的 生 长 繁 殖 和 消 长 不 但 取 决 于 营 养 ， 而 且 受 各 种 物 理 、 化 学 因 素 等 其 他 因 素 的 影 响 。 生 态 因 子 在 数 量 和 质 量上 的 不 足 或 过 多 均 会 影
12、响 生 物 的 存 亡 ， 生 物 对 这 些 生 态 因 子 所 能 耐 受 的 最 大 值 和 最 小 值 之 间的 范 围 称 为 耐 受 限 度 。 耐 受 性 定 律 的 优 点 是 ： 考 虑 营 养 因 素 的 同 时 也 考 虑 了 其 它 生 态 因 子 ，可 以 解 释 微 生 物 对 环 境 因 子 耐 受 范 围 的 宽 窄 与 其 分 布 广 泛 性 的 关 系 和 一 个 生 态 环 境 中 微 生 物优 势 种形 成的 原因 。 （三 ） 、综 合作 用定 律 综合 作用 定律 （ co mbin ed la w ）是 指一 种生 物或 生物 类群 的存 在和 繁
13、殖 取决 于综 合条 件 ， 任 何 一 种 接 近 或 超 过 耐 受 性 限 度 的 条 件 可 以 说 是 一 种 限 制 性 条 件 或 限 制 因 的 因 子 。 其 核心 是 一 个 生 物 或 一 群 生 物 的 生 存 和 繁 殖 取 决 于 综 合 环 境 。 各 种 因 子 不 孤 立 ， 是 相 互 联 系 的 。若 一 个 因 子 能 增 加 另 外 一 个 因 子 对 生 物 的 生 态 效 应 ， 称 为 增 效 ， 反 之 ， 称 为 减 效 。 某 一 生 态因 子 的 减 弱 对 生 物 生 长 不 利 ， 但 可 有 另 外 一 生 态 因 子 的 增 加
14、而 得 到 补 偿 的 生 态 效 果 ， 称 为 补偿 作 用。 二 、 微 生物 生 态演 化 的自 然 选 择 与 适应 （ 了 解 ） （ 一 ） 、 适 应性 ： 是 指生 物能 适应 在一 定时 间内 的环 境波 动或 剧变 以保 证其 本身 生活 和生 存 的 能 力 。 适 应 性 是 微 生 物 进 化 中 最 重 要 的 因 素 ， 其 是 基 因 型 和 环 境 因 子 作 用 共 同 的 结果 ， 其中 以基 因型 为主 。适 应性 分为 遗传 适应 性和 表型 适应 性。 （ 二 ） 、 变 异 性 : 是 指 同 种 生 物 世代 之 间 或 同 代 之 间 在 形
15、 态 、生 理 等 方 面 所 表 现 的 差 异 。 其意 义是 有利 于适 应变 化剧 烈的 新环 境。 不遗 传的 变异 与进 化无 关。 （ 三 ） 、 选 择性 ： 自 然选 择是 自然 环境 决定 的 ， 是 一个 缓慢 的过 程 ， 其 所保 存的 变异 对生 物本 身有 利； 人工 选择 是以 人的 意志 为主 ，是 较快 的过 程， 所保 存的 变异 只对 人类 有利 。 三 、 微 生物 与 生物 环 境相 互 作 用 的 生态 规 律 （ 熟 悉 ） （一 ） 、 互生 ： 是指 二种 可以 单独 生活 的生 物 ， 当它 们共 同生 活在 一起 时 ， 相互 有利 或者
