1、ICS 65.020.20B 05 DB3301浙 江 省 杭 州 市 地 方 标 准DB 3301/T 1082 2018堇 叶 紫 金 牛 组 培 繁 育 技 术 规 程 2018 - 06 - 20 发 布 2018- 07 - 20 实 施杭 州 市 质 量 技 术 监 督 局 发 布 DB3301/T 1082 2018 I 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.1 2009 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 的 结 构 和 编 写 给 出 的 规 定 起 草 。本 标 准 由 杭 州 市 林 业 水 利 局 提 出 并 归 口 。本 标 准 主 要 起 草 单
2、 位 ： 杭 州 市 园 林 绿 化 股 份 有 限 公 司 、 杭 州 市 林 木 种 苗 管 理 中 心 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 杨 浩 、 孙 英 坤 、 胡 亚 芬 、 高 凯 、 陈 林 敬 、 魏 建 芬 、 樊 靖 、 姚 涛 、 邱 影 、 崔 晓 燕 、王 霁 、 李 红 霞 。 DB3301/T 1082 2018 1 堇 叶 紫 金 牛 组 培 繁 育 技 术 规 程1 范 围本 标 准 规 定 了 堇 叶 紫 金 牛 （ Ardisia violacea） 组 培 快 繁 过 程 中 的 外 植 体 制 备 、 组 织 培 养 、 炼 苗 、上 盆 、 容
3、 器 苗 管 理 、 苗 木 出 圃 、 档 案 管 理 等 内 容 。本 标 准 适 用 于 杭 州 市 范 围 内 堇 叶 紫 金 牛 的 组 培 繁 育 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 所 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文件 。 凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 NY/T 2306 2013 花 卉 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程DB33/T 17
4、9 林 业 育 苗 技 术 规 程3 母 株 选 择选 择 长 势 旺 盛 、 叶 背 暗 紫 色 、 叶 脉 清 晰 、 无 病 虫 害 的 植 株 作 为 组 培 繁 殖 母 株 ， 置 于 温 室 内 培 养 。4 外 植 体 制 备4.1 外 植 体 采 集选 择 健 壮 选 择 健 壮 、 无 病 虫 害 、 带 休 眠 腋 芽 的 新 发 茎 段 为 外 植 体 材 料 。 外 植 体 采 集 后 宜 当 日 进 行 消毒 处 理 ， 或 保 存 于 4 冰 箱 ， 保 存 时 间 不 宜 超 过 2d。 4.2 外 植 体 消 毒4.2.1 表 面 消 毒沿 叶 柄 基 部 切
5、除 外 植 体 材 料 的 叶 片 ， 用 小 毛 刷 蘸 取 少 量 洗 洁 精 轻 轻 刷 洗 茎 段 表 面 ， 反 复 刷 洗 叶 腋 附近 ， 用 自 来 水 冲 洗 干 净 ； 将 外 植 体 茎 段 切 段 ， 用 0.1%的 苯 扎 溴 铵 于 磁 力 搅 拌 器 上 进 行 消 毒 处 理 ,转 速 不宜 超 过 200转 /min； 处 理 时 间 与 茎 段 幼 嫩 程 度 选 择 5min 12min； 倒 掉 消 毒 液 ， 在 流 水 下 冲 洗 30min60min。4.2.2 深 度 消 毒将 表 面 消 毒 后 的 外 植 体 材 料 置 于 无 菌 操 作
6、台 上 ， 用 无 菌 水 冲 洗 外 植 体 茎 段 1次 ； 使 用 75%乙 醇 溶 液 摇晃 消 毒 处 理 ， 处 理 时 间 根 据 茎 段 幼 嫩 程 度 选 择 15s 90s； 倒 掉 乙 醇 溶 液 ， 用 1%次 氯 酸 钠 溶 液 摇 晃 消 毒 处理 ， 处 理 时 间 与 茎 段 幼 嫩 程 度 成 反 比 ， 宜 选 择 3s 10min； 倒 掉 消 毒 液 ， 用 无 菌 水 反 复 冲 洗 4 5次 ， 每次 5min。 DB3301/T 1082 2018 2 5 组 培 扩 繁5.1 培 养 基 制 备5.1.1 培 养 基 制 备 方 法参 照 NY/
7、T 2306 2013 花 卉 种 苗 组 培 快 繁 技 术 规 程 。5.1.2 培 养 基 配 方参 照 附 录 A。5.2 初 代 培 养5.2.1 将 外 植 体 茎 段 切 成 长 度 约 2cm 的 小 段 ， 并 带 有 1 个 休 眠 腋 芽 。5.2.2 用 无 菌 刀 片 切 除 小 段 下 端 （ 芽 向 上 ） 褐 化 部 分 ， 迅 速 接 种 到 初 代 培 养 基 上 。 5.2.3 培 养 条 件 ： 温 度 25 2 、 光 照 时 间 10h/d、 光 照 强 度 1500Lx 2000Lx， 相 对 湿 度 60% 65%。5.3 增 殖 培 养5.3.
