1、ICS 13.310 A92 GA 中华人民共和国 公共安全 行业标准 GA/T XXXX XXXX 法庭科学 犬 DNA 实验室检验规范 Forensic sciences Specifications for examination for canine DNA laboratory （报批稿） XXXX - XX - XX 发布 XXXX - XX - XX 实施 中华人民共和国公安部 发布 GA/T XXXX XXXX I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用 文 件 . 1 3 术语 和定义 . 1 4 检验 人员 要求 . 2 5 环境 . 2 6 方法 . 2
2、 7 仪器和试剂 . 2 8 样本 . 3 9 基因座的确认 . 3 10 分析程序要求 . 3 11 文件控制 . 4 12 记录控制 . 4 13 实验室安全 . 4 附录 A（规范性附录）犬 DNA 样本采集 方法 . 6 附录 B（规范性附录） 犬 DNA 基因座 及 数 据信息项 . 8 GA/T XXXX XXXX II 前 言 本标准按照 GB/T1.1 2009给出的规则起草。 本标准 由全国刑事技术标准化技术委员会法医检验分技术委员会（ SAC/TC 179/SC6）提出并归口。 本标准 起草单位：公安部南昌警犬基地 、公安部昆明警犬基地、公安部南京警犬研究所、公安部沈 阳警
3、犬基地、江西农业大学、江西省公安厅刑事科学技术研究所 。 本标准 主要 起草人：叶俊华、杨前勇、马长书、任军、赵会安 。 GA/T XXXX XXXX 1 法庭科学 犬 DNA 实验室检验 规范 1 范围 本标准规定了 法庭科学 犬 DNA实验室 检验 应遵守的基本要求。 本标准适用于 所有 从事 法庭科 学 犬 DNA检 验 的实验室。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 27025 2008 检测和校准实验室能力的通用要求 GA/T 38
4、2 2014 法庭科学 DNA实验室建设规范 GA/T 383 2014 法庭科学 DNA实验室检验规范 SZDB/Z 92 2014 生物基因信息数据库建设与管理规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 犬 DNA 检验 canine DNA testing 运用 DNA技术对犬生物检材进行的鉴定。 3.2 犬 DNA 检验试剂盒 canine DNA test kit 专用于犬 DNA相关检验的试剂盒。 3.3 短串联重复序列 Short Tandem Repeat; STR 由 2-6碱基构成核心序列串联重复排列而成的遗传标记。 3.4 单核苷酸多态性 Single N
5、ucleotide Polymorphism; SNP 在基因组上单个核苷酸的变异而形成的遗传标记。 3.5 GA/T XXXX XXXX 2 犬 DNA 数据库 canine DNA database 集合了犬 DNA信息、犬基本档案信息、繁育信息、疾病信息和犬主信息等综合信息的资料库。 3.6 犬 DNA 数据库管理系统 canine DNA database management system 用于管理工作犬 DNA 数据库的计算机软件， 功能 包括查询、录入和运算犬 DNA 数据库中的信息 和参数。 4 检验 人员 要求 4.1 技术主管 应具备学士以上学位或具有中级以上专业技术职务资
6、格，专业为生物学、动物学、遗传学、法医学 以及相关学科，具有五年以上犬 DNA检验 经验，有解决各种疑难问题的能力。 4.2 检验员 应具备生物学、动物学、遗传学、 法 医学 及相关 专业大专以上学历或初级以上专业技术资格，具有 三年以上犬 DNA检验 经验 。 4.3 技术员 应具备大专以上学历，具有一年以上犬 DNA检验 经验 ，具有配制日常使用试剂和准备实验所需用 品的能力。 4.4 培训、考核和技术档案 按照 GB/T 27025 2008、 GA/T 382 2014的规定执行。 5 环境 按照 GA/T 382 2014执行 。 6 方法 按照 GA/T 383 2014执行 。
7、7 仪器和试剂 按照 GA/T 383 2014执行 。 8 样本 样本的流转、保管按照 GA/T 382 2014执行 。 犬 DNA样 本 采集方法 见附录 A。 GA/T XXXX XXXX 3 9 基因座的确认 9.1 基因座描述 9.1.1 DNA 分型中的基因座包括短串联重复序列（ STR）的基因座、单核苷酸多态性 (SNP)的基因座、 性状相关的基因座，这些基因座应具有遗传稳定性 、 易于 检验 的特点。 9.1.2 基因座在染色体中应有确切的物理位置。对于用 PCR 扩增 检验 的基因座应有引物序列的描述， 对于用高通量测序 检验 的 SNP 基因座应有探针序列的描述。 9.1