16、 一种 生物 生命 活动 的结 果为 另一 种生 物创 造了 有利 的生 活条 件。 互生 包括 偏利 互生 （对 甲有 利 ， 对乙 无利 也无 害 ） 、 互利 互生 （ 彼此 互相 有利 ， 专性 ） 和互 惠互 生 （ 彼此 互相 有利 ， 非专 性） （二 ） 、 共生 ： 指 两种 微生 物生 活在 一起 ， 但两 者之 间互 无伤 害 ， 也互 无补 益 ， 各自 互无 影响 的关 系。 （三 ） 、 寄生 ： 是指 一种 生物 生活 在另 一种 生物 体的 体表 或体 内 ， 从中 摄取 营养 物质 而进 行生 长繁 殖， 并在 一定 条件 下杀 死或 伤害 另一 种生 物。
17、前者 为寄 生物 ，后 者为 宿主 或寄 主。种类 ： 1. 专性 寄生 物： 寄生 物对 寄主 一般 有害 ，寄 生物 离开 寄主 不能 生活 专性 寄生 物。 2. 兼性 寄生 物： 寄生 物离 开寄 主可 以营 腐生 活不 死亡 。 （四 ） 、拮 抗： 指两 种微 生物 共同 生长 ，其 中 一种 微生 物在 生命 活动 中产 生某 种代 谢产 物或 改变 环境 条件 （温 度、 ）而 抑制 或杀 死它 种微 生物 的现 象。 分为 非特 异性 拮抗 和特 异性 拮抗 。 （五 ） 、捕 食 : 一种 生物 捕食 另一 种生 物的 现象 。如 原生 动物 捕食 细菌 、真 菌、 藻类
18、等 。 （六 ） 、竞 争： 二种 微生 物生 活在 一起 ，为 争夺 食物 、空 间等 而发 生的 斗争 。 四 、 微 生物 生 态的 平 衡与 失 调 ( 了 解 ) 疾病 的发 生与 发展 取决 于病 原微 生物 和机 体的 各种 微环 境状 态 （ 一 ） 自然 环境 中微 生物 的生 态平 衡与 失调 在 特 定 的 生 态 系 统中 ， 不 同 生 物 群 落 相 继 更 替的 过 程 称 演 替 ， 其 本 质 是 不断 发 生 平 衡 失 调和 建立 新的 生态 平衡 。 （ 二 ） 人体 环境 中微 生物 的生 态平 衡与 失调 菌 群 失 调 指 在 原 生态 环 境 内
19、 正 常 微 生 物 群 发 生种 类 、 总 菌 数 和 各 种 群 落 成员 的 活 菌 数 的 异常 变化 。其 诱发 因素 主要 有： 1 射线 照射 ； 2 使用 抗生 素； 3 外科 手术 等。 第四 节 微生 物生 态学的应用 及研究 前景（ 了解 ） 一 、 微 生 物 生态 学 的 应 用 （ 一 ） 在病 因研 究中 的作 用 疾病 的发 生归 结于 病原 宿主 环境 的生 态失 调以 及影 响这 一生 态平 衡的 因素 。 （二 ） 、在 认识 疾病 本质 中的 作用 （三 ） 、在 疾病 防治 中的 作用 （四 ） 、在 环境 污染 预防 与控 制中 的作 用 1 、对
20、 有机 物的 降解 2 、对 金属 的转 化 3 、对 污染 物的 降解 与转 化 4 、污 染环 境的 生物 修复 5 、微 生物 监测 第三章 卫生微生物 学研究 和检测方法 第一 节 卫生 微生 物学检测特 点及基 本原理一 、 卫 生 微 生物 检 测 的 特 点（ 熟悉 ） 1. 检 测的 对象 多 ： 病 原微 生物 + 非 致病 和条 件致 病微 生物 ， 特 别是 能反 映环 境 、 食 品 、 健 康相 关产 品等 样品 卫生 质量 的卫 生指 示微 生物 。 2. 检测 的范 围广 ：标 本的 来源 不仅 局限 于人 体， 也来 源于 空气 、水 、食 品等 环境 。 3.