8、1 将 新 发 的 侧 芽 嫩 茎 切 下 ， 接 种 到 增 殖 培 养 基 上 。5.3.2 培 养 条 件 ： 温 度 25 2 ， 光 照 时 间 12h/d， 光 照 强 度 2000Lx 2500Lx， 相 对 湿 度 为 60% 65%。5.3.3 培 养 约 40d 后 分 化 产 生 大 量 侧 芽 和 不 定 芽 丛 。5.4 壮 苗 培 养5.4.1 将 不 定 芽 丛 轻 轻 拨 散 成 单 个 不 定 芽 ， 将 伸 长 的 侧 芽 嫩 茎 切 下 ， 接 种 到 壮 苗 培 养 基 。5.4.2 培 养 条 件 为 温 度 25 2 、 光 照 时 间 12h/d、
9、 光 照 强 度 2000Lx 2500Lx、 相 对 湿 度 60% 65%。5.4.3 壮 苗 培 养 约 20d 后 ， 再 生 小 苗 达 到 叶 片 数 量 6 枚 以 上 、 高 度 5cm以 上 、 茎 粗 2mm 以 上 可 进 行 生根 培 养 。 5.5 生 根 培 养5.5.1 切 除 再 生 小 苗 基 部 愈 伤 组 织 ， 接 种 到 生 根 培 养 基 上 。5.5.2 培 养 条 件 ： 温 度 28 2 、 光 照 时 间 为 8h/d、 光 照 强 度 1000Lx 1500Lx、 相 对 湿 度 70% 80%。5.5.3 生 根 培 养 40d 50d
10、后 ， 不 定 根 或 主 根 数 量 达 到 4条 以 上 、 根 长 1cm 3cm、 叶 片 数 量 8 枚 以 上 、高 度 5cm 以 上 、 茎 粗 2mm以 上 可 进 行 炼 苗 。6 炼 苗6.1 炼 苗 条 件宜 选 择 温 室 。 炼 苗 控 制 条 件 ： 遮 光 率 90%以 上 、 温 度 20 25 、 相 对 湿 度 约 60%。6.2 炼 苗 方 法 将 组 培 瓶 苗 置 于 温 室 苗 床 上 驯 化 25d 30d； 移 栽 前 3d 4d松 动 组 培 瓶 盖 ， 部 分 打 开 ； 移 栽 前 1d 2d，完 全 打 开 组 培 瓶 盖 ， 并 加
11、入 少 量 无 菌 水 ， 无 菌 水 以 达 到 最 下 端 叶 片 为 宜 。7 移 栽 DB3301/T 1082 2018 3 7.1 基 质 准 备7.1.1 配 方选 用 粒 径 2cm 3cm的 松 鳞 作 为 炼 苗 基 质 。 基 质 应 理 化 性 能 稳 定 、 不 带 病 菌 、 虫 卵 、 杂 草 等 。7.1.2 分 装将 炼 苗 基 质 分 装 到 42cm 42cm 5cm 方 盘 ， 摆 放 至 苗 床 上 ， 基 质 表 面 与 方 盘 上 边 缘 齐 平 为 宜 。7.1.3 消 毒移 栽 前 7d使 用 0.2%高 锰 酸 钾 对 基 质 进 行 消 毒
12、 处 理 ， 消 毒 液 宜 浸 透 基 质 底 部 ， 并 用 塑 料 薄 膜 覆 盖 严 实 。7.2 移 栽7.2.1 轻 轻 取 出 生 根 苗 ， 用 清 水 洗 净 根 部 培 养 基 后 ， 以 3 株 4株 为 一 丛 植 入 炼 苗 基 质 中 ， 深 度 以 基 质 刚 覆 盖 根 系 为 宜 ， 密 度 以 4cm 4cm 为 宜 。7.2.2 生 根 苗 植 入 方 盘 后 浇 透 水 ， 均 匀 喷 洒 0.3%多 菌 灵 溶 液 ， 用 封 闭 小 拱 棚 覆 盖 约 30d。 小 拱 棚 内 温度 应 控 制 在 28 33 、 相 对 湿 度 约 80%。 覆
13、盖 期 间 可 适 当 打 开 小 拱 棚 两 端 通 风 以 调 节 温 度 、 相 对 湿 度 ；7.2.3 待 小 苗 长 出 新 的 须 状 根 并 恢 复 正 常 生 长 后 ， 打 开 小 拱 棚 两 端 通 风 7d 14d， 然 后 完 全 打 开 小 拱棚 培 养 6 个 月 以 上 。 通 风 期 间 应 及 时 观 测 基 质 水 分 变 化 ， 适 时 补 水 以 保 持 基 质 湿 润 。8 上 盆8.1 基 质 准 备基 质 配 方 为 50%珍 珠 岩 、 25%泥 炭 、 25%松 磷 （ 体 积 比 ） ， 充 分 拌 匀 备 用 。 基 质 应 理 化 性
