1、 ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 法庭科学 生物检材 中噻嗪酮 检验 气相色谱 -质谱 和 液相色谱 -质谱法 Forensic sciences Examination methods for buprofezin in biological samples GC-MS and LC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任 本标准由全国刑事
2、技术标准化技术委员会毒物分析分技术委员会（ SAC/TC179/SCI）归口。 本标准起草单位：公安部物证鉴定中心 、 重庆市公安局 、 广州市公安局 、 司法部司法鉴定科学技术 研究所 。 本标准主要起草人： 杜鸿雁、 董颖、 张蕾萍、 于忠山、何毅、王芳琳 、王俊伟、邢若葵、刘伟 、沈 敏 。 GA/T 1 法庭科学 生物 检材 中 噻嗪酮 检验 气相色谱 -质谱 和 液相色谱 -质谱 方法 1 范围 本标准规定了 法庭科学 生物 检材 （血、 尿 、 肝、 肾、 胃 及胃内容 等） 中 噻嗪酮 的 气相色谱 -质谱（ GC-MS） 和 液相色谱 -质谱（ LC-MS） 定性定量 检验方
3、法。 本标准适用于 法庭科学 生物 检材 中 噻嗪酮 的定性 分析和 定量分析。 其他可疑 样 品中噻嗪酮的定性分 析和定量分析 可 参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，按平行操作的要求，对生物检材进行提取、净化及浓缩，采用气相 色谱 -质谱法 、 液相
4、色谱 -质谱法定性定量，以保留时间、质谱特征离子和相对丰度比作为定性判断依据； 以峰面积为依据，采用外标法进行定量分析。 5 试剂 和 材料 5.1 试剂 气相色谱 -质谱 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水， 液相色谱 -质谱 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的一级水。除非另有说明，在分析中使用的试 剂均为分析纯，试剂包括： a) 甲醇 （色谱纯）； b) 乙酸乙酯； c) 乙腈（色谱纯）； d) 丙酮； e) 标准溶液 ： 1) 1.0mg/mL 标准物质溶液 ：根据噻嗪酮标准物质的纯度， 称取适量， 用甲醇配制 1.0mg/mL 噻嗪酮 标准物质溶液，置于冰箱中
5、冷藏保存。有效期 12 个月。 或采用市售标准溶液 ； 2) 10.0g/mL 标准工作溶液：移取 1.0mg/mL 的 噻嗪酮 标准物质溶液 0.1mL，用甲醇稀释至 10mL，混匀，配制成浓度为 10.0g/mL 的标准工作溶液，密封，置于冰箱中冷藏保存。 有效期 1 个月。实验中所用其他浓度的标准工作 溶液均由 10g/mL 标准物质溶液用甲醇 稀释得到。 GA/T 2 注 ： 特殊情况下可使用对照溶液代替标准溶液 。 5.2 材料 材料包括： a) 具盖离心管 ； b) 具塞玻璃试管 ； c) 固相萃取柱 ： C18 中性混合柱 ， 使用前用甲醇 、 水活化 ； d) 一次性注射器 ；
6、 e) 有机系微孔滤膜： 0.22m。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱 -质谱 仪：配有电子轰击源（ EI）； b) 液相色谱 -质谱 仪：配有电喷雾离子源（ ESI）和三重四 极 杆质量分析器； c) 电子天平； d) 离心机； e) 振荡器； f) 移液器； g) 浓缩器。 7 操作 方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提 取 7.1.1.1 液液萃取 移取血液等液体检材 1.0mL 3.0mL，或称取铰碎的 肝脏等 固体检材 样品 1.0g 3.0g于 具盖离心管 中 ， 加入乙酸乙酯 6.0mL 8.0mL，振荡 10min， 8000r/min离心 10min
7、，分离有机相；重复提取一次，合 并两次提取的有机相，置于浓缩器上 60浓缩至干，残留物用 甲醇溶解 （供 GC-MS分析时，用 100L 溶解 ； 供 LC-MS分析 时 ，用 500L溶解 ， 并 用 有机 系 微孔滤膜过滤 ） ，作为检材样品提取液 ， 供 仪器 分 析。 如需净化， 残留液 按 7.1.1.3操作。 7.1.1.2 固相萃取 移取血液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL，或称取绞碎的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 2.0g于具盖离心 管中 ， 用 4倍体积水稀释 ，振荡 10min， 8000r/min离心 25min，取上清液转移至已活化好的 C18中性混合 柱
8、 ， 控制上清液过柱流速为 0.5mL/min，依次 用 1mL水、 1mL甲醇 /水 (体积比 5:95)淋洗 2次 ， 抽干弃 去淋 洗液，挤干水分或离心或真空抽固相萃取 柱 2min， 用 1mL乙酸乙酯洗脱 2次， 收集洗脱液并 置于浓缩器 上 45 浓缩至干，残留物用 甲醇溶解（供 GC-MS分析时，用 100L 溶解 ； 供 LC-MS分析 时 ，用 500L溶 解 ， 并 用 有机 系 微孔滤膜过滤 ） ，作为检材样品提取液 ， 供 仪器 分析。 如需净化，残留液按 7.1.1.3操作。 7.1.1.3 样品净化（中性氧化铝柱净化法） 净化过程 包括 ： GA/T 3 a) 装柱
9、： 取一次性塑料吸管，将顶部剪开，在底部塞上少许脱脂棉， 依次加入无水硫酸钠 2g 3g、中性氧化铝 2g 5g、无水硫酸钠 2g 3g； b) 净化 ： 2mL 甲醇过柱（预洗柱子），弃去洗液，将样品提取液转移至净化柱上，用 2mL 乙酸 乙酯洗脱两次，收集洗脱液并 置于浓缩器上 45 浓缩至干， 残留物用甲醇溶解（供 GC-MS 分 析时，用 100L 溶解 ； 供 LC-MS 分析 时 ，用 500L 溶解，并用有机系微孔滤膜过滤），作为 检材样品提取液，供仪器分析。 7.1.1.4 质控样品制备 取等量相似基质的空白样品（若无相似基质空白样品可用血液替代）两份于具盖离心管中，一份作 为
10、空白样品，一份添加噻嗪酮添加样品（ GC-MS添加样品的浓度为 0.5g/mL(g)， LC-MS添加样品的浓 度为 0.1ng/mL(g)）， 与检材样品平行操作，得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.1.2 仪器检测 7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 气 相色谱 -质谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： DB-5MS毛细色谱 柱（ 30m0.25mm0.25m）或等效色谱柱； 注： DB-5MS 柱 是 Agelient 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产品 的认可