21、 检测 的方 法更 敏感 ：可 以检 测环 境标 本中 数量 很低 的致 病微 生物 。 4. 定量 测定 和分 型检 测： 可以 探明 感染 性疾 病的 传染 源、 传播 途径 、流 行情 况等 。 二 、 卫 生微 生 物检 测 的基 本 原 则 （ 采集 、 保 存 、 运 送、 检测 ） （一 ） 、样 品的 采集 原则 （掌 握） 总原 则： 生物 安全 代表 性 / 针对 性 防污 染 防杀 菌 细标 记 基本 原则 : 1 、生 物安 全： 防人 员感 染 防标 本和 环境 的污 染 2 、 注 意 采 样 的 代 表 性 ： 影响 因 素 包 括 : 采 样 量 采 样 部 位
22、 采 样 时 间 采 样 的 随 机 性 和 均匀 性 以及 按批 号抽 样 3 、注 意采 样的 针对 性： 样品 种类 恰当 时间 采样 量 4 、 避 免采 样时 外界 微生 物对 样品 的新 污 染 ： 所 有采 样用 具 、 容 器需 严格 灭菌 ， 并 以无 菌 操作 采样 。 5 、避 免采 样时 对微 生物 的杀 灭作 用和 引入 新的 抑菌 物质 ：如 容器 是否 有消 毒剂 的残 留 ， 或使 用刚 烧灼 未冷 却的 采样 工具 。 6 、注 意保 护目 的微 生物 7 、 注意 对样 品的 详 细标 记： 包括 ：样 品 名称 、编 号、 采 样量 、采 样时 间 、采
23、样者 、检 测 项目 。 （ 新食 品国 家标 准采 样方 案分 为二 级 （ 危 害较 大的 微生 物 ） 和 三级 （ 危 害较 小的 微生 物 ） 两种 ） （ 二 ） 、样 品的 运送 原则 （掌 握） 1 、 尽快 送检 ：采 集的 样品 应在 规定 的时 间内 （一 般不 超过 3 4 小时 ）送 到实 验室 。 2 、 保 护待 检微 生物 ： 如 温度 调节 、 加 入保 护剂 和去 除其 他不 利于 待测 微生 物生 存的 因素 （如 pH 、蛋 白质 、抑 制剂 、抑 制非 目的 微生 物、 渗透 压和 气体 ） 3 、根 据生 物安 全规 定妥 善包 装待 运输 的标 本
24、 4 、 遵 循完 善的 样品 交接 制度 ： 送 往实 验室 的样 品 ， 必 须附 有样 品送 检单 ， 实 验室 收到 样 品应 按送 检单 逐项 核对 ，检 查样 品是 否符 合检 验要 求， 确证 无误 方可 签收 待检 。 （三 ） 、实 验室 检验 原则 （掌 握） 1 、具 有相 应的 实验 室硬 件设 施 2 、具 有合 格的 人员 和采 用标 准 / 公认 的方 法3 、 加 强实 验室 质量 控制 ： a 、 仪 器设 备的 校准 和培 养基 及 试剂 的质 量监 控 ； b 、 消 毒灭 菌 效 果监 控； c 、 实验 记录 与核 查 ； d 、 报告 质量 ：菌 落
25、总 量 的测 定， 一般 样 品以 1g 或 1m l 为 单 位 的菌 落形 成单 位 ； 表 面涂 抹采 样或 空气 采样 以 1c m2 或 1m 3 为 单位 的菌 落形 成单 位 ； 致 病 菌或 特定 菌检 验， 一般 以 1g 或 1m l 为单 位报 告 “ 检出 ” 或 “ 未检 出 ” 。 4 、 根 据卫 生检 验的 特点 采取 特 殊措 施 ： a 、 做 好应 对突 发事 件的 准备 ； b 、 微 生物 检验 优 先； c 、恰 当的 样品 处理 （均 质化 、乳 化后 再行 稀释 ；抑 菌物 质去 除； 目的 菌浓 缩） 与检 验 ； d 、微 生物 的复 苏 第
