1、 ICS 65.020.01 B 15 DB52 贵州省地方标准 DB52/T 1501.132020 农作物抗病性鉴定技术规范 第 13 部分：辣椒抗枯萎病 Technical specification for evaluation of crop resistance to diseases Part 13: pepper resistance to wilt 2020 - 05 - 22 发布 2020 - 09 - 01 实施 贵州省市场监督管理局 发布 DB52/T 1501.132020 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . . 1 2 规范性引用文件 . . 1 3 术
2、语和定义 . . 1 4 鉴定方法 . . 2 5 抗病性评价 . . 3 附录 A（资料性附录） 辣椒枯萎病原、症状和发生流行规律 . 4 附录 B（资料性附录） 辣椒枯萎病抗病性鉴定调查记载表和评价表 . 5 附录 C（资料性附录） 辣椒枯萎病病原物的分离和保存 . 7 DB52/T 1501.132020 II 前 言 农作物抗病性鉴定技术规范分为17个部分： 第 1 部分：水稻抗稻瘟病； 第 2 部分：水稻抗稻曲病； 第 3 部分：水稻抗纹枯病； 第 4 部分：小麦抗条锈病； 第 5 部分：小麦抗白粉病； 第 6 部分：小麦抗纹枯病； 第 7 部分：马铃薯抗晚疫病； 第 8 部分：玉米
3、抗丝黑穗病； 第 9 部分：玉米抗大斑病； 第 10 部分：玉米抗小斑病； 第 11 部分：玉米抗灰斑病； 第 12 部分：玉米抗南方锈病； 第 13 部分：辣椒抗枯萎病； 第 14 部分：辣椒抗炭疽病； 第 15 部分：白菜抗根肿病； 第 16 部分：白菜抗芜菁花叶病毒病； 第 17 部分：大豆抗大豆花叶病毒病。 本部分为农作物抗病性鉴定技术规范的第13部分。 本部分按照GB/T 1.12009标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写给出的规则起草。 本部分由贵州省植物保护研究所提出。 本部分由贵州省植物保护标准化技术委员会（GZ/TC16）归口。 本部分起草单位：贵州省植物保护研究所、贵
4、州省辣椒研究所、贵州省大方县羊场镇农业服务中心。 本部分主要起草人：陈文、杨学辉、陈小均、詹永发、彭宗进。 DB52/T 1501.132020 1 农农作物抗病性鉴定技术规范 第 13 部分：辣椒抗枯萎病 1 范围 本标准规定了辣椒抗枯萎病（Fusarium oxysporum Schlecht.）的鉴定方法和抗病性评价。 本标准适用于贵州区域种植的辣椒品种（系）和种质资源对枯萎病的抗病性鉴定和评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 832
5、1 农药安全技术使用 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 辣椒枯萎病 Fusarium oxysporum Schlecht. 由尖孢镰刀菌引起的真菌性病害，见附录A中的A.1、A.2、A.3。 3.2 严重度 severity 利用分级的方法表示病害发生的严重程度。 3.3 人工接种 artificial inoculation 在适宜条件下，通过人为接种的方式将人工培养或收集的病原物置于植物适当部位并使之发病的过 程。 3.4 感病对照品种 suscepti ble control variety 为保证抗病性结果一致性，而选用的对枯萎病抗病性较差的辣椒品种。本标准建议选
