1、ICS 13.310 A 92 中 华 人 民 共 和 国 公 共 安 全 行 业 标 准 GA GA/T 代替 GA/T 208 1999 法庭科学 生物 检材中 磷化氢 检验 顶空 气相色谱 和 顶空气相色谱 -质谱 法 Forensic sciences Examination methods for phosphide in biological samples HSGC and HSGC-MS - -发布 - -实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T 1 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准代替 GA/T 208-1999中毒案件检材中磷化物的
2、定性及定量分析方法 ， 与 GA/T 208-1999 相比， 除编辑性修改外主要技术变化如下： 修改了标准名称（见封面， 1999 年版的封面）； 修改了 范围的有关内容（ 见第 1 章， 1999 年版的 第 1 章 ）； 修改 了规范性引用文件的有关内容（见 第 2 章， 1999 年版的第 2 章 ）； 修改 了 第一篇 顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的 原理 （见 第 4 章， 1999 年版的 第 4 章）； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的试剂和材料 （见 第 5 章， 1999 年版的第 5 章 ）； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的仪器和设
3、备（见第 6 章， 1999 年版的第 6 章） ； 修改了第一篇顶空气相色谱法检测磷化氢及其代谢物的操作方法（见第 7 章， 1999 年版的第 7 章）； 删除了第二篇 AgDDC 法测定磷化氢的有关内容（见 1999 年版的 第 8 章 第 11 章 ）； 删除了第三篇溴化汞试纸法测磷化氢的有关内容（见 1999 年版的 第 12 章 第 15 章 ）； 修改了 附录 A 的有关内容（见 附录 A， 1999 年版的 附录 A）； 修改了附录 B 的有关内容（见附录 A， 1999 年版的附录 B）。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利 。 本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本
4、标准由全国刑事技术标准化技术委员会毒物分 析分技术委员会（ SAC/TC 179/SC 1）提出并归口。 本标准起草单位： 公安部物证鉴定中心 ，中国刑事警察学院， 陕西 省公安厅， 司法鉴定科学研究 院 。 本标准主要起草人： 侯小平、 常靖 、 董颖 、杜鸿雁、崔冠峰 、朱昱、张爱东、刘伟 。 GA/T 2 法庭科学 生物检材中 磷化氢 检验 顶 空 气相色谱 和 顶空 气相色谱 -质谱方法 1 范围 本标准规定了 生物 检材 （血、尿、肝、肾、胃及胃内容等） 中 磷化氢 的 顶空 气相色谱（ HSGC） 定 量检验 、 顶空 气相色谱 -质谱（ HSGC-MS） 定性定量 检验方法。 本
5、标准适用于生物 检材 中 磷化氢的 定性 分析和 定量分析。 其他可疑样 品中磷化氢的定性分析和定 量分析可参照使用。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GA/T 122 毒物分析名词术语 3 术语和定义 GA/T 122 界定的术语和定义适用于本文件。 4 原理 以空白样品和添加样品作对照，以平行操作的要求，采用 顶空气相色谱 质谱法 定性 定量，顶空气相 色谱法定量， 以保留时间 、 质谱 特征离
6、子碎片峰和 相对 丰度比 作为定性判断依据； 以 峰面积 为依据 ，用 外标法进行定量分析。 5 试剂和材料 5.1 试剂 实验用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水。在分析中使用的试剂均为分析纯，试剂包括 ： a) 20%硫酸 溶液 ：取 20mL 硫酸 ， 缓慢 溶于 80mL 水中 ； b) 锌粉（无砷） ； c) 标准溶液： 1) 次亚磷酸钠 溶液 （相当于含磷化氢 1.0mg/mL） ：精确称取 次亚磷酸钠 (NaH2PO2H 2O) 标 准物质 155.90mg，用少量水溶解后， 稀释 至 50mL，配制成相当于含磷化氢 1.0mg/mL 的 次亚磷酸钠 标准 溶液 ， 置
7、于 冰箱中冷藏保存 。有效期 1 个月 。 2) 次亚磷酸钠工作 液 （相当于含磷化氢 0.1mg/mL） ： 移取 次亚磷酸钠溶液（相当于含磷化 氢 1.0mg/mL） ，用 水 稀释至 10mL， 密封 ，置于冰箱中 冷藏 保存 。有效期 7 天 。 实验中所 用其他浓度的标准工作液均由 相当于含磷化氢 0.1mg/mL 的 次亚磷酸钠工作液 用 水 稀释得 到。 5.2 材料 GA/T 3 材料包括： a) 10mL 顶空瓶 ； b) 聚四氟乙烯胶垫 ； c) 顶空瓶 金属 盖 ； d) 封盖钳 ； e) 气密性 进样针 。 6 仪器和设备 仪器和设备包括： a) 气相色谱仪 ：配有火焰