26、二 节 卫生 微生 物研究和检 测的方 法 （ 微 生 物 样 品 的 特 点 : 目 的 菌 数 量 低 浓 缩 细 菌 受 损 复 苏 杂 菌 多 选 择 性 增 菌和 分离 ） 一 、 样 品 处 理（ 熟 悉 ） （ 一 ） 、 样 品 混 匀 ： （ 液 体 样 品 常 通 过 电 动 、 手 摇 或 敲 打 震 荡 ， 使 之 混 匀 ； 固 体 样 品 需 通 过 置 灭 菌 乳 钵 内 研 磨 均 匀 ， 或 于 高 速 组 织 捣 碎 机 或 匀 浆 器 中 在 少 量 液 体 存 在 下 ， 捣 碎 混匀 后 再取 样， 或使 用商 品化 的均 质器 混合 待检 样品 。
27、） （ 二 ） 、 样 品浓 缩 ： 1 、 沉 淀法 ： ( 细 菌可 通过 普通 离心 机离 心 沉淀 而浓 缩 ， 或 者通 过差 速 离 心 ， 去 除 杂 质 ， 收 集 菌 体 ， 达 到 浓 缩 的 目 的 。 病 毒 浓 缩 需 采 用 高 速 或 超 速 离 心 机 。 )2 、 过 滤 法 ： ( 是 将样 品在 负压 或正 压作 用 下 ， 通 过孔 径为 0. 4 5 m 的 滤膜 ， 细 菌被 阻留 在膜 上 ， 而 达 到 浓 缩 的 目 的 。 样 品 中 的 病 毒 可 通 过 膜 的 静 电 吸 附 浓 缩 。 过 滤 法 不 但 可 浓 缩 微 生 物 ，还
28、 可 消 除样 品中 的抑 制剂 对后 续培 养的 影响 。 )3 、 吸 附沉 淀法 ： ( 可 分为 特异 性和 非特 异性 吸附 两 类 。 非 特 异 性 吸 附 如 利 用 加 入 化 学 制 剂 ， 形 成 沉 淀 ， 细 菌 被 共 沉 淀 的 方 法 ； 而 特 异 性 吸附 则 是 利 用 配 体 与 受 体 的 亲 和 力 ， 吸 附 待 检 微 生 物 ， 如 为 浓 缩 检 样 中 的 流 感 病 毒 ， 利 用 该 病毒 具 有 血 凝 素 ， 可 与 红 细 胞 结 合 的 特 点 ， 将 检 品 中 加 入 红 细 胞 吸 附 病 毒 ， 低 速 离 心 收 集
29、红 细胞 ， 而达 到浓 缩病 毒的 目的 。 )4 、免 疫磁 珠法 。 二 、 损 伤菌 的 复苏 （ 了解 ） 修 复 的 基 本 方 法 是在 细 菌 繁 殖 之 前 ， 将 其 置 于无 选 择 性 压 力 的 培 养 环 境 中， 一 般 降 低 培 养 温 度 培 养 一 定 时 间 后 ， 再 进 行 常 规 检 验 。 复 苏 的 培 养 基 可 以 是 不 含 任 何 抑 菌 剂 的 培 养基 、 生理 盐水 ，也 可以 是在 选择 性抑 菌培 养基 中加 入能 中和 抑制 物的 试剂 而成 。 三 、 增 菌与 分 离（ 了 解） 1 物 理方 法 ： 主 要通 过调 节
