1、ICS 67.050B 36 G H中 华 人 民 共 和 国 供 销 合 作 行 业 标 准GH/T 1293 2020玫 瑰 茄 红 色 素 含 量 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 Determination of Roselle red pigment contentHigh-performance liquidchromatography 2020-06- 04发 布 2020- 09-01实 施中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 发 布 GH/T 1293 2020 I 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.1 2009给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 中
2、华 全 国 供 销 合 作 总 社 提 出 。本 标 准 由 全 国 辛 香 料 标 准 化 技 术 委 员 会 （ SAC/TC 408） 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 中 华 全 国 供 销 合 作 总 社 南 京 野 生 植 物 综 合 利 用 研 究 院 、 江 苏 省 理 化 测 试 中 心 、 江苏 佳 信 检 测 技 术 有 限 公 司 、 南 京 市 高 淳 区 综 合 检 验 检 测 中 心 、 安 徽 华 测 检 测 技 术 有 限 公 司 、 谱 尼 测 试 集团 江 苏 有 限 公 司 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 高 宏 、 黄 晓 德 、 赵 伯
3、 涛 、 付 琳 、 罗 亮 、 单 春 生 、 钱 骅 、 金 枝 、 陈 仕 荣 、 张 卫 明 、张 锋 伦 、 陈 斌 、 施 祖 灏 、 殷 辉 莉 、 金 泽 、 郭 芳 芳 。 GH/T 1293 2020 1 玫 瑰 茄 红 色 素 含 量 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 玫 瑰 茄 红 色 素 中 主 要 着 色 物 质 总 含 量 的 高 效 液 相 色 谱 测 定 方 法 。本 标 准 适 用 于 玫 瑰 茄 花 萼 及 玫 瑰 茄 红 产 品 的 分 析 与 检 验 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文
4、件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 格 和 试 验 方 法 GB/T 12729.2 香 辛 料 和 调 味 品 取 样 方 法3 术 语 与 定 义3.1 玫 瑰 茄 红 色 素 roselle red pigment玫 瑰 茄 花 萼 中 所 含 的 飞 燕 草 素 葡 萄 糖 苷 、 矢 车 菊 素
5、葡 萄 糖 苷 等 主 要 着 色 物 质 。3.2 玫 瑰 茄 红 roselle red由 玫 瑰 茄 花 萼 中 提 取 制 备 的 红 色 素 产 品 。 4 原 理试 样 中 的 主 要 着 色 物 质 经 水 、 甲 醇 或 乙 醇 的 强 酸 性 溶 液 提 取 后 ， 置 于 沸 水 浴 中 进 行 水 解 为 苷 元 ， 如矢 车 菊 素 、 飞 燕 草 素 等 着 色 物 质 ， 经 过 高 效 液 相 色 谱 柱 进 行 分 离 后 用 可 见 光 检 测 器 于 530 nm下 进 行 检 测 ，以 标 准 品 保 留 时 间 进 行 定 性 ， 外 标 法 进 行 定
6、 量 。5 试 剂 与 仪 器 设 备5.1 试 剂5.1.1 水 ： GB/T6682规 定 的 一 级 水 。5.1.2 甲 醇 ： 色 谱 纯 。5.1.3 无 水 乙 醇 ： 色 谱 纯 。 5.1.4 甲 酸 ： 色 谱 纯 。5.1.5 盐 酸 ： 分 析 纯 。 GH/T 1293 2020 2 5.1.6 10%盐 酸 甲 醇 溶 液 （ V/V） ： 取 10 mL 浓 盐 酸 、 90 mL 甲 醇 混 匀 。5.1.7 提 取 溶 剂 ： 无 水 乙 醇 、 水 、 浓 盐 酸 按 照 体 积 比 2 1 1 的 比 例 混 合 。5.1.8 飞 燕 草 色 素 ： CA
7、S 号 528-53-0， 纯 度 96%。5.1.9 矢 车 菊 素 ： CAS 号 528-58-5， 纯 度 98%。5.2 仪 器 与 材 料5.2.1 高 效 液 相 色 谱 仪 ， 配 有 可 见 光 检 测 器 。5.2.2 分 析 天 平 ， 感 量 0.001 g 和 0.000 1 g。5.2.3 离 心 机 ， 转 速 4000 r/min。5.2.4 高 速 粉 碎 机 。5.2.5 微 孔 滤 膜 ， 孔 径 0.22 m。 5.2.6 容 量 瓶 。5.2.7 微 量 进 样 器 。6 试 样 处 理6.1 玫 瑰 茄 红50 真 空 干 燥 后 ， 于 室 温 下