8、光度 -磷型检测器（ FPD-P）或氮磷检测器 (NPD)； b) 气相色谱 -质谱仪：配有电子轰击源（ EI）； c) 顶空自动进样器 ； d) 电子天平； e) 恒温电加热器。 7 操作 方法 7.1 定性分析 7.1.1 样品 提取 7.1.1.1 样品 制备 在顶空瓶 中加入锌粉 40mg，使锌粉均匀分布在顶空瓶底部，加入 血液等 液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL 或铰碎 的肝脏等固体 检材 样品 1.0g 2.0g， 依次 加水 2.0mL， 20%硫酸 溶液 0.5mL， 立即 封盖 ， 混匀 。 若采用顶空自动进样器，封盖后直接供仪器分析；若手动进样 ，则 封盖后 室温
9、下静置 20min 后， 将顶空瓶置 于 恒温电加热器中 35 40下 加热 10min，抽取液上气体 100L 500L，供仪器分析 。 7.1.1.2 质控样品 制备 取 等量 相似 基质的空白 样品 （若无相似基质空白样品可用血液替代） 两份 于顶空瓶中 ， 一份 作 为 空 白样品 ， 一份 添加 相当于含磷化氢 1.0g 的 次亚磷酸钠 溶液 ， 作为 添加样品 ， 与 检材样品平行操作 ，供 仪器 分析 。 同时 取水 1.0mL 2.0mL，添加相当于含磷化氢 2.0g 的次亚磷酸钠标准 溶 液， 与检材样品 平行操作 ， 作为标准工作液， 供仪器分析 。 7.1.2 仪器检测
10、7.1.2.1 仪器条件 7.1.2.1.1 顶空自动进样器 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同样品等实际情况进行调整 ： a) 加热箱温度： 45 ； b) 定量环温度： 95 ； c) 传输线温度： 105 ； d) 气相循环时间： 20min； e) 检材 瓶加热平衡时间 ： 10min； f) 检材 瓶加压时间： 0.2min； g) 定量环充满时间： 0.2min； GA/T 4 h) 定量环平衡时间： 0.2min； i) 进样时间 ： 1.0min。 7.1.2.1.2 气相 色谱质谱 条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同 样品 等实际情况进行调整： a)
11、色谱柱： HP-PLOT-Q（ 30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； 注 ： HP-PLOT-Q柱是 Agilent公司产品的 商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该 品的认 可。 如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 50 保持 5min，以 50 /min速率升温至 200 ，保持 2min； c) 进样口温度： 200 ； d) 传输线温度： 200 ； e) 载气：氦气； f) 进样方式： 不 分流进样 或分流进样 ，分流比 5:1； g) 电子轰击能量： 70eV； h) 离子源温度： 200 ； i) 倍增器电压
12、：自动调谐值； j) 柱流量： 1.0mL/min ； k) 质量扫描范围： 19amu80amu ； l) 扫描方式：全扫描（ Scan）。 7.1.2.2 进样 分别 吸取 检材 、 空白和添加样品液上气体和标准 溶液液上气体 ， 按 7.1.2.1的分析条件进样分析 。 7.2 定量分析 7.2.1 样品 制备 准确 移 取血液等液体 检材 样品 1.0mL 2.0mL， 或称取铰碎的肝脏等 固体 检材 样品 1.0g 2.0g两 份， 按 7.1.1进行操作。 另 取等量相似基质的空白样品三 份， 其中两份 添加次亚磷酸钠 溶 液（ 添加样品中 产生磷化氢的 含量 应为检材样品中 产生
13、磷化氢 含量的（ 10050） %）， 另一份作为空白样品，与检材样品平行操作，得到 空白样品和添加样品供仪器 分析 。 7.2.2 仪器检测 7.2.2.1 仪器条件 7.2.2.1.1 顶空自动进样器 条件 按 7.1.2.1.1 规定的条件分析 。 7.2.2.1.2 气相 色谱条件 以下为参考条件，可根据不同品牌仪器和不同 样品 等实际情况进行调整： a) 色谱柱： HP-PLOT-Q（ 30m0.32mm0.25m）或等效色谱柱； 注： HP-PLOT-Q柱是 Agilent公司产品的商品名称，给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不是表示对该产 品 的认 可。 如果其他等效产品具
14、有相同的效果，则可使用这些等效产品。 b) 色谱柱温程： 50 保持 5min，以 40 /min速率升温至 260 ，保持 5min； c) 进样口温度： 250 ； GA/T 5 d) 检测器温度： 270 ； e) 载气：氮气； f) 进样方式：分流进样 ： g) 分流比 ： 5:1 10:1； h) 柱流量： 1mL/min 2mL/min。 7.2.2.1.3 气相 色谱 -质谱条件 按 7.1.2.1.2 规定的条件分析 。 7.2.2.2 进样 分别 吸取 检材 、 空白和添加样品液上气体和标准溶液液上气体 ， 按 7.2.2.1的分析条件 每个样品进样 分析 1次 。 7.2.