30、培 养的 温度 、 气 体条 件和 光照 ， 进 行选 择性 增菌 与分 离的 方 法。 2 化 学方 法 ： 利 用目 的微 生物 的特 定生 理功 能在 分离 培养 基中 加入 抑制 其他 微生 物生 长和 显 示 目 的 微 生 物 的 化 学 制 剂 ， 配 制 成 选 择 性 鉴 别 培 养 基 ， 达 到 对 目 的 微 生 物 增 菌 分 离的 目 的。 四 、 定 量计 数 方法 （ 掌握 ） 1 倾注 平板 计数 法 : 不 使用 不透 明培 养基 ，菌 落生 长在 琼脂 表面 和琼 脂内 ，加 样量 1m l ， 分散 方式 是混 匀， 连续 10 倍梯 度准 确稀 释样
31、品。 2 表 面涂 布计 数法 ： 可 使用 不透 明培 养基 ， 菌 落生 长在 琼脂 表面 ， 加 样量 0. 1 m l ， 分 散 方式 是涂 布。 3 MP N 法 ：即 最可 能数 法 (m ost pr o b a bl e nu mber , MP N ) , 最 常用 的是 多管 发酵 法对 水 和 食品 中的 大肠 菌群 的计 数。 4. 其 它 方 法 ： （ 包 括 显 微 镜 直 接 计 数 法 、 比 浊 计 数 法 、 微 菌 落 快 速 计 数 法 、 生 化 方 法 间 接推 算微 生物 量， 以及 半定 量法 （ se mi-q uant itat i v
32、e me thod ）等 。 ） （ 五 ） 分 型 鉴 定的 方 法 噬菌 体分 型、 细菌 素分 型、 耐药 谱分 型、 血清 学分 型、 质粒 图谱 分型 六 、 其 他分 子 生物 学 方法 如 PC R 技术 ：包 括变 性、 退火 和延 伸。 第三 节 卫生 指示 微生物 指 示 微 生 物 （ in d i ca tor mi c r oo r ga nism ； 掌 握 ） ： 是 指 在 常 规 卫 生 监 测 中 ， 用 以 指 示 样 品 卫 生 状 况 及 安 全 性 的 （非 致 病 ） 微 生 物 （ 或 细 菌 ） 。 分 为 四 种 类 型 ： 菌 落 总 数
33、（ 细 菌 、 霉 菌 和 酵 母 菌 数 ） ； 大 肠 菌 群 、 粪 链 球 菌 、 产 气 荚 膜 梭 菌 ； 其 它 指 示 菌 ： 特 定 菌 、 某 些 致病 菌； 病毒 （包 括噬 菌体 ） 一 、 菌 落 总 数（ 掌 握 ） 概 念 ： 菌 落 总 数 是 指 被 检 样 品 的单 位 重 量 (g ) 、 容 积 (m l) 、 表 面 积 (c m 2 ) 或 体 积 (m 3 ) 内 所 含 有 的 能 在 某 种 培 养 基 上 经 一 定 条 件 、 一 定 时 间 培 养 后 长 出 的 菌 落 数 量 。 以 菌 落 形 成 单位 数 （ co lony fo
34、 r m in g un i t ， cf u ）表 示。 种类 ：菌 落总 数包 括细 菌菌 落总 数、 霉菌 菌落 总数 和酵 母菌 菌落 总数 。 卫 生 学 意 义 ： 用 于判 定 检 样 被 微 生 物 污 染 的 程度 或 动 态 观 察 ， 也 是 某 些 样品 的 卫 生 限 量 标准 。 测 定 方 法 ： 常 用 标 准 平 板 计 数 法 (s t a nd ard pl a te -cou ntin g me thod ) 和 表 面 涂 布 法 （ Sp atul a Me thod ） 二 、 粪 便污 染 指示 菌 （熟 悉 + 掌 握 ） （ 一 ） 、 大