11、。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 100保持 2min，以 30/min速率升至 280，保持 17min； c) 柱流速 ： 1mL/min； d) 进样口温度： 280； e) 传输线温度 ： 230 f) 离子 源温度： 210； g) 载气：高纯氮； h) 进样方式：分流进样，分流比： 10:1； i) 采用全扫描（ SCAN）模式检测，质量扫描范围 40amu550amu。 7.1.2.1.2 液相 色谱 -质谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整： a) 色谱柱： Shim-pack XR-ODSIII柱（
12、 75mm2.0mm, 1.6m ）或等效色谱柱； 注： Shim-pack XR-ODSIII柱 是 岛津 公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示 对该产品的认可。如果其他等效产品 具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 流动相 ： A： 水 ， B： 甲醇 ； c) 洗脱方式 ： 梯度 洗脱 ， 洗脱 程序 见表 1； d) 流速 : 0.4mL/min； e) 进样体积： 5L; f) 检测方式 ： 正离子扫描 (ESI+)； g) 扫描方式 ：多反应监测 (MRM); h) 离子源电压 ： 5500V; i) 离子源 温度： 650； j) 离子源气
13、 1： 50psi； k) 离子源气 2： 45psi； GA/T 4 l) MS参考条件 （ 检测离子对 、 去簇电压 、 碰撞能 、 碰撞室出口电压 ） 见表 2。 表 1 梯度洗脱程序 时间 min A B 0 50% 50% 0.5 50% 50% 1.5 10% 90% 2.5 10% 90% 5 50% 50% 表 2 MS质谱条件 名称 定量离子对 定性离子对 去簇电压 (DP) V 碰撞能 (CE) eV 噻嗪酮 306.29106.0 306.2957.1 36 37 306.29106.0 36 37 306.2960.0 36 81 7.1.2.2 进样 分别吸取检材、空
14、白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1 的分析条件进样分析。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 提取 移取血液 等 液体检材 样品 1.0mL 5.0mL， 或称取铰碎的 肝脏等固体检材 样品 1.0g 5.0g两份 ， 按 7.1.1进行操作。 另取等量 相似 基质的空白样品 三 份， 其中 两份分别添加 噻嗪酮 标准 物质 作为添加样品 （ 添加样品中 目标物含量应为检材 样品 中目标物含量的 (10050)%），另一份 作为空白样品，与检材 样品平行 操作 ， 得到 空白样品提取液和添加样品提取液供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 按 7.1
15、.2.1 规定的条件分析 。 7.2.2.2 进样 分别吸取检材、空白和添加样品提取液及标准工作溶液，按 7.1.2.1的分析条件每个样品进样分析 2 3次。若要报告测量不确定度，每个样品分析次数应不少于 6次。 7.2.3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品 提取液 平行进样 2 3 次 的 目标物 保留时间 和 峰面积值，按公式（ 1）计算含量： GA/T 5 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材 样品中目标物的含量 ，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中
16、目标 物 添加量，单位为微克 （ g ） ； V 样 检材 样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 提取液 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL） ； V 添 添加样品的定容体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两 份平行操作的 检材 样品 中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： %10021 = X XXRD . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比 （ %）表示 ； X1、 X2 两个 检材 样品平行定量测定的含量数值； X 两个 检材 样品平行定量测定含量的平均值。
17、8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 气相色谱 -质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一 致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质谱图中，目标物的质谱特征离子（不少于 3 个）与标准溶液一致，特征离子丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 3 规定的范围， 空白样品无干扰，则可判断检材样品中检出目标物。 表 3 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，
18、且添加样品中出现与目标物标准 溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 GC-MS 方法检出限参见附 录 A。 8.1.2 液相色谱 -质谱 阳性结果评价：在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目标物的色谱峰保留时间与标准溶液一 致（相对误差在 2.5%之内）、目标物的定性离子（至少两对定性离子）与标准溶液一致，且离子丰度 GA/T 6 比与浓 度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 4规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材样品 中检出目标物。 表 4 离子丰度比的最大允许相对偏差范围 离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 20 25
19、 30% 50% 阴性结果评价：检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准 溶液一致的色谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 LC-MS 方法检出限参见附 录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按 两 份检材的平均值计算。如果检材样品中 目标物含量的 RD20%，定量数据不可靠。应按 7.2重新提取检验。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 噻嗪酮相关谱 图 A.1 噻嗪酮的相关谱图见图 A.1、图 A.2。 图 A.1 噻嗪酮 的 气相色谱 -质谱图 图 A.2 噻嗪酮的 液相色谱 -质谱 图 A.2 GC-MS分析，检出限为 500ng/ mL（ g）， LC-MS分析，检出限为 2.0ng/mL（ g）。 _