14、能 稳 定 、 不带 病 菌 、 虫 卵 、 杂 草 等 。8.2 容 器 选 择 可 选 用 12cmX10cm营 养 钵 。8.3 上 盆容 器 中 装 填 1/2容 器 体 积 的 基 质 ， 将 方 盘 苗 单 株 放 入 容 器 中 间 ， 装 入 基 质 盖 住 根 系 并 墩 实 ， 基 质 低于 容 器 口 1cm左 右 。8.4 上 盆 苗 摆 放于 温 室 或 阴 盆 区 条 状 摆 放 ， 条 宽 1m 1.2m， 留 操 作 步 道 0.5m。9 容 器 苗 管 理9.1 遮 阴 遮 光 率 应 达 到 70%以 上 。9.2 水 分 管 理上 盆 后 及 时 浇 透
15、水 ， 隔 天 检 查 基 质 水 分 情 况 ， 水 分 不 足 的 及 时 补 浇 ； 梅 雨 季 应 注 意 排 水 。 DB3301/T 1082 2018 4 9.3 病 虫 害 防 治上 盆 1个 月 后 ， 喷 施 0.1% 0.3%除 蜗 灵 或 预 防 蜗 牛 危 害 ， 并 喷 施 0.1% 0.15%多 菌 灵 溶 液 预 防 病 害 。10 苗 木 出 圃10.1 出 圃 质 量 要 求无 病 虫 害 ； 1年 2年 生 容 器 苗 XXX， 2年 3年 生 容 器 苗 XXX。 叶 背 暗 紫 色 、 叶 脉 清 晰 ； 根 系 发 达 、 无机 械 损 伤 。10.
16、2 容 器 苗 出 圃按 DB33/T 179 执 行 。 10.3 苗 木 检 疫按 照 植 物 检 疫 条 例 实 施 细 则 （ 林 业 部 分 ） 进 行 检 疫 。10.4 包 装 与 运 输按 DB33/T 179 执 行 。11 档 案 管 理按 DB33/T 179 执 行 。 DB3301/T 1082 2018 5 AA附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）堇 叶 紫 金 牛 常 用 培 养 基 配 方A.1 堇 叶 紫 金 牛 常 用 培 养 基 配 方 表 A.1 堇 叶 紫 金 牛 常 用 培 养 基 配 方基 本 培 养 基 氯 吡 苯 脲 (CPPU)mg/L 萘
17、乙 酸 (NAA)mg/L 吲 哚 丁 酸 (IBA)mg/L 蔗 糖g/L 卡 拉 胶g/L 活 性 炭 (AC)g/L pH初 代 培 养 基 MS 0.15 0.30 0.10 0.20 30 7 5.8 6.2增 殖 培 养 基 MS 0.50 0.80 0.10 0.20 30 7 5.8 6.2壮 苗 培 养 基 MS 0.10 0.15 30 7 5.8 6.2生 根 培 养 基 1/2MS 0.50 0.80 0.50 0.80 20 7 0.5 6.0注 ： 1/2MS培 养 基 是 MS培 养 基 大 量 元 素 减 半 。A.2 堇 叶 紫 金 牛 基 本 培 养 基 成
18、 分 表 A.2 堇 叶 紫 金 牛 基 本 培 养 基 成 分 名 称 成 分 浓 度 (mg/l)大 量 元 素 NH4NO3 1650KNO3 1900CaCl22H2O 440MgSO47H2O 370KH2PO4 170微 量 元 素 KI 0.83H3BO3 6.20MnSO44H 2O 22.30ZnSO47H2O 8.60Na2MoO42H2O 0.25CuSO4 0.025CoCl26H2O 0.025铁 盐 FeSO47H2O 27.80Na2EDTA 37.30有 机 物 肌 醇 100.00盐 酸 硫 胺 素 1.00烟 酸 0.50盐 酸 吡 哆 醇 0.50甘 氨 酸 2.00蔗 糖 蔗 糖 30000 卡 拉 胶 卡 拉 胶 7000_