35、肠菌 群 （ co l i f or m gr o u p ） ： 是 一群 能在 35 3 7 C 、 24 小 时内 发酵 乳糖 产酸 产气的 、 需 氧或 兼性 厌氧 的 、 革 兰阴 性的 无芽 胞杆 菌 。 是 存在 于人 和温 血动 物肠 道中 的一 大群 菌 。 主 要包 括 ： 四 个属 的菌 ： 埃 希氏 菌属 ( E s c h e r i c h a e ) 、 克 雷伯 氏菌 属 ( K l e b s i e l l a ) 、 肠 杆菌 属 ( E n t e r o b a c t e r ) 和 枸 橼酸 杆 菌 属（ C i t r o b a c t e r
36、 ） 。 根 据 生长 温 度 的 差异 ， 将 能在 37 C 生 长 的 称 为 总 大 肠 菌 群 ， 而 在 44 .5 C 仍 能 生 长 的 大 肠 菌 群 称 为 耐 热 大 肠 菌 群 (t h e rm o-to ler an t co lifo rm gr o u p) 或 粪大 肠菌 群（ fa ecal co l i fo rm Fc ） ， 耐热 大肠 菌群 的主 要成 员是 埃希 氏 菌 属 的 菌 。 利 用 大 肠 杆 菌 产 生 的 葡 萄 糖 苷 酸 酶 ， 分 解 吲 哚 葡 萄 糖 苷 酸 ， 产 生 有 色 物 质 ，而 使 大 肠 杆 菌 菌 落 显
37、 色 ， 对 大 肠 杆 菌 数 进 行 测 定 。 作 为 粪 便 污 染 的 指 示 菌 ， 大 肠 杆 菌 检 出 的意 义 最大 ，其 次是 耐热 大肠 菌群 ，总 大肠 菌群 的检 出意 义略 差一 些。 （ 二 ） 、 粪 链球 菌 ： 是 人与 动物 的正 常菌 群 ， 粪 大肠 菌群 与粪 链球 菌的 比值 可作 为判 断粪 便 污染 的来 源 ， 比 值大 于 4. 1 ， 可 认为 污染 的来 源主 要为 人 便 ； 小 于 0. 7 ， 可 认为 污染 的来 源 主要 为动 物便 ；介 于两 者之 间可 能为 人和 动物 便的 混合 物。 （ 三 ） 、 产 气荚 膜梭
38、菌 ： 若 样品 中产 气荚 膜梭 菌被 大量 检出 而大 肠菌 群数 量很 少 时 ， 则 表 示样 品曾 受过 粪便 污染 ，即 有陈 旧性 污染 。常 被作 为水 或土 壤卫 生细 菌学 检验 中的 指标 菌。 三 、 其 它指 示 微生 物 （了 解 ） （ 1 ）不 得检 出的 致病 菌 （ 2 ） 肠 道病 毒的 指标 微生 物 1 ） 大 肠杆 菌噬 菌体 f2 ( c ol i ph a g e ) ； 2 ） 脊 髓灰 质炎 病毒 (p olio vi r us ) 减毒 疫苗 株 I 第四章 消毒与灭菌 第一 节 消毒 与灭 菌的基本概 论及要 求 一 、 消 毒 （ d
39、is in fe ct io n ） （一 ） 、概 念及 要求 （掌 握） 概念 ：杀 灭或 清除 传播 媒介 上病 原微 生物 ，使 其达 到无 害化 的处 理。 要 求 ： 1 、 去 除 残 留消 毒 剂 效 果 的 鉴 定 试 验 合 格 ； 2 、 消 毒 产 品的 实 验 室 试 验 结 果 符 合 相 应 条件 ； 3 、 消 毒模 拟现 场试 验时 ， 各 次实 验对 实验 微生 物的 杀灭 对数 值 大于 等于 3. 00 ， 对 照 组 微生 物数 在规 定的 范围 内 ； 4 、 现 场试 验时 ， 对 消毒 对象 上自 然菌 的平 均杀 灭对 数值 大于 等 于 1.