6、用美国特大甜 椒（检疫证号：2207242014 040249）。 DB52/T 1501.132020 2 4 鉴定方法 4.1 育苗 挑取饱满的种子，洗净后在常温水中浸泡15 min，然后以种子56 倍的水量烫种，水温为52 ， 15 min后立即从热水中取出，冷却后，无菌水冲洗，置于灭菌纱布上，于恒温培养箱中保湿催芽4 d5 d， 每2 d换1 次纱布。 采样漂浮育苗，泡沫漂浮盘规格为162 孔/盘，每孔为3.1 cm3.1 cm，育苗盘用5%次氯酸钠溶液消 毒，育苗土（草炭：蛭石：珍珠岩为1：1：1）经高温蒸汽灭菌（121 ，1 h）。选取发芽良好的种子 单粒播于装有育苗基质的育苗盘内
7、，覆3 mm的育苗土，压实，然后将播种的泡沫漂浮盘放入盛水的盘子 中。用自来水配制营养液。在18 25 的自然条件下育苗。育苗期间不进行病害防治，虫害防治中 农药的使用应符合GB 8321.1的规定。 4.2 接种体的制备 选取鉴定、保存的致病力强的枯萎病菌菌株，接种在PDA培养皿上，置于28 恒温培养7 d10 d， 待病菌长满培养皿后，用无菌水清洗孢子，将菌株孢子悬浮液混合后，稀释为110 5 个/ml，备用。 4.3 人工接种 4.3.1 接种时期 辣椒幼苗2 片真叶展平后，塑料花钵和栽培基质土的消毒方法同5.1的育苗盘和育苗土，选择长势 一致健康的幼苗移栽到7 cm7 cm的塑料花钵中
8、，3 株/钵，移栽缓苗2 d后进行接种，3 次重复。 4.3.2 接种方法 用注射器吸取20 ml的110 5 个/ml含量的病菌孢子悬浮液浇透每个花钵中的土壤进行接种，每份材 料接种12 钵，每次试验均设感病对照，重复3 次，置于白天为26 ，夜间为23 ，光照14 h，强度为 15000 Lux的培养箱中进行潜育发病，适时浇水。 4.4 病情调查 4.4.1 调查时间 接种60 d后调查病情，共调查1 次。 4.4.2 调查方法 鉴定每份材料的发病情况，随机调查20 株辣椒植株的根系、叶和茎秆的发病情况，根据病害症状 描述，逐株记载严重度。 4.4.3 病情分级 根据辣椒根系、叶和茎秆的病
9、害症状，将严重度进行分级，见表1。 DB52/T 1501.132020 3 表1 辣椒枯萎病严重度分级及其症状描述 严重度分级 症状 0 无症状 1 10%以下的须根腐烂，叶片正常 3 10.1%20%的须根腐烂，叶片正常 5 10.1%50%的主根腐烂，20.1%50%的须根腐烂，或叶片轻度黄化 7 50%以上的主根腐烂，20.1%50%的须根腐烂，叶片黄化严重，茎基部出现黑褐色腐烂，植株出现可逆 的萎蔫 9 全部主根腐烂，50%以上的须根腐烂，茎基部和茎秆出现黑褐色腐烂，植株不可逆的萎蔫和植株枯死 4.4.4 结果计算 利用表1中的严重度分级，按式（1）计算病情指数（DI），记载表见附录
10、B中的表B.1。 100 最高病级调查总株数 相应级数值）（各级病株数 ）病情指数（DI .(1) 5 抗病性评价 5.1 有效鉴定判定 同批次鉴定中，感病对照品种的病情指数大于75时，视为该批次鉴定有效。 5.2 抗病性评价 依据3次重复的病情指数平均值确定其对辣椒枯萎病的抗病性水平为免疫、高抗、抗、中抗、中感 和高感，其评价见附录B中的表B.2。 表2 辣椒枯萎病抗病性评价 抗性级别 病情指数（DI） 抗病性评价 0 DI=0 免疫（IM） 1 0DI10 高抗(HR) 3 10DI35 抗病（R） 5 35DI55 中抗（MR） 7 55DI75 中感（MS） 9 75DI 高感（HS）
11、 DB52/T 1501.132020 4 A A 附 录 A （资料性附录） 辣椒枯萎病原、症状和发生流行规律 A.1 病菌学名和形态描述 病原为尖孢镰刀菌萎蔫专化型（ Fusarium oxysporum f. sp. vasinfectum）和辣椒专化型（ Fusarium oxysporium f. sp. capsici)等，其为无性型真菌，梗孢目（ Moniliales）痤孢科（ Tubercular）镰刀菌属 （ Fusarium）尖孢镰孢镰刀菌（ Fusarium oxysporum Schlecht.）。其中尖孢镰刀菌萎蔫专化型（ Fusarium oxysporum f.
