1、ICS 67.220.10B 36 G H中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准GH/T 1291 2020花 椒 及 花 椒 加 工 产 品 花 椒 酰 胺 总 含 量 的 测定 高 效 液 相 色 谱 法 Prickly ash and its processed productsDetermination of total fagaramideHighperformance liquid chromatography 2020 -06- 04发 布 2020- 09-01实 施中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 发 布 GH/T 1291 2020 I 前 言本
2、标 准 按 照 GB/T 1.12009给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 的 附 录 A是 资 料 性 附 录 。本 标 准 由 中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 提 出 。本 标 准 由 全 国 辛 香 料 标 准 化 技 术 委 员 会 （ SAC/TC 408） 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 南 京 野 生 植 物 综 合 利 用 研 究 院 、 陕 西 为 康 食 品 科 技 股 份 有限 公 司 、 晨 光 生 物 科 技 集 团 股 份 有 限 公 司 、 驻 马 店 市 王 守 义 十 三 香 调 味 品 集 团
3、有 限 公 司 、 山 东 百 佳 食 品有 限 公 司 、 中 国 食 品 土 畜 进 出 口 商 会 调 料 分 会 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 刘 英 杰 、 刘 强 、 杨 清 山 、 张 慧 、 赵 伯 涛 、 刘 继 华 、 武 亚 明 、 程 远 欣 、 王 银 良 、 王 艳 改 、 黄 晓 德 、 吴 耀 军 、 苏 海 、 李 漪 。 GH/T 1291 2020 1 花 椒 及 花 椒 加 工 产 品 花 椒 酰 胺 总 含 量 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 花 椒 及 花 椒 加 工 产 品 中 花 椒 酰 胺 类 物
4、 质 总 含 量 的 高 效 液 相 色 谱 测 定 方 法 。本 标 准 适 用 于 花 椒 及 花 椒 加 工 产 品 的 分 析 与 检 验 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/ T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 GB/ T 12729.2 香 辛
5、 料 和 调 味 品 取 样 方 法GB/ T 12729.3 香 辛 料 和 调 味 品 分 析 用 粉 末 试 样 的 制 备3 术 语 与 定 义3.1 花 椒 加 工 产 品 prickly ash products花 椒 经 粉 碎 、 萃 取 等 工 艺 生 产 的 产 品 。 主 要 包 括 花 椒 粉 、 花 椒 油 树 脂 、 花 椒 油 等 以 花 椒 为 原 料 加 工的 产 品 。3.2 花 椒 酰 胺 fagaramide花 椒 呈 麻 味 的 主 要 成 分 ， 含 有 羟 基 -山 椒 素 、 羟 基 -山 椒 素 、 羟 基 -山 椒 素 和 羟 基 -山 椒
6、素 等 多种 酰 胺 类 成 分 。 4 原 理花 椒 酰 胺 类 物 质 主 要 包 含 羟 基 - -山 椒 素 、 羟 基 - -山 椒 素 、 羟 基 - -山 椒 素 和 羟 基 - -山 椒 素 等酰 胺 类 组 分 ， 试 样 中 的 花 椒 酰 胺 类 成 分 经 甲 醇 提 取 后 ， 通 过 C18柱 分 离 ， 用 配 有 紫 外 检 测 器 的 高 效 液 相色 谱 仪 在 270nm处 测 定 ， 以 羟 基 - -山 椒 素 作 为 对 照 品 ， 通 过 峰 面 积 外 标 法 对 样 品 中 的 花 椒 酰 胺 总 量 进行 测 定 。5 试 剂 材 料 与 仪
7、 器 设 备5.1 试 剂 材 料5.1.1 乙 腈 ： 色 谱 纯 。5.1.2 甲 醇 ： 色 谱 纯 。 5.1.3 冰 醋 酸 ： 分 析 纯 。 GH/T 1291 2020 2 5.1.4 羟 基 -山 椒 素 ， CAS号 : 83883-10-7， 纯 度 95%。5.1.5 微 孔 滤 膜 ， 孔 径 0.22 m 有 机 相 滤 膜 。5.2 仪 器 设 备5.2.1 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 配 有 紫 外 检 测 器 。5.2.2 分 析 天 平 ， 感 量 0.000 1 g,0.000 01 g。5.2.3 水 浴 锅 。5.2.4 超 声 清 洗 器 ， 超
8、 声 功 率 240 W。5.2.5 高 速 粉 碎 机 ， 转 速 10 000 rpm。6 样 液 制 备 6.1 标 准 溶 液 制 备取 羟 基 -山 椒 素 对 照 品 10 mg（ 精 确 至 0.1 mg） ， 置 于 烧 杯 中 ， 用 色 谱 级 甲 醇 溶 解 ， 定 容 至 10 mL；用 色 谱 级 甲 醇 稀 释 制 成 浓 度 为 5 g/mL、 10 g/mL、 20 g/mL、 30 g/mL、 40 g/mL、 50 g/mL的 对 照 品工 作 溶 液 ， 待 测 。6.2 样 品 液 制 备6.2.1 干 花 椒取 混 合 均 匀 的 花 椒 粒 100
