1、ICS 65.020.01 B 05 DB14 山 西 省 地 方 标 准 DB 14/ T 16192018 转基因棉花耐盐鉴定技术规范 2018 - 01 - 10发布 2018 - 03 - 10实施 山西省质量技术监督局 发 布 DB14/ T 16192018 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 耐盐性鉴定 . 1 5 耐盐性判定规则 . 4 DB14/ T 16192018 II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山西省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：山西省农业科学院生物技
2、术研究中心、山西省农业科学院棉花研究所。 本标准主要起草人：吴慎杰、张换样、李静、秦丽霞、李盛。 DB14/ T 16192018 1 转基因棉花耐盐鉴定技术规范 1 范围 本标准规定了转基因棉花耐盐性鉴定方法及判定规则。 本标准适用于转基因棉花的耐盐性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 3543.4 农作物种子检验规程发芽试验 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 对照品种 转基因材料的受体材料。 3.2 耐盐性 仅
3、指对 NaCl 的抗性。 4 耐盐性鉴定 4.1 种子萌发期耐盐性鉴定 4.1.1 样品准备 分别取转基因纯合系和受体对照种子300粒，硫酸脱绒。 4.1.2 纸床准备 滤纸吸足盐液或去离子水后沥去多余溶液，放置与培养皿中，要求滤纸与培养皿间结合紧密，无气 泡；将种子均匀摆放在滤纸上，种子上加盖一张同样大小，吸足盐液或去离子水的滤纸，置培养箱中培 养。 4.1.3 胁迫溶液配制 DB14/ T 16192018 2 将10gNaCl溶解在1 000 mL去离子水中。 4.1.4 胁迫培养 100粒种子为一个重复，共三次重复，分别放入吸足盐液的培养皿中，按GB/T 3543.4进行发芽试验。 4
4、.1.5 去离子水培养 100粒种子为一个重复，共三次重复，分别放入去离子水培养皿中，按GB/T 3543.4进行发芽试验。 4.1.6 性状调查 将培养皿放入恒温培养箱中，28 条件下培养，第3天调查发芽种子数，发芽标准以芽长为种子长 的一半以上为准。 4.1.7 种子萌发期耐盐性评价方法 调查统计发芽率、相对发芽率、种子萌发期耐盐指数。按下列公式进行计算： 100100% 发芽数）发芽率（ （1） 100% 清水发芽率盐胁迫下发芽率）相对发芽率（ （2） 100对照材料相对发芽率鉴定材料相对发芽率种子萌发期耐盐指数 （3） 4.2 苗期盐池耐盐性鉴定 4.2.1 盐池要求 盐池长20 m，
5、宽2 m，深0.5 m，底厚0.20 m，保证盐份不渗出，水份不处溢。 4.2.2 试验设计 将转基因纯合系和受体对照种植于盐池中，随机区组设计，三个小区重复，每个小区种4行，小区 长3 m,宽1.2 m，行距30 cm,株距15 cm。盐池土壤为壤土，含盐量在0.1%以下。 4.2.3 播种管理 适期播种，播种前浇水达到种子在大田播种出苗所需的水份，定期管理，使棉苗生长健壮一致，待 棉苗长至三叶期，定苗，然后进行施盐处理，使处理后的土壤盐分浓度达到0.4%。 4.2.4 施盐方法 按所需盐分浓度每行需要的盐分计算好并称好，均匀撒施于处理行周围，然后用喷壶缓慢均匀地喷 水，至到盐分完全溶解为止
6、。撒施前进行土壤中耕处理，防止水分流动而造成的盐分不均匀现象。 4.2.5 耐盐性评价方法 4.2.5.1 耐盐性直接观察 DB14/ T 16192018 3 施盐15 d后拍照记录的转化事件和受体对照的表型，初步了解该基因对于受体材料耐盐性的影响。 4.2.5.2 相对成活苗率计算 施盐15 d后调查成活苗数，以生长点的死活为成活标准，生长点死的为死苗，生长点活的为活苗， 并计算成活苗率和相对成活苗率。依据以下公式计算： 100% 每个处理总苗数成活苗数）成活苗率（ （4） 100% 受体对照成活苗率各转化事件成活苗率）相对成活苗率（ （5） 4.3 苗期耐盐性快速鉴定 将种子以较大的密度
7、播种在疏松的基质中（草炭、珍珠岩、蛭石等），正常管理，直到长到3-5片 真叶，小心从基质中挖出小苗，尽量不要伤害根系，将小苗根系浸泡到0.6%1.0%的NaCl溶液中，每个 100 mL的三角瓶盛40 mLNaCl溶液插入植株一个，每个转基因事件和受体处理20株左右，观察叶片萎蔫 的速度，拍照记录，萎蔫的慢抗盐性强，此方法快速准确。 4.4 全生育期耐盐性鉴定 4.4.1 盐池要求 全生育期耐盐性鉴定可在盐池条件下进行。盐池顶部加装防雨棚，盐池长20 m，宽2 m，深0.5 m， 底厚0.20 m，保证盐份不渗出，水份不处溢。盐池土壤为含盐量在0.4%的盐碱土。对照土壤为壤土，含 盐量在0.1
8、%以下。 4.4.2 试验设计 分为盐池处理和对照处理。将转基因纯合系和受体对照种植于盐池中，随机区组设计，三个小区重 复，每个小区种4行，小区长3 m,宽1.2 m，行距0.30 m,株距0.15 m。 4.4.3 盐池的水分调控 播种时土壤含水量为18%19%，处理期间根据日蒸发量的大小，喷施一定量的淡水，使盐碱土壤含 水量尽量保持恒定。 4.4.4 考察性状 小区籽棉产量。 4.4.5 耐盐性评价方法 4.4.5.1 耐盐性直接观察 通过直接观察拍照记录的转化事件和受体对照的表型，初步了解该基因对于受体材料抗旱性的影 响。 4.4.5.2 耐盐指数的计算 以耐盐指数作为全生育期耐盐性的评
9、价指标，按以下公式计算： DB14/ T 16192018 4 100% 对照条件下小区产量盐胁迫下小区产量）耐盐系数（ （6） 对照材料的耐盐系数 待测材料的耐盐系数耐盐指数 （7） 5 耐盐性判定规则 5.1 种子萌发期耐盐性判定 以用种子萌发期耐盐指数作为判定指标，见表1。 表1 种子萌发期耐盐性判定 种子萌发期耐盐指数% 耐盐性等级 90.0 高抗盐 75.0-89.9 抗盐 50.0-74.9 耐盐 50.0 不耐盐 5.2 苗期耐盐性判定 以相对成活苗率作为判定指标，见表2。 表2 棉花苗期耐盐性判定 相对成活苗率% 耐盐性等级 90.0 高抗盐 75.0-89.9 抗盐 50.0-74.9 耐盐 50.0 不耐盐 5.3 全生育期耐盐性判定 以小区籽棉产量的耐盐指数作为判定指标，见表3。 表3 棉花全生育期耐盐性判定 耐盐指数 耐盐性等级 1.0 强 0.6-1.0 中 0.6 弱 _
