1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物 检材 中涕灭威 检验 气相 色谱 -质谱 和 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for aldicarb in biological samples GC-MS and LC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由全国刑事
2、技术标准化技术委员会毒物分析 分技术委员会 （ SAC/TC 179/SC 1） 提出并 归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、 运城市公安局 、 山西医科大学 。 本标准主要起草人： 王瑞花、 栾玉静、 王爱华 、 任昕昕 、 董颖 、杜鸿雁 、 张云峰、 黄健、 刘彦军 ， 贠克明、尉志文 。 GA/T 1 法庭科学 生物检材 中 涕灭威 检验 气相色谱 -质谱 和 液相色谱 -质谱 法 1 范 围 本标准规定了 法庭科学 生物 检材 （血、尿、肝、肾 、胃及胃内容 等） 中 涕灭威 的 气相色谱 -质谱（ GC-MS） 定性 检验方 法 和 液相色谱 -质谱 （ LC-MS） 定
3、性定量 检验方 法 。 本标准适用于 法庭科学 生物 检材 中 涕灭威 的 定性分析和定量分析 。 其他可疑 样品 中涕灭威的定性分 析 和 定量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求， 对 生物 检材进行提取、净化及浓缩 ， 采 用
4、气相 色谱 -质谱法定性 ， 液相色谱 -质谱法定性定量 ，以保留时间、 质谱特征离子碎片峰 和相对丰度 比 作为定 性判断依据 ；以峰面积为依据， 用外标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水 ， 液相色谱 -质谱 实验用水应符合 GB/T 6682 中规 定的 一 级水。除非另有 说明，在分析中使用的试剂均为分析纯， 试剂包括： a) 甲醇 ； b) 5%甲醇溶液： 移取 5mL 甲醇，加水稀释至 100mL； c) 乙腈 （色谱纯） ； d) 乙酸乙酯 ； e) 二氯甲烷 ； f) 甲酸 （色谱纯） ； g
5、) 甲酸铵 （色谱纯） ； h) 2%氨水溶液： 移取 2mL 氨水，加水稀释至 100mL； i) 标准溶液 ： 1） 1.0mg/mL 标准 物质 溶液 ： 根据涕灭威标准物质的纯度， 称取适量 ， 6 用甲醇配制 1.0mg/mL 涕灭威标准物质溶液，置于冰箱中冷藏保存。有效期 6 个月。或采用市售标准溶液； GA/T 2 2） 0.1mg/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的 涕灭威 标准物质溶液 1.0mL，用甲 醇定容至 10mL，混匀，密封，置于冰箱中冷藏保存 。 有效期 3 个月。实验中所用其 他 浓度的标准 工作溶液均由 0.1mg/mL 标准物质溶液用甲醇稀释得到
6、。 注： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料 包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱： Oasis HLB 固相萃取 柱或等效固相萃取柱 ，使用前 依次用甲醇 、 水活化 ； 注： Oasis HLB 柱是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品 。 d) 一次性注射器 ； e) 有机系微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器 和 设备 仪器和设备 包括： a) 气相色谱 -质谱 仪 ： 配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱
7、 -质谱 仪 ： 配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四极杆质量分析器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器。 7 操作 方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 沉淀蛋白 移取血液等液体检材样品 1.0mL2.0mL或称取铰碎的 肝脏等 固体检材样品 1.0g2.0g于 具盖离心管 中 ， 加入乙腈 2.0mL4.0mL，振荡 10min， 8000r/min离心 30min， 取上清液 经 0.22m的 有机 系 微孔滤膜 过滤，供 LC-MS分析。 7.1.1.2 液液萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL2.0mL或称取铰碎的肝脏等固体
8、检材样品 1.0g2.0g于具盖离心管 中 ， 加入无水乙醇 100L，乙酸乙酯 /二氯甲烷 （体积比 2:1） 混合溶剂 6mL，振荡 10min， 8000r/min离心 10min，分离有机相， 重复提取一次，合并两次提取的有机相，置于浓缩器上 40浓缩至干，残留物用 甲醇 200L溶解，作为检材样品提取液供 GC-MS分析或用 0.22m的有机系微孔滤膜过滤，供 LC-MS分析。 7.1.1.3 固相萃取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g于具盖离心 管中，用 4倍体积 2%氨水溶液稀释， 振荡 10min， 8000r/
9、min离心 20min， 取上清液转移至已活化好的固 相萃取柱中，依次 用水 3mL、甲醇 3mL淋洗 ， 弃去淋洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取柱 2min， GA/T 3 用二氯甲烷 3mL洗脱， 收集洗脱液并 置于浓缩器上浓缩至干，残留物用甲醇 200L溶解，作为检材样品 提取液供 GC-MS分析或用 0.22m的有机系微孔滤膜过滤 ，供 LC-MS分析。 7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为空白样品，一份添加 涕灭威 标准物质，作为添加样品（ GC-MS添加样品的浓度为 1.0g/mL(g)， LC
10、-MS 添加样品的浓度为 10ng/mL(g)），与检材样品平行操作，得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 检测。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气相色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调 整： a) 色谱柱： HP-5柱 （ 30m0.25mm0.25m） 或 等效色谱柱 ； 注： HP-5 柱是 Agilent 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品的认 可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100 保持 2min，以 40 /m
11、in速率升至 280 ，保持 17.5min； c) 柱流量 ： 1mL/min； d) 进样口温度： 280 ； e) 传输线温度： 230 ； f) 离子源 温度： 230 g) 载气：高纯氮； h) 进样方式 ： 分流进样 ，分流比 10： 1； i) 扫描方式 ： 全扫描（ SCAN），质量扫描范围 40amu450amu。 7.1.2.1.2 液相 色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： ACQUITY UPLC HSS T3柱 ， (2.1mm 50mm， 1.7m)或 等效 色谱 柱 ； 注： ACQUITY UPLC
