1、GB 17716-1999 前主主E二为了鉴定青鱼，保护和保存青鱼原种优良的性状及种质，避免菌种生产过程中种质混杂和退化，开展青鱼种质的有效监测，特制定本标准。本标准主要是八五科技攻关成果，并吸取六五、七五科技攻关及前人的布关成果。丰标准的附录A和附录B是标准的附录。丰标准的附录C是提示的附录。本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国水产标准化技术委员会淡水养殖分技术委员会归口。本标准起草单位，j一海水产大学、中国水产科学研究院长江水产研究所。本标准主要起草人:李思发、赵金良、蔡完其、周碧云、吕国庆、范兆廷、徐忠法。本标准从1999年7月1日起实施。83 中华人民共和国国家标准青鱼GB
2、17716-1999 B1ack carp 1 范围本标准给山了青鱼(且今10户haryngdon川us)的主要形态构造特征、生长与繁殖、遗传学特性，以及检测方法。本标准适用T青鱼的种质鉴定。2 名称与分类2. 1 学名青鱼(Mylo户haryngodonpic白，)。2. 2 分类位置属鲤形目(Cypriniformes)，鲤科(Cyprinidae)，雅罗鱼亚科(Leuciscinae)，青鱼属(Mylo户huryngod，)。3 主要形态构造特征3. 1 外部形态特征3. 1. 1 外形体延长，呈梭形。腹圆，无腹棱。口端位，上领呈弧形。吻尖眼中侧位。体被较大的圆鳞，侧线完全。鲍祀稀而短小
3、。尾蜻深叉.上下叶等长。体青黑色.背部深黑，腹部灰白色，各鳝均为灰黑色。青鱼的外部形态见图1。图1青鱼外形国家质量技术监督局1999-04-05批准84 1999- 07 -01实施GB 17716-1999 3. 1. 2 可数性状3. 1-2. 1 背鳝鳝式，D3.7。3. 1.2.2 臀鳝鳝式，A3.79。3. 1.2.3 3- 1.2.4 9-A性今t一OU泊VF户一卜但!04熄4侧式外鳞弓鳞跑线一侧第3. 1. 3 可贯性状对f体长17.253. 4 cm.体重110.02 250.0 g的个体，实测性状比例值见表1。表1实测可量性状比例值全长!I丰长体/体高体长/生长长/吻长头长/
4、眼径头长/眼间距体长/尾柄长尾柄长/尾柄高1. 1 9士0.0321.0:iO上0.3504. 318icO. 295 3.318土O.580 6.619土O.798 2.290士0.3967. 657士0.6241. 059士0.1003. 2 内部构造特征3. 2. 1鲸:室，后室比较细长。3. 2. 2 下咽芮i行.f3齿状.齿式4/503- 2. 3 脊椎骨脊椎骨总数，394203. 2. 4 腹膜黑色。4 生长与繁殖4. 1 生长不IJ年龄组的鱼体长、体重的实测值见表2，与表2对应的不同年龄组的鱼体长、体重平均退算值、1. ti: 厅程、体长体重关系式见附录C(提示的附录)。表2不同
5、年龄组鱼的体长、体重实测值1龄1 2+ 4+ 6+ 7 8 3t 5+ 日+龄实拥H卒长28. ( 40.5- 57. 4 65.7- 71. 6 91. 3 100. 5 106. O 110. O crn 16. 9 55. 7 68.0 69. 1 77. 1 97. 5 104.0 110.0 112.0 + 主、测体重180-1 050 3 100 4 562 5 442 11 100 15 900 22 900 20 250-g 2 000 3 320 5 100 6 827 7 317 14000 21 500 28500 31 400 实测体长26.2-38. 9 53. 5
6、61. O 71. 6 95. 2 99. O 104. O 110.0-,m 49. 6 55. 7 68.0 69. 1 81. 4 95. 5 104.0 110.0 112.0 斗主;测体重480 1000- 2 800 3 500 5 442 12 900 15 900 17 400 20 250 日2 250 3 320 5 100 6 827 11 800 17800 22 000 28500 31 400 1 )年龄主要依据鳞片上的年龄数鉴定。4.2 繁殖4 2. 1 性成熟年龄:雌鱼57龄，雄鱼46龄。4.2.2 性成熟个体性腺每年成熟一次，一次产卵。4. 2. 3 怀卵量:
7、不同年龄组个体怀卵量见表3。85 年龄，龄体重.g绝对怀卵量.粒相对怀卵量.粒/g5 遗传学特性5. 1 细胞遗传学特性5. 1. 1 染色体数GB 17716-1999 表3不同年龄组个体怀卵量7+ 8+ 16 100.0 17 900. 0 6.4XI05 7.2X10 39.02 4 O. 19 体细胞染色体2倍数.2n=48.5. 1. 2 核型9 21 100.0 9.lXl0 42.32 中部着丝粒染色体(m组)14 才;亚中部着丝粒染色体(sm组)4对;亚端部着丝粒染色体(st组)6对，染色体臂数(NF)84(见图2)。抖，、MXX揭.KlJlU 1 0 1 nt伐，、毯)1.A
8、 ，也份JU品aA:飞挑挑:=抖、，、，、，、1)1A ,. 因2青鱼染色体组型5. 2 生化遗传学特性5. 2. 1 肌肉中乳酸脱氢酶CLDH)同工酶5.2.1.1 肌肉中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶谱见图3。5.2.1.2 肌肉中乳酸脱氢酶(LDH)同工酶酶带扫描国见图4。 1 + LDHI LDHz 图3青鱼肌肉LDH同工酶电泳酶谱图4青鱼肌肉LDH同工酶酶带扫描阁5.2. 1- 3 肌肉中乳酸脱氧酶(LDHl同工酶酶带的活性强度见表表4青鱼肌肉LDH同工酶酶带活性强度酶带LDH, LDH, LDH, LDH4 LDH, 活性强度41. 9 20.2 11. 5 2. 9 2. 6 %
9、5.2.1.4 群体变异范围:长江中、下游青鱼群体的多态座位比例为5.9%1l. 8%.平均杂合度为O. 001 OO. 035 0。制，GB 17716-1999 6 检测方法6. 1 年龄的鉴定6. 1. 1 鳞片选取部位体侧背鳝基部下方与侧线鳞上方之间。6. 1. 2 操作步骤日取下背侧鳞片.保存在鳞片袋中;b)将保存在鳞片袋中的鳞片取出，放在培养皿中，清洗干净;c)将清洗好的鳞片按在!J.体的位置夹在两块玻片之间，贴上标签，两端用透明胶带封好pd)在显微镜或投影仪下观察鳞片的年轮，确定鱼的年龄。注再生鳞不得用作年龄鉴定。6. 1. 3 取胸鳝第一根鳝条基部磨片(厚度为O.200. 25
10、 mm)作为对!照。6. 2 繁殖力的测定青鱼的繁殖力可通过计数亲鱼实际产卵量来估算，避免杀死亲鱼。在繁殖季节，称量产卵前、后亲鱼(选取次产空的亲鱼)的体重(精确到50g).前后两次称量之差即为产的卵重。用电子天平称1.0g 卵.2个样品，在解剖镜下分别计数每克卵的平均卵粒数。卵巢中所含的全部卵魁数即为绝对怀卵量，单位体重(g)所含的卵粒数为相对怀卵量.6. 3 染色体的检测6. 3. 1 标卒制备采用体内注射植物血凝聚素(PHA).取肾细胞悬液滴片，空气干燥制片，吉姆萨(Giemsa)染色。吉姆萨染色浓的配制见附录A(标准的附录)。6. 3. 2 测定染色体数在显微镜泊镜下观察，计数100个
11、以上清晰、分散良好的中期分裂相的染色体数目，测定染色体数。6. 3. 3 组型分析选择部分最佳中期分裂相，进行显微摄影，按放大照片剪贴配组，进行染色体组型分析。染色体的形态类则，按下列规定划分。即臂比1.Ol. 7为中部着丝位染色体(m组)，1.73.0为亚中部着丝粒染色体(sm组);3.07.0为亚端部着丝粒染色体(st组);7.0cc为端部着丝粒染色体(t组)0 m组和sm组染色体臂数为2i st组和t组染色体臂数为1。6. 4 *-化遗传分析6. 4. 1 样品的采集与保存先剪断腹侧主动脉放血，活体解剖，取背部自肌，放入编号的小塑料袋中，液氮中保存。运团实验室后.置于一25C冰箱中保存。