8、 避 光 密 闭 保 存 。6.2 玫 瑰 茄 花 萼50 真 空 干 燥 后 ， 经 高 速 粉 碎 机 粉 碎 过 20目 筛 。7 试 液 的 制 备 7.1 样 品 溶 液按 玫 瑰 茄 红 0.2 g（ 精 确 至 0.000 1 g） 、 玫 瑰 茄 花 萼 5 g（ 精 确 至 0.001 g） 称 样 量 称 取 样 品 ， 于 具 塞 三角 瓶 中 ， 加 入 50 mL提 取 溶 剂 ， 摇 匀 后 ， 超 声 提 取 30 min， 提 取 温 度 40 ， 冷 却 至 室 温 ， 用 提 取 溶 剂 定容 至 500 mL， 取 10 mL于 沸 水 浴 中 水 解 1
9、 h， 取 出 冷 却 ， 定 容 至 100 mL， 用 0.22 m微 孔 滤 膜 过 滤 ， 备 测 。7.2 混 合 标 准 工 作 溶 液准 确 称 取 飞 燕 草 色 素 、 矢 车 菊 素 的 标 准 品 5 mg（ 精 确 至 0.000 1 g） ， 分 别 用 10 mL的 10 %盐 酸 甲 醇溶 液 溶 解 后 ， 混 匀 并 定 容 至 100 mL， 即 为 50 g/mL的 混 合 标 准 液 母 液 。 准 确 移 取 玫 瑰 茄 红 色 素 混 合 标准 溶 液 母 液 ， 用 10 %盐 酸 甲 醇 溶 液 稀 释 成 质 量 浓 度 分 别 为 1.25
10、g/mL、 2.5 g/mL、 5.0 g/mL、 10.0 g/mL、20.0 g/mL的 系 列 标 准 工 作 溶 液 ，8 测 定 8.1 高 效 液 相 色 谱 条 件 色 谱 柱 ： C18柱 ， 250 mm4.6 mm5 m 或 性 能 相 当 者 ； 流 动 相 ： 0.5 %甲 酸 水 溶 液 ， 0.5 %甲 酸 乙 腈 溶 液 ； 检 测 波 长 ： 530 nm； GH/T 1293 2020 3 柱 温 ： 30 ； 流 速 ： 0.6 mL/min; 进 样 量 ： 20 L； 梯 度 洗 脱 条 件 见 表 1。 表 1 梯 度 洗 脱 表时 间 /min 0.
11、5 %甲 酸 水 溶 液 /% 0.5 %甲 酸 乙 腈 溶 液 /%0 95 515 55 45 20 95 530 95 58.2 标 准 曲 线 绘 制按 8.1色 谱 条 件 ， 分 别 将 系 列 标 准 工 作 溶 液 注 入 液 相 色 谱 仪 进 行 测 定 。 以 测 得 的 峰 面 积 为 纵 坐 标 ，对 应 的 标 准 溶 液 质 量 浓 度 为 横 坐 标 ， 绘 制 标 准 曲 线 。8.3 色 谱 分 析按 8.1色 谱 条 件 ， 将 样 品 溶 液 （ 7.1)注 入 液 相 色 谱 仪 进 行 测 定 ， 以 保 留 时 间 定 性 ， 以 样 品 溶 液
12、峰 面 积带 入 标 准 曲 线 中 定 量 ， 样 品 中 玫 瑰 茄 红 色 素 质 量 浓 度 应 在 标 准 工 作 曲 线 质 量 浓 度 范 围 内 ， 超 出 线 性 范 围的 试 液 应 经 稀 释 后 测 定 。 9 结 果 计 算样 品 中 玫 瑰 茄 红 色 素 总 含 量 为 飞 燕 草 素 和 矢 车 菊 素 含 量 之 和 。 含 量 以 质 量 分 数 X计 ， 单 位 为 微 克 每克 （ g/g） ， 按 式 （ 1） 计 算 。 mVKCX i .(1)式 中 ：X 样 品 中 飞 燕 草 素 与 矢 车 菊 素 的 含 量 之 和 ， 单 位 为 微 克
13、每 克 （ g/g） ；V 定 容 体 积 ， 单 位 为 （ mL） ；m 试 样 质 量 ， 单 位 为 克 （ g） ；C i样 品 待 测 液 中 组 分 i的 峰 面 积 对 应 的 质 量 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 （ g/mL） 。K样 品 待 测 液 稀 释 倍 数 。取 绝 对 差 值 不 超 过 算 数 平 均 值 10 %的 两 次 测 定 值 的 算 术 平 均 值 作 为 测 定 结 果 ， 计 算 结 果 保 留 小 数点 的 后 2位 数 字 。 GH/T 1293 2020 4 AA附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）典 型 液 相 色 谱 图A.1 对 照 品 典 型 色 谱 图 见 图 A.1。 注 ： 1 飞 燕 草 色 素 2 矢 车 菊 素 图 A.1 标 准 品 液 相 色 谱 图A.2 玫 瑰 茄 红 典 型 液 相 色 谱 图 见 图 A.2。 注 ： 1 飞 燕 草 色 素 2矢 车 菊 素 图 A.2 玫 瑰 茄 红 液 相 色 谱 图_