12、HSS T3 柱 是 Waters 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是 表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流 动相 ： A： 乙腈， B： 5mmol/L甲酸 铵 0.1%甲酸 水溶液 ； c) 洗脱 方式 ：梯度洗脱 ，梯度见表 1； 表 1 梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min A B - 0.5 10% 90% 1.5 0.5 40% 60% 2.0 0.5 40% 60% 2.2 0.5 10% 90% 3.5 0.5 10% 90% d) 柱温： 35 ； e) 流速： 0.5mL/min； f)
13、 离子源：电喷雾 电离源 （ ESI） ； g) 检测方式：正离子； GA/T 4 h) 扫描方式：多反应离子监测 （ MRM） ； i) 雾化气、脱溶剂气：氮气； j) 碰撞气：氩气； k) 离子源温度： 150 ； l) 雾化温度： 350 ； m) 毛细管 电压： 3.0kV； n) MS参考条件 （ 定性、定量离子和锥孔电压、碰撞能量 ） 条件 见表 2。 表 2 MS 参考条件 名 称 定量离子 对 定性离子 对 锥孔电压 V 碰撞能量 eV 涕灭威 208.05 116.0 208.05 116.0 8 16 208.05 88.9 6 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添
14、加样品提取液 及 标准工作溶液，按 7.1.2.1 的 分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液等液体检材样品 1.0mL 2.0mL，或称取铰碎的肝脏等固体检材样品 1.0g 2.0g两份，按 7.1.1进行操作。 另取等量相似基质的空白样品三份，其中两份分别添加 涕灭威 标准物质作为添加样品（添加样品中 目标物含量应为检材样品中目标物含量的 (100 50)%），另一份作为空白样品，与检材样品平行操作， 得到空白样品提取液和添加样品提取液供仪器检测。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1.2.1.2 规定的 条件分析。 7.2.2.2 进
15、样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1.2的分析条件每个样品进样分析 2 3次。若要报告测量 不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品提取液平行进样 2 3 次 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式（ 1）计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中 目标 物添加量，单位为微克 （ g ） ； GA/T 5 V 样 检材
16、 样品 的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差 ： %10021 = X XXRD . (2) 式中： RD相对相差 ，用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两个 检材 样品平行定量测定的含量数值； X 两个 检材 样品平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 气相色谱 -质
17、谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一 致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围， 空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 3 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 阴性结果 评价：检材样品未出现与目标物标准溶液致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶 液一致的色谱峰，空白样品无干扰
18、，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.1.2 液相色谱 -质谱 阳性结果评价 ： 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一 致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度 比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 4规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品 中检出目标物。 表 4 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25 30% 50% 阴性结果评价：检 材样品未出现与目标物标准溶液 一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准 溶液
19、一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD 20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验 。 GA/T 6 涕灭威的相关谱图和检出限参见附录 A。 GA/T 7 A 附 录 A （资料性附录） 涕灭威的色谱 -质谱图谱 A.1 涕灭威的相关谱图 A.1.1 涕灭威的气相色谱质谱总离子流图见图 A.1。 图 A.1 涕灭威 GC-MS总离子流图 A.1.2 涕灭威的气相色谱质谱图见图 A.2。 40 50 60 70 80 90 100 1
20、10 120 130 140 150 160 170 180 190 200 0 . 0 2 . 5 5 . 0 7 . 5 ( x 1 , 0 0 0 ) 41 58 86 7655 14469 100 115102 N S O NH O 图 A.2 涕灭威的质谱图 GA/T 8 A.1.3 涕灭威的液相色谱 -质谱图见图 A.3。 50n g ST 10-D ec-201023 : 26: 40 T i m e 0 .2 0 0 .4 0 0 .6 0 0 .8 0 1 .0 0 1 .2 0 1 .4 0 1 .6 0 1 .8 0 2 .0 0 2 .2 0 2 .4 0 2 .6 0
21、 2 .8 0 3 .0 0 3 .2 0 3 .4 0 % 0 0 .2 0 0 .4 0 0 .6 0 0 .8 0 1 .0 0 1 .2 0 1 .4 0 1 .6 0 1 .8 0 2 .0 0 2 .2 0 2 .4 0 2 .6 0 2 .8 0 3 .0 0 3 .2 0 3 .4 0 % 0 0 .2 0 0 .4 0 0 .6 0 0 .8 0 1 .0 0 1 .2 0 1 .4 0 1 .6 0 1 .8 0 2 .0 0 2 .2 0 2 .4 0 2 .6 0 2 .8 0 3 .0 0 3 .2 0 3 .4 0 % 0 20101210T i m ie w ei
22、 S T D - 10 M RM o f 2 Ch a n n e l s ES+ 2 0 8 .0 4 8 1 1 6 .0 0 8 (t i m i e w e i ) 5 .2 0 e 5 1 .9 7 20101210T i m ie w ei S T D - 10 M RM o f 2 Ch a n n e l s ES+ 2 0 8 .0 4 8 8 8 .9 9 5 (t i m i e w e i ) 2 .5 1 e 5 1 .9 8 20101210T i m ie w ei S T D - 10 M RM o f 2 Ch a n n e l s ES+ T IC (t i m i e w e i ) 7 .5 5 e 5 1 .9 7 图 A.3 涕灭威 LC-MS色谱质谱图 A.2 检出限 本方法中 GC-MS的检出限为 500ng/mL（ g）； LC-MS的检出限为 10ng/mL（ g）。 _