15、3 计算 7.2.3.1 计算含量 记录各样品 液上 气体进样 后 的 目标物保留时间和峰面积值，按公式 （ 1） 计算含量： 添样添 样添样 VMA VMAW = . (1) 式中： W 检材样品 中目标物的含量，单位为微克每克 （ g/g） 或微克每毫升（ g/mL） ； A 样 检材 样品液上气体 中目标物峰面积平均值； M 添 添加样品中 标准物质（以磷化氢计） 添加量，单位为微克 （ g） ； V 样 检材 样品 液上气体 的 进样 体积，单位为毫升 （ mL） ； A 添 添加样品 液上气体 中目标物峰面积平均值； M 样 检材 样品 的取样量，单位为克 （ g） 或毫升 （ mL
16、） ； V 添 添加样品 液上气体 的 进样 体积，单位为毫升 （ mL） 。 7.2.3.2 计算相对相差 记录 两份 平行操作的 检材 样品中目标物的 含量，按公式（ 2）计算相对相差： %100X XXRD 21 = . (2) 式中： RD 相对相差 ， 用百分比（ %）表示 ； X1、 X2两份 检材 样品 平行定量测定的含量数值； X 两份 检材 样品 平行定量测定含量的平均值。 8 结果评价 8.1 定性结果评价 8.1.1 阳性结果评价 GA/T 6 在相同条件下进行样品测定时，检材样品中目 标物的色谱峰保留时间与标准溶液一致（相对误差在 1%之内），且在扣除背景后的检材样品质
17、谱图中，目标物的质谱特征离子与标准溶液一致，特征离子 丰度比与浓度接近的标准溶液相比，相对偏差不超过表 1 规定的范围，空白样品无干扰，则可判断检材 样品中检出目标物。 表 1 特征离子丰度比的最大允许相对偏差范围 特征离子丰度比 50% 20 50 10 20 10% 最大允许相对偏差 10 15 20% 50% 8.1.2 阴性样品评价 检材样品未出现与目标物标准溶液一致的色谱峰，且添加样品中出现与目标物标准溶液一致的色 谱峰，空白样品无干扰，则可判断检材样品中未检出目标物。 方法的检出限参 见 附录 A。 8.2 定量结果评价 如果目标物含量的 RD 20%，定量数据可靠，其含量按两份检
18、材的平均值计算。 如果 检材样品中 目 标物含量的 RD20%，定量数据不可靠。 应按 7.2重新提取检验。 磷化氢检验的相关谱图和原理补充说明分别参见附录 A和附录 B。 GA/T 7 附 录 A （资料性附录） 磷化氢的 相关 谱图 A.1 磷化氢色谱图 磷化氢色谱图见图 A.1。 图 A.1 磷化氢 色谱 图 (FPD-P检测器 ) A.2 磷化氢 质 谱图 磷化氢质谱图见图 A.2。 图 A.2 磷化氢 质 谱 图 A.3 方法 检出限 GC-MS分析 磷化氢检出限 为 500ng/ mL（ g）。 2 0 . 0 2 5 . 0 3 0 . 0 3 5 . 0 4 0 . 0 4 5
19、 . 0 5 0 . 0 5 5 . 0 6 0 . 0 6 5 . 0 7 0 . 0 7 5 . 0 8 0 . 0 0 . 0 0 0 . 2 5 0 . 5 0 0 . 7 5 1 . 0 0 ( x 1 0 , 0 0 0 ) 34 35302321 H P H H GA/T 8 附 录 B （资料性附录） 磷化氢检验原理补充说明 磷化锌、磷化铝、含磷的矿砂及硅铁等磷化物遇酸、水或潮湿空气后可产生剧毒的磷化氢，故磷化 物中毒实为磷化氢中毒。磷化氢是气体，经生物机体吸收引起中毒或中毒死亡的生物 检材 放置一定时间 常因挥发而难以检出。磷化氢在 生物 体内代谢为亚磷酸，因此，在磷化氢检验不出的情况下可检验生物 检材 中的代谢物亚磷酸。亚磷酸在酸及锌粉反应生成的氢气作用下还原为磷化氢，其反应式如下： H3PO3 3Zn 3H2SO4 3ZnSO4 3H2O PH3 实验室采用次亚磷酸钠作为标准物质，次亚磷酸钠在锌与硫酸的作用下定量地还原为磷化氢，其反 应式如下： 2NaH2PO2 4Zn 5H2SO4 4ZnSO4 Na2SO4 4H2O 2PH3 _
