1、ICS 11.020 C 62 DB32 江苏省 地 方 标 准 DB 32/T 3762.5 2020 新型冠状病毒检测技术规范 第 5 部分 ： 血清 IgM 和 IgG 抗体酶联免疫 吸附检测程序 Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 5: Serum IgM and IgG antibodies test procedure by ELISA 2020 - 03 - 02 发布 2020 - 03 - 03 实施 江苏省市场监督管理局 发布 DB32/T 3762.5 2020 I 目 次 前 言 . II 1 范
2、围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 环境与设施 . 1 5 设备与耗材 . 1 6 试剂与材料 . 1 7 样本采集 . 2 8 样本运输 . 2 9 酶联免疫吸附检测步骤 . 2 DB32/T 3762.5 2020 II 前 言 DB32/T 3762新型冠状病毒检测技术规范 目前分为以下部分 ： 第 1部分：生物样本采集、运输和保存 ； 第 2部分：病毒分离与鉴定； 第 3部分：核酸荧光 PCR检测程序； 第 4部分：重组酶介导等温扩增程序； 第 5部分：血清 IgM和 IgG抗体酶联免疫吸附检测程序； 第 6部分：血清 IgM和 IgG抗体胶体金免疫层析
3、检测程序； 第 7部分：空气 样本 检测与评估； 第 8部分： 物体表面检测与评估 ； 第 9部分：医务人员职业暴露检测与评估。 本部分为 DB32/T 3762 的第 5部分。 本部分按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本部分由江苏省卫生健康委员会提出。 本部分由江苏省卫生标准化技术委员会归口。 本 部分 主要起草单位：江苏省疾病预防控制中心 、南京医科大学 、苏州第五人民医院、苏州大学附 二院、昆山市疾病预防控制中心。 本 部分 主要起草人： 曾晓燕 、 朱宝立、 焦永军、 郭喜玲、 迟莹 、吴斌 、程军平、徐佳南、钱志远、 罗晓明、沈欢喜。 DB32/T 3762.5 2
4、020 1 新型冠状病毒检测技术规范 第 5 部分 ： 血清 IgM 和 IgG 抗体酶联免疫吸附检测程序 1 范围 本 部分 规定了新型冠状病毒 者血清中 IgM 和 IgG 抗体 酶联免疫吸附检测的环境与设施、设备与耗 材、试剂与材料、血清 样本 采集、酶联免疫吸附实验操作。 本 部分 适用于新型冠状病毒 感染确诊病例 、 疑似病例以及确诊病例 的密切接触者血清学检查。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅 注日期的版本适用于本文件。 凡是 不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 Doc9284-AN/905 危险品航
5、空安全运输技术细则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 3.1 IgM 和 IgG 抗体 IgM and IgG antibodies SARS-CoV-2感染人体后，除了对靶器官产生致病过程外，病毒基因组编码的结构蛋白、非结构蛋 白还刺激机体 免疫系统，产生特异性免疫应答，分泌病原体特异性 IgM和 IgG抗体至血液循环中。 4 环境与设施 在 BSL-2级实验室内进行实验 。 5 设备与耗材 5.1 设备 ： 生物安全柜、洗板机、酶标仪（含有 450nm 波长滤光片） 、高压锅、生物安全运输箱 、水 浴锅 。 5.2 耗材 ： 个人防护装备： N95 及以上防护口罩、护目镜、一次性
6、防护面罩、医用无纺布帽、连体防 护服、一次性手术衣、乳胶手套、 防水靴套、真空釆 血管、无菌螺旋口塑料管。 6 试剂与材料 新型冠状病毒人 IgM抗体 ELISA检测试剂盒、新型冠状病毒人 IgG抗体 ELISA检测试剂盒 。 7 样本 采集 DB32/T 3762.5 2020 2 用真空负压采血管采集血液样本 5mL，室温静置 30分钟， 1500rpm 2000rpm离心 10分钟，收集血 清于无菌螺口塑料管中。 8 样本 运输 同 本标准 第 1部分 6.1和 6.2。 9 酶联免疫吸附 检测步骤 9.1 酶联免疫吸附实验 -IgM (间接法 ) 9.1.1 根据 样本 数量取出一定量
7、的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔 对照； 9.1.2 向板中加入 100L/管 样本 稀释液，然后向其中 加入 1L 的待测血清（根据需要添加阳性、阴性 参考对照），将酶标板用封板膜封闭，置 37 孵箱中孵育 30 分钟； 9.1.3 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤） 5 次后，甩干孔内残留液或倒扣 酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液； 9.1.4 于各孔中加入 HRP 标记的抗人 IgM 工作液 100L/孔，置 37 孵箱中孵育 30 分钟； 9.1.5 重复 8.1.3 步骤； 9.1.6 将显色液 A、 B 液按 1:1 混合后取混合显
8、色液每孔加 100L，轻拍酶标反应板，混匀后置室温 5 分钟； 9.1.7 于各孔中加入终止液 50L/孔，轻拍混匀； 9.1.8 将酶标板置于酶标仪 450nm 波长下 ，测定各孔光吸收 OD 值 ； 9.1.9 根据检测试剂设计者的要求判断结果。 9.2 酶联免疫吸附实验 -IgG (间接法 ) 9.2.1 根据 样本 数量取出一定量的预包被抗原的酶标板并平衡至室温，每次实验设阴、阳和空白复孔 对照； 9.2.2 向板中加入 100L/管 样本 稀释液，然后向其中加入 1L 的待测血清（根据需要添加阳性、阴性 参考对照）， 亦可把血清在 1:100 稀释的基础上再进行倍比稀释。 将酶标板用
9、封板膜封闭，置 37 孵箱 中孵育 30 分钟； 9.2.3 取出酶标板置于洗板机上用洗液洗涤（或者用洗瓶手工洗涤） 5 次后，甩干孔内残留液或倒扣 酶标反应板在吸水纸上拍去孔内残留液； 9.2.4 于各孔中加入 HRP 标记的抗人 IgG 工作液 100L/孔，置 37 孵箱中孵育 30 分钟； 9.2.5 重复 8.2.3 步骤； 9.2.6 将显色液 A、 B 液按 1:1 混合后取混合显色液每孔加 100L，轻拍酶标反应板，混匀后置室温 5 分钟； 9.2.7 于各孔中加入终止液 50L/孔，轻拍混匀； 9.2.8 将酶标板置于酶标仪 450nm 波长下，测定各孔光吸收 OD 值 ; 9.2.9 根据检测试剂设计者的要求判断结果。 _