40、 0 0 ； 5 、 消 毒产 品用 于饮 用水 消毒 时 ， 消 毒效 果的 评价 按 生 活饮 用水 卫生 监督 管理 办法 进行 。 （二 ） 、特 殊消 毒概 念（ 熟悉 ） 1 、医 院消 毒： 指杀 灭或 清除 医院 环境 中和 物体 上污 染的 病原 微生 物的 过程 。 2 、 疫 源地 消毒 ： 是 指对 存在 或曾 经存 在过 传染 源的 场所 进行 的消 毒 ，其 目的 是杀 灭或 清 除传 染源 排出 的病 原体 。包 括随 时消 毒和 终末 消毒 。3 、 随时 消毒 ：是 指疫 源地 内有 传染 源存 在时 进行 的消 毒。 4 、终 末消 毒： 是指 传染 源离
41、开疫 源地 后进 行的 彻底 消毒 5 、预 防性 消毒 ：是 指对 可能 受到 病原 微生 物污 染的 物品 和场 所进 行的 消毒 。 6 、工 业消 毒与 灭菌 ：是 指在 工业 生产 中防 止产 品染 菌所 进行 的消 毒或 灭菌 处理 。 二 、 灭 菌（ s te r il iz at i on ） 概 念 ( 掌 握 ) ： 是 指 杀 灭或 清 除 传 播 媒 介 上 所 有 微 生 物 的 处 理 。 包 括 病 原 微 生 物 和 非 病原 微生 物、 繁殖 体和 芽胞 。灭 菌合 格标 准以 是否 达到 灭菌 保证 水平 来判 断。 灭 菌保 证水 平（ st eril
42、ity as sura nce le v e l ， SA L ； 掌握 ） ： 指灭 菌处 理后 ，单 位产 品上 存在 活微 生物 的概 率， 通常 表示 为 10 - n ，一 般 SA L 为 10 -6. 三 、 相 关概 念 （熟 悉 ） 1 、无 菌： 指不 存在 任何 微生 物的 状况 ，往 往是 灭菌 处理 的结 果。 2 、 商 业无 菌 ： 指 罐头 食品 经过 适度 的热 杀菌 后 ， 不 含有 致病 的微 生物 ， 也 不含 有在 通常 温度 下能 在其 中繁 殖的 非致 病性 微生 物。 而尔 含有 耐热 性芽 孢残 留。 3 、无 菌操 作： 指在 无菌 状态 下
43、的 操作 。 第二 节 消毒 与灭 菌方法 一 、 物 理 消 毒灭 菌 法 （ 首 选方 法） （一 ） 、热 力（ 掌握 ） 1 、 湿 热消 毒灭 菌法 ： 杀 菌机 制 ： 在 水分 子存 在情 况下 更易 于使 菌体 蛋 白凝 固 ， 有 潜热 存 在， 热力 穿透 性更 强。 a 、煮 沸消 毒 : 适用 于耐 热耐 湿物 品 b 、流 通蒸 汽消 毒： 又称 常压 蒸汽 消毒 ，强 于煮 沸法 。 C 、巴 斯德 消毒 法： 适用 于牛 奶的 消毒 。 d 、 压 力蒸 汽灭 菌法 ： 有 效杀 灭各 种菌 ， 效 果可 靠 ， 灭 菌快 ， 常 用于 医疗 器械 的消 毒 。
44、有 下排 气式 压力 蒸汽 灭菌 器和 预真 空压 力蒸 汽灭 菌器 （不 能用 于对 液体 的灭 菌） 两种 。 2 、 干热 消毒 灭菌 法： 使菌 体脱 水干 燥、 大分 子变 性。 80 10 0 1 h 可 杀死 繁殖 体 ， 16 0 17 0 可杀 死芽 胞。 a 、烘 烤： 适用 于耐 高温 忌湿 物品 的灭 菌。 b 、烧 灼： 接种 环、 接种 针等 灭菌 。 C 、焚 烧： 废弃 物如 尸体 等。 d 、红 外线 照射 。 （二 ） 、紫 外线 消毒 法适用 于平 坦光 滑表 面或 流动 的空 气和 水的 消毒 。 （三 ） 、电 离辐 射灭 菌法 适用 于忌 热物 品，