12、sp. vasinfectum）较为常见，在 PDA 培养基上密生气生菌丝，白色，絮状。培养初期，培 养基上无色素产生，后期有紫色沉淀。分生孢子梗分枝或在菌丝上直接形成产孢细胞，产孢细胞单瓶梗 具分枝。小型分生孢子数量多，单细胞，无色，光滑，椭圆形到肾形，大小为（6.313.8） m（2.5 4.0） m。大型分生孢子，无色或浅褐色，长而略弯，呈镰刀状，基部有足细胞，具26 个横隔膜， 多为3个隔膜，大小为（25.040.0） m（3.05.0） m。厚垣孢子，顶生或间生，偶尔串生，短 椭圆形或圆形，深褐色，壁厚，光滑，直径 7.5 m11.3 m。 A.2 症状 苗期发病，在发病初期，植株叶
13、片中午萎蔫似缺水状，叶色暗沉，夜间恢复，可持续2 d3 d。随 病程延续，叶片半边或全叶变黄，植株萎蔫不再恢复，拔出后可见根颈部出现水渍状褐色病斑或腐烂， 茎秆发病出现暗色坏死。成株期发病时，发病初期，植株下部叶片开始萎蔫似缺水状，后期萎蔫程度不 断加重，叶片枯萎褪绿，叶片黄化，并大量脱落，根茎表皮呈褐色，皮层极易剥落，从茎基部纵剖，可 见维管束变褐。发病严重时，全株叶片萎蔫，枯死。 A.3 发生流行规律 枯萎病菌主要以菌丝体和厚壁孢子在病残体和土壤中越冬，在温湿度适宜的条件下，菌丝体可产生 大量的分生孢子，通过灌溉水、土壤耕作、地下害虫等传播。孢子发芽后从根部伤口或自然裂口或根冠 侵入。侵入
14、后，开始时扩展缓慢，至进入维管束的导管后，扩展速度加快。病菌分泌一些分解酶，致使 导管内积累多胶物质而堵塞导管，同时病菌分泌毒素毒害辣椒，因而使染病植株表现萎蔫、枯死。枯萎 病的发病条件与栽培管理、气候条件、土壤状况及品种抗病性等因素有关。 DB52/T 1501.132020 5 B B 附 录 B （资料性附录） 辣椒枯萎病抗病性鉴定调查记载表和评价表 B.1 辣椒枯萎病抗病性鉴定田间调查记载表 见表B.1。 表B.1 辣椒枯萎病抗病性鉴定调查记载表 播种（移栽）日期： 鉴定地点： 接种日期 ： 调查人： 记录人： 调查日期： 分级 鉴定 编号 重复 总株数 0 1 3 5 7 9 I I
15、 1 III I I 2 III I I 3 III DB52/T 1501.132020 6 B.2 辣椒枯萎病抗病性评价表 见表B.2。 表B.2 辣椒枯萎病抗病性评价表 序号 鉴定品种 重复I 病情指数 重复II 病情指数 重复III 病情指数 平均 病情指数 综合抗性 级别 综合抗性 评价 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 DB52/T 1501.132020 7 C C 附 录 C （资料性附录） 辣椒枯萎病病原物的分离和保存 C.1 病原物的分离 采集辣椒地上部分表现叶片黄化、萎蔫，植株茎基部黑褐色腐烂，根部腐烂的病害植株标样，用自 来水洗净植株根部，剪取1 cm2 cm腐烂的病根或剖开植株茎秆挑取腐烂的维管束植物组织，用75%酒精 消毒2 min3 min后，无菌水清洗2 次，接种于硫酸链霉素含量0.1%的PDA培养基平板上分离病原物，经 病原种类鉴定后，通过分离物纯化和致病性测定，筛选强致病力菌株。 C.2 病原物的保存 挑取含枯萎病菌的PDA菌丝块，放在PDA斜面试管上，放在28 培养4 d后，放到4 中冰箱保存备 用。 _ DB52/T 1501.13 -2020