9、g， 用 高 速 粉 碎 机 粉 碎 后 过 20目 筛 ， 混 匀 。 称 取 1 g（ 精 确 至 0.0001 g） 粉 碎混 匀 后 的 样 品 置 于 具 塞 烧 瓶 中 ， 加 甲 醇 50 mL， 超 声 萃 取 0.5 h， 冷 却 至 室 温 ， 转 移 至 100 mL容 瓶 ， 甲 醇定 容 ， 移 取 上 清 液 10 mL于 50 mL容 量 瓶 定 容 ， 经 0.22 m滤 膜 过 滤 ， 待 测 。6.2.2 鲜 花 椒 取 混 合 均 匀 的 鲜 花 椒 粒 200 g。 经 组 织 捣 碎 机 捣 碎 后 ， 称 取 5 g(精 确 至 0.000 1 g）
10、 粉 碎 混 匀 后 的 样 品置 于 具 塞 烧 瓶 中 ， 加 甲 醇 50 mL， 超 声 萃 取 0.5 h， 冷 却 至 室 温 ， 转 移 至 100 mL容 瓶 ， 甲 醇 定 容 ， 移 取 上清 液 10 mL于 50 mL容 量 瓶 定 容 ， 经 0.22 m滤 膜 ， 待 测 。6.2.3 花 椒 粉称 取 1 g(精 确 至 0.000 1 g） 粉 碎 混 匀 后 的 样 品 置 于 具 塞 烧 瓶 中 ， 加 甲 醇 50 mL， 超 声 萃 取 0.5 h， 冷 却至 室 温 ， 转 移 至 100 mL容 瓶 ， 甲 醇 定 容 ， 经 0.22 m滤 膜 过
11、 滤 ， 待 测 。6.2.4 花 椒 油 树 脂取 膏 状 或 固 体 油 树 脂 样 品 置 于 50 水 浴 锅 中 溶 解 ， 摇 匀 。 精 密 称 取 0.2 g（ 精 确 至 0.0001 g） 样 品 置于 烧 杯 中 ， 加 甲 醇 50 mL， 超 声 萃 取 0.5 h， 冷 却 至 室 温 ， 转 移 至 100 mL容 瓶 ， 甲 醇 定 容 ， 经 0.22 m滤膜 过 滤 ， 待 测 。 6.2.5 花 椒 油花 椒 油 摇 匀 ， 精 密 称 取 0.2 g（ 精 确 至 0.0001 g） 置 于 具 塞 烧 瓶 中 ， 加 甲 醇 50 mL， 超 声 萃
12、取 0.5 h，冷 却 至 室 温 ， 转 移 至 100 mL容 瓶 ， 甲 醇 定 容 ， 0.22 m滤 膜 过 滤 ， 待 测 。7 分 析 计 算 GH/T 1291 2020 3 7.1 色 谱 条 件 色 谱 柱 ： C18反 相 柱 ， 4.6150 mm， 5.0 m， 或 性 能 相 当 者 。 流 动 相 ： 乙 腈 1%冰 醋 酸 水 溶 液 （ 40:60， V/V） 。 流 速 ： 1.5 mL/min。 柱 温 ： 40 。 进 样 量 ： 20 L。 检 测 波 长 ： 270 nm。7.2 标 准 曲 线 的 绘 制按 测 定 条 件 （ 7.1） 对 系 列
13、 对 照 品 工 作 溶 液 （ 6.1） 进 行 测 定 ， 以 色 谱 峰 的 峰 面 积 为 纵 坐 标 ， 对 应 工作 溶 液 的 以 浓 度 为 横 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 。7.3 样 品 测 定 按 测 定 条 件 （ 7.1） 对 样 品 液 （ 6.2） 进 行 测 定 ， 样 品 液 中 的 花 椒 酰 胺 根 据 保 留 时 间 和 光 谱 定 性 。 由样 品 液 的 花 椒 酰 胺 类 物 质 的 特 征 峰 总 面 积 ， 从 标 准 曲 线 上 查 出 相 应 的 羟 基 -山 椒 素 浓 度 ， 样 品 液 的 响应 值 应 在 仪 器 测 定 的
14、 线 性 范 围 之 内 ， 超 出 线 性 范 围 的 供 试 样 品 液 需 用 甲 醇 稀 释 后 测 定 。7.4 结 果 计 算以 4 种 花 椒 麻 酰 胺 类 物 质 面 积 总 和 作 为 供 试 品 中 花 椒 麻 酰 胺 面 积 。 供 试 品 中 花 椒 麻 酰 胺 总 含 量 以 羟基 -山 椒 素 计 ， 按 公 式 （ 1） 计 算 。 3-10 mCVKX . (1)式 中 ：X供 试 品 中 花 椒 酰 胺 总 含 量 ， 单 位 为 毫 克 每 克 （ mg/g） ； C供 试 品 溶 液 中 花 椒 麻 素 的 峰 面 积 对 应 的 质 量 浓 度 ， 单
15、 位 为 微 克 每 毫 升 （ g/mL） ；V供 试 样 品 工 作 液 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；K供 试 样 品 工 作 液 稀 释 倍 数 ；m供 试 品 的 称 样 量 ， 单 位 为 克 （ g） ；取 重 复 性 条 件 下 获 得 的 绝 对 差 值 不 大 于 算 术 平 均 值 的 5 %的 两 次 测 定 值 的 算 术 平 均 值 作 为 测 定 结果 ， 结 果 保 留 小 数 点 后 2 位 。 GH/T 1291 2020 4 AA附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）典 型 高 效 液 相 色 谱 图A.1 羟 基 -山 椒 素 典 型 高 效 液 相 色 谱 图 见 图 A.1。 注 ： 1 羟 基 - -山 椒 素 图 A.1 羟 基 -山 椒 素 典 型 高 效 液 相 色 谱 图A.2 样 品 液 典 型 高 效 液 相 色 谱 图 见 图 A.2。 注 ： 1 羟 基 -山 椒 素 2 羟 基 -山 椒 素 3 羟 基 -山 椒 素 4 羟 基 -山 椒 素图 A.2 样 品 液 典 型 高 效 液 相 色 谱 图_