8、.3 等位基因命名：应 根据 重复次数、碱基序列、分子量 ， 以数字命名。 9.2 犬 DNA 数据库选用的 STR 基因座名称及结构 见附录 B中的表 B.1。 9.3 STR 基因座的 DNA 数据信息 项 名称及格式 见附录 B中的表 B.2。 10 分析程序要求 10.1 样本登记 样本登记要求信息准确、完整，符合工作犬 DNA数据库管理系统入库要求，主要包括送检犬和该 犬父母的品种（ Breed）、犬名（ Name）、性别（ Gender）、芯片号（ Chip number）、 出生日期（ Birth date）、犬主人（ Owner）、照片号（ Photo number）等信息。
9、10.2 样本初检 样本初检以确定是否具备 DNA检验的基本条件。不符合检验条件相关样本经技术主管同意后方可 退回。样本在进入实验室后 应 严格管理， 应 贴上标签、填写样本 处 理表，转移样本或加样时 应 签名并经 他人核对。 10.3 DNA 提取 应根据所设计的检验方案确定 DNA提取的方法，并严格防止样本相互污染。应选用不同方法（电 泳、紫外吸收、荧光、杂交等）对 DNA的纯度、含量进行评估。详见 GA/T 383 2014中的规定。 10.4 PCR 分析 10.4.1 扩增反应体系及循环参数，以各试剂盒的说明书为准。 10.4.2 严格设置阳性和阴性对照。 10.4.3 如需要可设
10、置现场检材附近区域的空白对照。 10.5 PCR 反应产物 检测 使用全自动荧光分析仪进行检测。器材、试剂、检测方法和数据分析以各试剂盒和各型号仪器的说 明书为准。 10.6 入库 GA/T XXXX XXXX 4 应 符合工作犬 DNA数据库管理系统的入库要求，分析数据准确、综合信息完整，由系统自动生成 唯一二维码标识。 按 SZDB/Z 92 2014中的相关规定 执行 。 11 文件控制 按照 GB/T 27025 2008执行。 12 记录控制 按照 GB/T 27025 2008执行。 13 实验室安全 13.1 安全管理 应制定完备的安全管理制度，包括下列内容： a）安全和健康规定
11、； b）书面的工作程序包括安全工作行为； c）常规检查； d）危险材料和物质； e）健康监护； f）急救服务及设备； g）事故及病情调查； h）记录及统计； i）确保落实审核中提出需要采取的全部措施的计划。 13.2 安全检查 实验室管理层有责任确保安全检查的执行。每年应对工作场所至少检查一次， 包括 ： a）用于危险物质漏出控制的程序和物品状态，包括紧急淋浴； b）对可燃易燃性、可传染性、放射性和有毒物质的存放进行适当的防护和控制； c）去污染和废弃物处理程序的状态； d）实验室设施、设备、人员的状态。 13.3 安全手册 要求所有工作人员阅读的安全手册应在工作区随时可用。手册应针对实验室的
12、需要，主要包括但不 限于以下几方面： a） 生物危险； b） 消防； c） 电气安全； d） 化学品安全； e） 辐射； f） 危险废弃物处理和处置； g） 危险标识。 GA/T XXXX XXXX 5 13.4 安全行为 13.4.1 洗手 实验室工作人员在实际或可能接触了血液、体液、有害试剂或其他污染材料后，即使戴有手套也应 立即洗手。 13.4.2 气溶胶 实验室工作行为的设计和执行应能减少人员接触化学或生物源性有害气溶胶。有害气溶胶不得直接 排放。 13.4.3 生物安全柜 对于挥发性有害试剂应在生物安全柜中操作，在实验室员工接触可能有危害等级的生物因子的场 所，禁止将空气再循环。 G
13、A/T XXXX XXXX 6 附 录 A （规范性 附 录） 犬 DNA样本采集 方法 A.1 采样准备 A.1.1 血液样本 采集的材料和试剂 每头犬准备送样袋 1个（内有 EDTA抗凝真空管 1套， 一次性针管 1个， 滤纸 2张），酒精棉球 3个 。 A.1.2 口腔脱落细胞样本 采集的材料和试剂 每头犬准备 1张唾液采集卡和 1支 一 次性采样棒。 A.2 采样方法和步骤 A.2.1 血液 DNA 样本采集 A.2.1.1 采样部位 犬前肢静脉。 A.2.1.2 采样体积 采血 3mL，滤纸血斑直径 1cm以上。 A.2.1.3 采样步骤 酒精棉球消毒犬采血部位， 先用真 空管从犬前
14、肢静脉抽取 3毫 升 全血， 充分 晃动后，再用一次性针 管从真空管中取 0.5mL抗凝血滴到滤纸片上，按要求登记详细 信息 ， 晾干后封入送样袋。在真空管壁上 按顺序标明 样本 编号，再 标记 犬的耳号或芯片号，同时在滤纸片 边缘标注 犬名和耳号或芯片号。封入送 样袋后，在送样袋背面按对应位置登记详细信息。 A.2.1.4 注意事项 采血动作应迅速，注意防止凝血和溶血，拔下针头后 充分 摇晃采血管，将血液与抗凝剂混匀 。整个 过程 避免交叉污染。采血后立即 将送样袋 置于 -20冷藏保存。 A.2.2 口腔 DNA 样本采集 A.2.2.1 填写信息 取出唾液卡，填写被检 验 犬的详细信息，
15、包括犬名、性别、品种、产地、出生日期、芯片号、犬主 人姓名、送检人姓名（单位）、照片编号。所采集的多头犬 样本 中，纯繁后代如有亲缘关系， 应 标明所 采个体的三代以内相互亲缘关系。 A.2.2.2 擦拭 取出一次性采样泡沫棒，一手按住犬的头部 ,另一手持泡沫头适当用力擦拭嘴唇内侧 30s以上 , 并在 嘴唇内侧三个以上部位擦拭。 A.2.2.3 转移 GA/T XXXX XXXX 7 泡沫头一面居中盖住唾液卡上指示采样区内，用力按压 10s，将泡沫头内擦拭到的含有 口腔 上皮细 胞的唾液都转移到唾液内卡上。 A.2.2.4 干燥 样本采集完成后，将采 集 卡支起，完全干燥后再收起。 A.2.