12、6.4.2 样品制备样品加3%辅酶I液匀浆，低温离心，至上清液澄清。整个制备过程均在低温下操作。6.4.3 电泳分离用水平平板电泳仪及4.0%聚丙烯酿胶凝胶电泳分离。加样前，预电泳，50mA.30 mino加样后，前电泳25mAlO min;正式电泳，275V .100 mino电泳结束后，放入预先配好并在3TC恒温箱中保温的问L酶染色液中染色。同工酶染色液的配制见附录B(标准的附录)。6.4.4 扫描测定Jl激光扫描仪对电泳图谱进行扫描。87 GB 17716-1999 附录A(标准的附录)吉姆萨(Giemsa)染色液配制A 1 Giemsa染色母液的配制称取0.5g Giemsa粉，最取甘
13、油33mL.在研钵中先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒时再将剩余U油加人，在56C条件下保温2h后，再加33mL甲醇，保存于棕色瓶内。A2 磷酸缓冲液(0.2mol/L.pH7. 2)配制磷酸缓冲液由A液和B液按比例混合而成。A2.1 A液(0.2mol/L.Na，HPO.)配制:取36.61g含1个结晶水的磷酸氢二锅(Na，HPO， H，O)定容于1000 mL蒸惰水中，或取71.64 g含2个结晶水的磷酸氢二铀(Na，HPO， H，O)定容于1000 mL 蒸惰水中，即成。A2.2 B液(0.2mol/L NaH，PO.)配制:取27.6g含1个结晶水的磷酸二氢纳(NaH2PO
14、， H，O)定容于1000 mL蒸馆水中，或取31.21g含2个结晶水的磷酸二氧销(NaH，PO. 2H20)定容于1000 mL 蒸饱水中，即成。A2.3 取A液720mL.加上B液28.0mL.混合即成所需的磷酸缓冲液。A3 Giemsa工作染色液的配制取100mL磷酸缓冲液，加入3mL Giemsa染色母液即成。附景B(标准的附录罔工酶染色渡的配制B1 三经甲基氨基甲娱-盐磁(Tris-HCI)染色缓冲液(1.5mol/L)的配制取Tris181. 71 g溶于900mL蒸饱水中，用盐酸调节至pH9.5，再用蒸偏水稀释至1000 mL , B2 氯化硝基四氮睡蓝(NBTl液(mg/mL)
15、的配制取250mg氯化硝基四氮哇蓝溶于250mL蒸馆水中。B3 乳酸纳溶液J、h 退算体重g 退算体长cm 退算体重g C2 生长方程雌鱼.雄鱼:。+l 21. 3 36.6 220. 9 909 Q 20.8 36. 4 205. 6 895.5 2+ 3 4 5+ 49. 7 61.0 71.7 84.0 2 209.6 4 002. 6 4 623. 5 8 072.4 49.8 61. 9 74. 2 85.0 2 222.5 4 176. 2 6 390.3 9 567.4 L，220.41e-O刑帕+刊o酬W , 157 384. o口1-e-O.078帕+刊O.298叮3L， 1
16、98.1口1-e-O川0862扣tt叫+忡0.3437J W, 122466.41 e-O.086 2(1 +0.343 7) J3 式中:1./-1龄时鱼体体长，cmgW，一寸龄时鱼体体重，g;e 自然对数;r一一鱼的年龄。C3 体长体重关系式C3, 1 鱼种阶段式中JV-鱼体体重，如L-鱼体体长，cmoC3, 2 食用商品鱼阶段C3, 3 亲鱼阶段w 0.0222 X L ,.953 w 0.0265 X L ,.m5 6牛92.7 11 333 93.9 12859.9 蒸懵水mL 95 7+ 8牛100.4 109. 5 15 123.1 101.9 16394. .j 19807.7 . ( C1 ) ., ( C2 ) . ( C3 ) .( C4 ) .( C5 ) . ( C6 ) 89 雌鱼:雄鱼:90 GB 17716-1999 W = 0.017 S X L2.53 w = 0.0014 X L.5191 ( C7 ) . ( Cs )