45、 尤其 是一 次使 用性 医疗 卫生 产品 的消 毒灭 菌。 （四 ） 、滤 过消 毒 一 般 不 能 阻 留 病 毒等 体 积 微 小 的 微 生 物 ， 适 用于 不 耐 热 的 血 清 、 毒 素 、 抗生 素 、 药 液 以 及空 气的 除菌 。 （五 ） 、微 波消 毒 适用 于餐 饮具 、部 分医 疗药 品及 器械 的消 毒， 对人 有危 害 （六 ） 、脉 冲强 光灭 菌 用于 水处 理、 空气 杀菌 、食 品加 工、 制药 、农 副产 品等 众多 领域 。 二 、 化 学消 毒 灭菌 法 （熟 悉 ） 对 化 学 因 子 的 抵 抗力 由 大 到 小 分 依 次 为 ： 朊 病
46、毒 、 细 菌 芽 孢 、 分 支 杆 菌 、无 脂 病 毒 或 小 型病 毒、 真菌 、细 菌繁 殖体 和含 脂病 毒或 中型 病毒 。 按 杀灭 微生 物的 能力 ， 分 为三 类 ： 1 、高 效消 毒剂 ： 可 杀灭 所有 微生 物 ， 如 含氯 消毒 剂和 过氧 化物 类； 2 、中 效消 毒剂 ：可 杀灭 细菌 繁殖 体， 如乙 醇； 3 、低 效消 毒剂 ：如 氯己 定 根据 作用 机制 不同 ，主 要有 以下 几类 ： （一 ）使 菌体 蛋白 质变 性或 凝固 酚类 - - 石炭 酸、 来苏 、洗 必泰 等。 醇类 - - 70 %75 % 乙醇 杀菌 力最 强。 重金 属盐
47、类 - - 红汞 等 烷化 剂 - - 甲醛 等， 杀菌 力强 ，但 毒性 大， 有致 癌性 。 （二 ） 、干 扰细 菌的 酶系 统和 代谢 氧 化剂 - - 过 氧化 氢 、 过 氧乙 酸 、 高 锰酸 钾等 ， 与 细菌 的酶 结合 使之 失去 活性 。 过 氧乙 酸 对细 菌繁 殖体 和芽 胞、 真菌 、病 毒都 有杀 灭作 用。 （三 ） 、损 伤细 菌细 胞膜 表面 活性 剂： 增加 细菌 细胞 表面 张力 ，并 增加 其通 透性 使细 菌破 裂。 化 学 消 毒 剂 大 多 对人 体 组 织 有 害 ， 只 能 外 用 或环 境 消 毒 。 消 毒 剂 应 用 的 剂量 包 括
48、浓 度 和 作 用 时 间 。 消 毒 剂 使 用 次 数 越 多 ， 存 放 时 间 越 长 ， 污 染 率 越 高 。 用 于 消 毒 染 有 血 液 器 材的 消 毒液 或消 毒手 的消 毒液 污染 几率 最高 。 第三 节 消毒 与灭 菌的影响因 素（熟 悉） 一 处 理剂 量二 . 微 生 物 的种 类 和 剂 量 三 温 度 四 . 湿 度 五 . 酸 碱 度 六 . 化 学 拮 抗物 质 七 穿 透力 第四 节 消毒 与灭 菌效果的评 价与保 证 一 、 消 毒与 灭 菌效 果 的评 价 分为 实验 室试 验、 模拟 现场 试验 和现 场试 验。 二 、 消 毒与 灭 菌效 果
49、的监 测 包括 微生 物学 监测 法、 指示 物监 测法 和程 序监 测法 。 D 值（ 掌握 ） ：指 杀灭 生物 指示 物中 90 % 细菌 所需 的时 间。 存活 时间 （ ST ；掌 握 ） ：指 经处 理后 所有 指示 物均 能检 出活 菌的 最长 时间 。 杀灭 时间 （ KT ；掌 握 ） ：指 经处 理后 所有 指示 物均 不能 检出 活菌 的最 短时 间。 第五章 实验室生物 安全（ 多为了解） 实 验 室 生物 安 全 （ La b or at or y Bi o sa fe ty ） 指 用 来 防 止 发 生 病原 体 或 毒 素 无 意 中 暴 露 及 意外 释 放 的 防 护 原 则 、 技 术 以及 实 践 ， 以 避 免危 险生 物因 子造 成对 人类 健康 和生 命财 产的 危害 。 生 物 安 全实 验 室（ 掌 握） 指通 过防 护屏 障和 管理 措施 达到 生物 安全 要求 的生 物实 验室 和动 物实 验室 ， 由硬 件设 施 、 操作 规范 、人 员培 训和 规章 制度 所形 成的 的一 套严 密的 防控 体系 。 生 物 因 子分 级 危险 度