16、2.5 注意事项 整个操作过程不要用手触摸泡沫棒头部，泡沫为一次性使用。唾液卡和保存袋上基本信息填写字迹 应 工整规范，易于辨认，不得涂改。认真核准检验犬的信息的对应关系，防止错填、错采的情况发生。 A.3 采样群体、范围要求 A.3.1 采样群体 警犬种犬、优秀工作犬和根据工作需要进行 检验 的特色民间犬种，要求进行 DNA检验 的涉案犬。 A.3.2 采样范围 符合种用警犬认证标准的种犬、准予繁殖犬、优秀工作犬、需要 检验 的其它犬，各地公安机关及相 关机构请求进行 DNA检验 的涉案犬 。 A.3.3 电子档案 所有采集样本个体 应 建立文字电子档案，内容包括 样本 采取卡片中规定的所有
17、信息及 检验 过程与结 果。所有采集样本个体要求附全身侧面及头部正面数码照片各一张（像素： 100万以上）。照片号 应 与 登记表上登记的号码保持一致。 A.4 样本运输要求 A.4.1 血液 样本 要求盛放 样本 的保温瓶、保温的泡沫盒内置冰袋或者冰块，保持容器内 0，摆放 样本 时应始终保 持采血管垂直放置。运输过程中也应避免倒置，防止 样本 渗漏，包装要牢固，并在包装盒上注明相关信 息。 A.4.2 口腔脱落细胞样本 应 密封常温保存和运输， 避 免交叉污染和遗失。 A.5 样本采集时间要求 警犬种犬大宗 样本 采样时，应安排集中时间采集， 样本 采集后存放时限应不超过一周 。 GA/T
18、 XXXX XXXX 8 附 录 B （规范性附录） 犬 DNA基因座 及 数据信息项 犬 DNA数据库选用的 STR基因座名称 见表 B.1。 STR基因座的 DNA数据信息项名称及格式 见表 B.2。 表 B.1 犬 DNA 数据库选用的 STR 基因座 序 号 名 称 1 PEZ1 2 PEZ2 3 PEZ3 4 PEZ5 5 PEZ6 6 PEZ8 7 PEZ12 8 PEZ15 9 PEZ20 10 PEZ21 11 FH2010 12 FH2054 13 FH2132 14 FH2179 15 FH2611 16 VWFX 17 备用 1 18 备用 2 19 备用 3 20 备用
19、 4 21 备用 5 22 备用 6 23 备用 7 24 备用 8 25 备用 9 26 备用 10 GA/T XXXX XXXX 9 表 B.2 基因座的 DNA 数据信息项名称及格式 序 号 名 称 类 型 长 度 小数位数 1 PEZ1 字符 4 1 2 PEZ2 字符 4 1 3 PEZ3 字符 3 1 4 PEZ5 字符 4 1 5 PEZ6 字符 4 1 6 PEZ8 字符 4 1 7 PEZ12 字符 4 1 8 PEZ15 字符 4 1 9 PEZ20 字符 4 1 10 PEZ21 字符 4 1 11 FH2010 字符 4 1 12 FH2054 字符 4 1 13 FH213 2 字符 4 1 14 FH2179 字符 4 1 15 FH2611 字符 4 1 16 VWFX 字符 4 1 17 备用 1 18 备用 2 19 备用 3 20 备用 4 21 备 用 5 22 备用 6 23 备用 7 24 备用 8 25 备用 9 26 备用 10 _
