1、ICS 65.020.20 CCS B 05 DB15 内 蒙 古 自 治 区 地 方 标 准 DB15/T 2045 2020 甜菜组培快繁技术规程 Technical code of practice of culture and rapid propagetion on sug arbeet 2020-12-24 发布 2021-01-24 实施 内蒙古自治区市场监督管理局 发布 DB15/T 2045 2020 I 前 言 本 文件 按照 GB/T 1.1-2020标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则 的 规定 起草。 本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。 本文件由内蒙
2、古自 治区农业标准化技术委员会 （ SAM/TC 20） 归 口。 本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。 本文件主要起 草人：白晨、李晓东、张惠忠、张自强、王良、 韩平安、张必周、赵尚敏、付增娟、 鄂圆圆、郑文哲、张辉。 DB15/T 2045 2020 1 甜菜组培快繁技术规程 1 范围 本文件确立了培养基、外植体的获取、灭菌与萌发、无菌苗获取、甜菜组培扩繁和移栽等技术要求。 本文件适用于甜菜组培快繁技术操作的全过程。 2 规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件。 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 种球 bulb 甜菜的果实。 3.2 腋芽 axillary bu
3、d 发生于叶的近轴面与茎的夹角处的定芽。 3.3 花序 inflorescence 花序轴及其着生在上面的花的通称。 4 培养基 4.1 琼脂粉培养基 用于甜菜 种球的萌发。成分为（ 1 L）：琼脂粉 7.5 g。 4.2 诱导分化培养基 用于甜菜无菌苗诱导分化培养。成分为（ 1 L）： MS培养基 4.74 g，蔗糖 30 g， NAA（萘乙酸） 0.7 mg， KT（激动素） 1.2 mg，琼脂粉 7.5 g。 4.3 继代培养基 DB15/T 2045 2020 2 用于甜菜无菌苗的继代培养。成分为（ 1 L）： MS培养基 4.74 g， 蔗糖 30 g， NAA 0.5 mg， KT
4、 0.4 mg， 琼脂粉 7.5 g。 4.4 生根培养基 用于甜菜无菌苗的生根培养。成分为（ 1 L）： MS培养基 4.74 g， 蔗糖 30 g， NAA 1.2 mg， 琼脂粉 7.5 g。 5 外植体的获取 5.1 种球的获取 + 选取健康、籽粒饱满、外观完好的甜菜种球。 5.2 腋芽的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取幼嫩主枝或侧枝。 5.3 花序的获取 在甜菜生殖生长期，选择生长健壮、无损伤、无病虫害的甜菜植株，剪取现蕾花序的末端约 20 cm。 6 灭菌与萌发 6.1 灭菌前准备 制备无菌水、 75 %酒精， 0.1 %升汞， 80 %次氯酸
5、钠。 6.2 种球消毒 将甜菜种球 磨光 ，用百菌清 （烟剂型） 密闭熏蒸 24 h后，在超净工作台中移至灭过菌的三角瓶中， 随后用 75 %酒精消毒 2 min， 无 菌水漂洗 3 次 ，接着用 0.1 %的升汞处理 20 min， 无 菌水漂洗 3 次，最后 将消毒后的种子接种于 琼脂粉 培养基上 ，每三角瓶（ 100 ml） 25粒。 6.3 腋芽消毒 取回的主枝或侧枝剪成保留 1 2个腋芽小段，装入烧杯放在自来水下冲洗 1 h，冲洗后在超净工作 台上用 75 %酒精消毒 1 min，无菌水洗 3 次，接着用 80 %次氯酸钠消毒 12 min，无菌水洗 3 次，洗完后 按照形态学上端向
6、上接种到继代培养基中， 每三角瓶（ 100 ml） 6个小段 。 6.4 花序消毒 室外取回的花序放入烧杯中，放到自来水下冲洗花序 1 h，冲洗后将花序切成 1.5 cm左右长度的花 序小段，在超净工作台上将花序小段首先用 75 %酒精消毒 1 min，无菌水洗 3 次，接着用 80 %次氯酸钠 消毒 2 min 3 min，无菌水洗 3 次，洗完后按照形态学上端向上接种到继代培养基中， 每三角瓶（ 100 ml） 6个小段 。 7 无菌苗获取 7.1 种球成苗 DB15/T 2045 2020 3 置于组培室培养， 23 条件下进行 培养 ， 7 d 10 d即可萌发。待芽长 2.0 cm
7、2.5 cm时，带子 叶一起切下，接种到新的继代培养基中。培养环境： 温度 23 ，光照强度 3000 Lux，光照时间 14 h。 培养 20 d 25 d成苗。 7.2 腋芽成苗 在组培室内培养，培养环境： 温度 23 ，光照强度 3000 Lux，光照时间 14 h。腋芽培养 20 d 25 d 即可长出新芽，切下新芽接种到新的继代培养基上，约 20 d可得到健壮无菌苗。 7.3 花序成苗 在组培室内培养，培养环境： 温度 23 ，光照强度 3000 Lux，光照时间 13 h。花序培养 30 d 40 d 即可长出新芽。切下新芽接种到新的继代培养基上，约 20 d可得到健壮无菌苗。 8
8、 甜菜组培扩繁 8.1 诱导分化培养 在超净工作台上， 选取健壮 无菌苗 ， 接种于分化培养基中进行分化诱导培养 。培养环境： 温度 23 ， 光照强度 3000 Lux，光照时长为 14 h。 8.2 继代培养 当诱导的丛生芽长到约 1 cm 2 cm，在超净工作台中将丛生芽分切为单苗，接种于 继代 培养基中进 行继代培养 。培养环境： 温度 23 ，光照强度 3000 Lux，光照时间 14 h。 8.3 生根培养 将生长健壮的丛生芽分切成 1 cm 2 cm单芽， 接种 到生根 培养基中 。 培养 环境： 温度 23 ，光照 强度 3000 Lux，光照时间 14 h。 20 d 30 d即可诱导出新生根。 9 移栽 9.1 炼苗 去掉封口膜，在组培室锻炼 2 d 3 d。 9.2 室内移栽 选择根系生长健壮的组培苗从三角瓶中移出 ，用自来水浸泡根部 12 h，洗净根部残留培养基，移栽 到花盆中（育苗土由蛭石和田园土构成，二者比例为 1:1），并遮阳，定期浇水，室内培养 7 d 14 d。 9.3 大田移栽 待盆栽幼苗生长至 4-6片真叶时，平均气温稳定在 10 以上时，选择早上或者傍晚移入大田。
